丁苯酞对帕金森病细胞模型JNK通路死亡受体途径相关凋亡因子的影响

目的探讨丁苯酞对帕金森病(PD)细胞模型JNK通路死亡受体途径相关凋亡因子p-JNK、Fas、Fas L的作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导的SH-SY5Y细胞PD模型。分为正常对照组(细胞正常培养,不加任何药物干预),MPP+组(培养的细胞中加入1 mmol·L^(-1)MPP+),丁苯酞+MPP+组(培养的细胞中加入10μmol·L^(-1)丁苯酞作用3 h后,再加入1 mmol·L^(-1)MPP+),SP600125+MPP+组(培养细胞中加入10μmol·L^(-1)JNK抑制药SP600125作用3 h后再加入1 mmol·L^(-1)MPP+)。应用噻唑蓝(MTT)法检测MPP+诱导的SH-SY5Y细胞增殖能力;Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;Western blotting印迹法检测相关凋亡蛋白p-JNK、Fas、Fas L的表达。结果与正常对照组细胞存活率(100.00±0.00)%比较,MPP+组细胞存活率降低,仅为(49.30±2.07)%(P<0.05),丁苯酞+MPP+组和SP600125+MPP+组细胞存活率高于MPP+组,存活率分别为(71.9±2.10)%和(76.4±2.80)%(P<0.05);与正常对照组细胞凋亡率(10.63±2.07)%比较,MPP+组细胞凋亡率升高,为(32.27±2.26)%,差异有统计学意义(P<0.05);与MPP+组比较,丁苯酞+MPP+组和SP600125+MPP+组细胞凋亡率下降,细胞凋亡率分别为(21.13±3.63)%和(19.15±2.63)%,差异有统计学意义(P<0.05)。与MPP+组比较,丁苯酞+MPP+组和SP600125+MPP+组凋亡因子p-JNK、Fas、Fas L蛋白的表达量下降(P<0.05)。结论丁苯酞对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有一定抑制作用,其机制可能是通过调节JNK通路死亡受体途径上p-JNK、Fas、Fas L的表达,抑制细胞凋亡发生来实现。

siRNA沉默Drp1对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响

目的探究siRNA沉默动力相关蛋白1(Drp1)后对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬以及细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,用1μm、5μm、10μm、20μm鱼藤酮进行处理24 h、48 h,MTT法检测细胞抑制情况。将细胞分为鱼藤酮最佳浓度处理组(20μm鱼藤酮处理,损伤组)、阴性转染组(损伤组基础上转染Drp1阴性序列)、Drp1siRNA处理组(损伤组基础上转染Drp1 siRNA)、Drp1抑制剂组(损伤组基础上添加Mdivi-1试剂)、自噬促进剂组(损伤组基础上添加雷帕霉素)。观察各组线粒体自噬情况、细胞线粒体功能相关蛋白(Mfn2、Drp1、NRF1)、自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3、P62)、凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)表达情况和细胞凋亡情况。结果与对照组相比,鱼藤酮处理组细胞抑制率均升高,随着浓度以及培养时间的增加,细胞抑制率逐渐增加(P<0.05)。损伤组、阴性转染组、自噬促进剂组LC3II定位在细胞线粒体,且细胞线粒体结构受损,外周出现自噬双层膜。与Drp1 siRNA转染组、Drp1抑制剂组相比,损伤组、阴性转染组、自噬促进剂组Drp1、LC3II、Beclin-1、Bax蛋白表达和细胞凋亡率升高,Mfn2、NRF1、P62、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Drp1参与鱼藤酮诱导帕金森病细胞线粒体自噬,沉默Drp1后可降低鱼藤酮诱导帕金森病细胞线粒体自噬以及细胞凋亡,具有保护作用。

长链非编码RNA细胞骨架调节RNA靶向微小RNA-1246对帕金森病模型细胞损伤的保护作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节RNA(CYTOR)靶向微小RNA(miR)-1246对帕金森病(PD)模型细胞损伤的影响。方法采用100μmol/L 1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP^(+))诱导SK-N-SH细胞建立PD细胞模型。Real-time PCR检测CYTOR和miR-1246表达。在SK-N-SH细胞中转染pcDNA-CYTOR或anti-miR-1246,或共转染pcDNA-CYTOR和miR-1246模拟物,经MPP^(+)处理后,采用流式细胞术分析细胞凋亡,试剂盒检测丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)活性。双荧光素酶报告基因实验分析CYTOR和miR-1246靶向关系。结果PD细胞模型中CYTOR表达量降低(P<0.05),miR-1246表达量升高(P<0.05)。过表达CYTOR或抑制miR-1246表达均可降低模型细胞凋亡率和MDA含量(P<0.05),并增加GSH活性(P<0.05)。MiR-1246是CYTOR的靶基因,CYTOR负性调控miR-1246表达。上调miR-1246可逆转CYTOR过表达对模型细胞凋亡和氧化损伤的影响(P<0.05)。结论LncRNA CYTOR靶向miR-1246可减轻PD模型细胞凋亡和氧化损伤。

miR-99a对帕金森模型细胞活力及ROS水平的影响

目的:分析miR-99a对帕金森病细胞模型作用。方法:采用Western blotting以及Real-time PCR方法,对miR-99a以及其靶基因FZD5表达水平进行研究。采用CCK-8方法,检测细胞存活力。结果:过表达miR-99a,可将MPP+抑制PC12细胞存活作用明显缓解,该作用是通过调控miR-99a/FZD5轴完成的。结论:miR-99a在帕金森病细胞模型中,可对MPP+导致的PC12细胞存活抑制作用明显缓解,是通过靶向及下调FZD5实现的。

SIRT2抑制对MPP^(+)诱导的帕金森病细胞模型凋亡和线粒体动态平衡的影响

探究siRNA敲减沉默信息调节因子2(SIRT2)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导的帕金森病细胞模型细胞损伤的影响和机制。CCK-8法检测不同浓度MPP+处理对体外培养小鼠海马神经元HT-22细胞生存率的影响。将细胞分为对照组、MPP^(+)最佳浓度处理组(1mmol/LMPP+处理组)、阴性转染组(对照组基础上转染SIRT2阴性序列)、SIRT2siRNA处理组(损伤组基础上转染SIRT2siRNA)。观察各组细胞凋亡情况,检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-9)、线粒体分裂及融合相关蛋白(Drp1、Fis1、OPA1、Mfn1、Mfn2)。与对照组相比,MPP+处理组细胞抑制率均升高,细胞抑制率随MPP+浓度增加而逐渐增加(P<0.05)。与SIRT2siRNA转染组相比,损伤组Bax、Caspase-9、Drp1、Fis1蛋白表达和细胞凋亡率升高,Bcl-2、Mfn1、Mfn2蛋白表达降低(P<0.05)。SIRT2在MPP+诱导帕金森病细胞模型中表达升高,抑制SIRT2可减轻MPP+诱导帕金森病细胞模型中细胞凋亡并促进线粒体融合,从而对神经元具有一定的保护作用。

五味子甲素对MPP^+致SH-SY5Y细胞ERK信号转导通路的影响

通过体外培养SH-SY5Y细胞,Tunel法观察五味子甲素(Schisandra A,Sch A)对MPP+染毒SH-SY5Y细胞形态的影响;激光共聚焦显微镜观察各组细胞核的变化;Western-Blot检测各组SH-SY5Y细胞中ERK及p-ERK蛋白表达水平的不同,探讨Sch A对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP+)引起的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及ERK信号转导通路的影响。结果发现,与正常对照组相比,1mmol/L MPP+染毒可引起SH-SY5Y细胞形态明显改变,凋亡细胞明显增多;各浓度组Sch A干预均可有效抑制SH-SY5Y细胞的凋亡。与对照组比较,MPP+组细胞中p-ERK蛋白表达明显抑制;而与MPP+染毒组相比,Sch A干预组p-ERK蛋白表达明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖效应。结果表明,MPP+具有促进SH-SY5Y细胞凋亡的作用,而Sch A能明显缓解MPP+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,该作用可能与ERK信号转导通路活性改变有关。