针刺筋会穴阳陵泉对帕金森模型小鼠黑质TH表达的影响研究

目的:观察比较1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森小鼠模型及其接受针刺治疗后黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化。方法:以腹腔注射(30 mg/kg)MPTP诱导7 d形成帕金森小鼠模型,针刺双侧筋会穴"阳陵泉"及"舞蹈震颤区",1次/d,共治疗21 d。针刺结束后,采用免疫荧光组化检测小鼠脑黑质TH的表达变化。结果:在7 d造模后,模型组和针刺组TH阳性细胞显著丢失;治疗结束后,与模型组比较,针刺组TH阳性细胞数量增加。结论:MPTP可促进帕金森模型小鼠表达;针刺筋会穴阳陵泉可对MPTP诱导小鼠黑质多巴胺能神经有保护作用,能明显地减弱MPTP伤害性刺激引起的行为反应。

银杏平颤方及其拆方对帕金森病模型小鼠脑内线粒体酶复合体活性的影响

目的探讨银杏平颤方防治帕金森病的机理及其阻止帕金森病模型小鼠黑质多巴胺神经元凋亡的途径。方法取雄性C57BL/6J小鼠,分为正常组、模型组和4个中药组(即全方组、解毒方组、平肝方组和化瘀方组)。采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶腹腔注射建立帕金森病模型,分别于用药14天和28天处死,测定小鼠脑线粒体酶复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性。结果与正常组比较,模型组小鼠脑线粒体酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性明显降低(P<0.05,P<0.01),Ⅱ的活性无明显变化;与模型组比较,全方组和化瘀方组14天时脑线粒体酶复合体Ⅰ活性均显著提高(P<0.05),解毒方组14天、平肝方组28天、化瘀方组两个时段复合体Ⅱ的活性均显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,中药各组在14天时复合体Ⅳ活性均升高(P<0.05,P<0.01),平肝方组和化瘀方组在28天时显著升高(P<0.05)。结论银杏平颤方及其拆方可能通过部分抑制脑内线粒体酶复合体活性下降,维持线粒体的功能,阻止中脑多巴胺神经元的凋亡,以减缓帕金森病的进展。

电针对帕金森病模型小鼠黑质铁染色细胞和铁蛋白表达的影响

目的探讨电针防治帕金森病的作用机制。方法采用1-甲基-4-苯基1,2,3,6四氢吡啶腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,利用组织化学技术以及免疫组织化学技术观察电针对帕金森病小鼠脑黑质铁染色细胞和铁蛋白表达的影响。结果模型组1周、2周、4周小鼠黑质铁染色阳性细胞的数量较正常组明显增多,染色强度也明显增强(P<0.001;P<0.01;P<0.001),电针在3个存活期内均可明显减少帕金森病小鼠黑质铁阳性细胞的数量和染色强度(P<0.001;P<0.05;P<0.001);模型组1周、2周黑质部位铁蛋白的表达与正常组相比都有不同程度下降(P<0.01;P<0.001),而电针组2周帕金森病小鼠黑质铁蛋白的表达与模型组相比显著增加(P<0.01)。结论电针可以通过降低脑内铁的含量,同时增加铁蛋白的表达,从而提高帕金森病模型小鼠脑抗氧化能力,达到保护黑质多巴胺能神经元的目的。

黄芩苷对帕金森病小鼠模型的影响

目的研究黄芩苷对帕金森病小鼠模型的影响。方法 60只雄性C57BL小鼠随机分为模型组、黄芩苷组、美多巴组、正常对照组。模型组小鼠腹腔注射30 mg/kg MPTP;黄芩苷组分别给予100 mg/kg黄芩苷灌胃和腹腔注射30 mg/kg MPTP;美多巴组给予31 mg/kg美多巴灌胃,1次/d;正常组给予等量生理盐水,1次/d,15 d。对4组小鼠的运动功能、脑纹状体DA、脑组织GSH、GSH-Px、MDA含量进行测定和统计分析。结果模型组小鼠的悬挂实验、游泳实验分值均明显比黄芩苷组、美多巴组和正常对照组高(P<0.05);黄芩苷组的脑纹状体DA水平、GSH水平均明显比美多巴组和模型组高(P<0.05);黄芩苷组小鼠的脑纹状体GSHPx、MDA水平均显著低于美多巴组和模型组(P<0.05)。结论黄芩苷预防给药能够有效保护帕金森病小鼠的神经功能,其作用机制可能与促进脑内抗氧化物质GSH水平的有效提升有相关联系。

“肾脑相济”电针疗法对帕金森病模型小鼠影响

目的:探讨“肾脑相济”电针疗法防治帕金森病的作用机制。方法:采用腹腔注射1-甲基-4-苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)7d[20mg/(kg·d)]的方式建立帕金森病模型。用悬挂实验观测协调能力;用免疫组织化学方法观测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头分子(Iba-1)的阳性细胞数量;利用Elisa方法检测黑质和纹状体中炎性因子白介素-17(IL-17)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和胶质源性神经营养因子(GDNF)含量。结果:与空白组相比,模型组行为状态明显变差(P<0.05),与模型组相比,西药组与电针组行为状态明显改善(P<0.05);与空白组相比,模型组TH的阳性细胞数量明显减少,GFAP和Iba-1的阳性细胞数量明显增多(P<0.05);与模型组相比,电针组和西药组TH的阳性细胞数量明显增多,GFAP和Iba-1的阳性细胞数量明显减少(P<0.05);与空白组相比,模型组黑质和纹状体炎性因子IL-17、IL-6、TNF-α明显升高(P<0.05),胶质源性神经营养因子(GDNF)的表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,西药组和电针组黑质和纹状体炎性因子IL-17、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05),GDNF表达明显升高(P<0.05)。结论:“肾脑相济”电针疗法可以通过补益脑肾,调节肾和脑的功能,抑制胶质细胞活性从而降低脑内黑质和纹状体中炎性因子的表达,增加胶质源性神经营养因子的表达,从而改善帕金森病多巴胺能神经元周围环境而达到保护多巴胺能神经元的目的。

鱼藤酮和MPTP慢性帕金森病小鼠黑质共同差异蛋白研究

目的通过比较鱼藤酮和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)两种慢性帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠与对照组小鼠黑质蛋白表达谱,找出两种PD模型小鼠共同的差异蛋白,探索筛选出PD的疾病特异性蛋白。方法构建鱼藤酮和MPTP慢性PD小鼠模型组以及其各自的对照组1和对照组2,并进行行为学评价以及黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化。分别挖取黑质,提取总蛋白,进行双向凝胶电泳。运用PDQuest 8.0图像分析软件对鱼藤酮组与对照组1、MPTP与对照组2的电泳图谱分别进行分析,找出各自的差异表达蛋白。差异蛋白酶切后,MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定。最后将所得到的肽质量指纹图(PMF)进行数据库搜索以及生物信息学分析。结果鱼藤酮组与对照组1、MPTP组与对照组2小鼠间行为学差异具有统计学意义(P<0.05),且黑质TH阳性细胞计数差异也具有统计学意义(P<0.05)。鱼藤酮组与对照组1比较发现有22个差异蛋白,MPTP组与对照组2比较发现有28个差异蛋白,其中有7个为共同的差异蛋白。我们成功鉴定其中3个共同的差异蛋白:PPP2R1A、吡哆醛激酶、peroxiredoxin-2。结论鉴定出3个在PD蛋白质组学中少见报道的蛋白。这些蛋白水平的上调或下调可能与PD的发病密切相关,可作为PD的疾病特异性蛋白。

PD模型小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein基因对外周单核细胞浸润的影响

目的小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein(α-Syn)后,研究其对中脑发生外周单核细胞浸润的影响。方法本研究使用转突变型A53Tα-Syn基因的帕金森病小鼠模型(以下简称Pitx3/A53T小鼠),应用免疫荧光共定位技术检测2、12月龄的Pitx3/A53T及non-Transgenic(nTg)小鼠中脑黑质致密部(SNC)、腹侧背盖区(VTA)及黑质网状部(SNR)的P2Y12、CD11b、CD169和Iba-1的表达情况。结果免疫荧光结果显示,在2月龄的Pitx3/A53T和nTg小鼠,以及12月龄的nTg小鼠中脑部位(SNC、VTA、SNR),仅检测到中枢神经系统(CNS)小胶质细胞(P2Y12+CD11b+和CD169-Iba-1+)。在12月龄的Pitx3/A53T小鼠中脑部位,除了有CNS小胶质细胞外,其SNR部位还特异性存在外周单核细胞(P2Y12-CD11b+和CD169+Iba-1+)。此外,在2月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平较nTg小鼠高(P<0.05,SNC、VTA、SNR);12月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显低于nTg小鼠(P<0.01,SNC、VTA;P<0.001,SNR);与2月龄的小鼠相比,12月龄小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显降低(P<0.001,Pitx3/A53T;P<0.05,nTg)。结论小鼠中脑特异性表达突变型A53Tα-Syn后,其在老龄时中脑发生外周单核细胞浸润。而且小鼠中脑部位P2Y12的表达水平变化与年龄和突变型A53Tα-Syn关系密切。

补髓健脑方对帕金森小鼠行为学及脑内谷胱甘肽含量与其过氧化物酶活性的影响

目的 探讨补髓健脑方对帕金森病小鼠行为学及黑质内还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的影响。方法选用纯系C57BL老龄小鼠45只，随机分为假手术组、模型组和中药组。采用腹腔注射MPTP法制备帕金森病动物模型。给予中药补髓健脑方灌胃治疗。观察小鼠爬杆实验、悬挂实验评分的变化。榆测小鼠黑质内GSH含量、GSH-PX活性的改变。结果补髓健脑方可提高小鼠的爬杆实验与悬挂实验分数（P〈0．01），并町增加小鼠黑质内GSH含量、增强GSH—PX活性（P〈0．01）。结论补髓健脑方可改善PD小鼠的行为协渊能力，修复PD小鼠黑质神经元的损伤。