铜绿假单胞菌制剂在恶性肿瘤中的辅助治疗作用

当前,恶性肿瘤已越来越趋向于多方面的综合治疗.带有甘露糖敏感性血凝菌毛的铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa-mannosesensitive hemagglutinin,PA-MSHA)制剂是一类用于免疫治疗的生物制剂,正被应用于恶性肿瘤的治疗过程中.本文重点介绍PA-MSHA制剂对恶性肿瘤辅助治疗作用的研究进展.

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株对膀胱癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的 观察铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株（PA-MSHA）对膀胱癌细胞株的作用,探讨其作用机制.方法 使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测肿瘤细胞的增殖,荧光染色法检测细胞凋亡形态,分光光度法检测凋亡因子半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-2和Caspase-9的水平.结果 磷酸盐缓冲液（PBS）组作用T24和5637细胞A450值分别为1.31和1.62,PA-MSHA组A450值分别为0.28和0.41,两组差异有统计学意义（P＜0.05）;PA-MSHA处理后的膀胱癌细胞出现凋亡小体;PA-MSHA能够活化T24和5637细胞中Caspase-3及Caspase-9蛋白,与PBS组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 PA-MSHA可以抑制T24和5637细胞增殖,并诱导凋亡.

PA-MSHA疫苗增强急性髓细胞白血病源DC对Treg的抑制作用

目的:探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosawith mannose sensitive hemagglutina-tion pili,PA-MSHA)疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞(dendritic cells derived from acute myeloid leukemia,AML-DC)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)的抑制作用。方法:rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组,培养24h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞,加入各组AML-DC中诱导Treg,ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平,流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达,RT-PCR法检测Treg中Foxp3mRNA的表达水平。结果:PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态,且CDla、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达较对照组明显升高(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β(P<0.05),CD4、CD25的表达及Foxp3mRNA水平均较对照组明显降低(P<0.05)。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。结论:PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟,抑制初始T细胞向Treg的分化,增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。

PA-MSHA引起注射局部急性炎症及白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和Toll样受体4的表达改变

为研究皮下注射铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(Pseudomonas aeruginosa mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)注射液后局部组织的病理学改变及白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达情况,将30只小鼠随机分为两组,分别皮下注射PA-MSHA和生理盐水,在注射后6、12、24、48及72h取注射局部组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后观察病理形态改变,并用免疫组化染色和图像分析检测IL-17、TNF-α和TLR4表达水平。结果显示,小鼠皮下注射PA-MSHA后,在给药部位引起以中性粒细胞浸润为主的急性炎症;局部炎症灶中IL-17、TNF-α和TLR4表达在注射后6h升高,24h达到高峰,然后逐渐减低,至72h实验组与对照组无差异;3种炎症因子的表达与炎症反应程度相平行。结果表明,皮下注射PA-MSHA能引起局部组织急性炎症反应,且能改变局部免疫状态。

PA-MSHA预处理对严重脓毒症大鼠肠组织和腹腔灌洗液细胞因子和肠道ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的分析铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)预处理对严重脓毒症大鼠肠组织和腹腔灌洗液中细胞因子和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法取雄性SD大鼠30只,随机分为对照组(未建立脓毒症模型)、模型组(建立严重脓毒症模型)和实验组(建立严重脓毒症模型+给予PA-MSHA预处理),三组各10只,分别进行相应处理。通过苏木精-伊红染色观察三组大鼠病理学改变,采用酶联免疫吸附试验法对三组大鼠肠道内VCAM-1和ICAM-1水平进行检测,采用相同方法检测大鼠腹腔灌洗液和肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)的水平,并进行比较。结果对照组肠上皮细胞未见异常,肠腺体未见异常,未出现炎症细胞浸润;模型组和实验组均出现不同程度的肠上皮细胞破坏、毛细血管扩张、固有层水肿及炎症细胞浸润,但实验组肠道损伤程度较模型组明显减轻。模型组和实验组肠组织中VCAM-1和ICAM-1水平较对照组显著升高(P<0.05)。模型组和实验组腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-10的水平较对照组显著升高(P<0.05);实验组腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-10的水平较模型组显著下降(P<0.05)。模型组和实验组肠组织中TNF-α、IL-6及IL-10的水平较对照组显著升高(P<0.05);实验组肠组织中TNF-α和IL-6较模型组显著下降,IL-10的水平较模型组显著升高(P<0.05)。结论PA-MSHA预处理可促使局部细胞因子和VCAM-1及ICAM-1水平下降,从而可有效减轻脓毒症大鼠肠道炎症损害,缓解肠道炎症反应,减轻脓毒症病情进展,因此对脓毒症导致的肠道损伤具有良好的预防效果。

PA-MSHA抗肿瘤效应的免疫机制研究

目的研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)处理树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对其功能及激活T细胞杀伤肿瘤细胞效应的影响。方法取小鼠骨髓来源的DC,观察PA-MSHA体外处理后对DC表面分子、吞噬功能及T细胞杀伤功能的影响。结果 PA-MSHA处理的DC其表面分子CD40、I-E表达显著上升,吞噬功能显著下降,由DC诱导的活化T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应显著高于对照组。结论 PA-MSHA能有效促进DC成熟并增强抗肿瘤免疫效应。

PA-MSHA对脓毒症/严重脓毒症大鼠肠道ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PAMSHA)预给药对脓毒症/严重脓毒症大鼠肠道细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesionmolecule-1,ICAM-1)及肠血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表达的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠共40只,随机分为5组,空白组、脓毒症组、严重脓毒症组给予生理盐水注射液皮下注射0.3 ml/d,PA-脓毒症组、PA-严重脓毒症组预先PA-MSHA皮下注射0.3 ml/d,连续给药7 d,第8天根据Gonnert人粪便悬液腹腔注射法改良制造大鼠脓毒症/严重脓毒症模型。成模后监测生命体征,留取一部分肠组织,制作普通病理切片苏木精-伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色鉴定,另取部分肠组织并用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)大鼠肠ICAM-1、VCAM-1表达水平。结果 (1)HE染色结果显示与空白组对比,各组均发生形态改变;(2)五组之间肠道ICAM-1(F=33.337,P<0.001)、VCAM-1(F=12.714,P<0.001)表达水平差异有统计学意义;(3)进一步比较ICAM-1表达水平可知,脓毒症组表达水平高于PA-脓毒症组(P<0.05),严重脓毒症组表达水平低于PA-严重脓毒症组(P<0.05);(4)比较VCAM-1表达水平,脓毒症组表达水平高于PA-脓毒症组(P<0.05),严重脓毒症组表达水平与PA-严重脓毒症组相比差异无统计学意义(P=0.262)。结论 (1)腹腔感染导致的脓毒症/严重脓毒症均可使大鼠肠道ICAM-1、VCAM-1表达水平升高;(2)PA-MSHA预给药能抑制脓毒症大鼠肠道ICAM-1、VCAM-1的表达水平;(3)在严重脓毒症大鼠组中,所测得ICAM-1和VCAM-1水平不能准确反映出PA-MSHA对其作用,可能与肠上皮细胞和炎性细胞大量坏死有关。

PA-MSHA和吡柔比星膀胱灌注治疗的对比分析

目的探讨非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌患者行经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)后铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)和吡柔比星膀胱灌注治疗的有效性及安全性。方法选取行TURBT的非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌患者91例,根据膀胱灌注药物的不同分为实验组(41例)和对照组(50例),实验组患者术后24h内膀胱灌注PA-MSHA,对照组患者术后24h内膀胱灌注吡柔比星,随访患者规律灌注后的不良反应及肿瘤复发情况。结果实验组发生急性膀胱炎3例,血尿3例,发热2例,胃肠道反应1例,不良反应发生率为21.95%(9/41);复发例数为10例,术后6个月复发3例,术后12个月复发5例,术后24个月复发2例,总复发率为24.39%(10/41)。对照组发生急性膀胱炎8例,血尿5例,发热5例,胃肠道反应3例,不良反应发生率为42.00%(21/50);复发例数为11例,术后6个月复发6例,术后12个月复发4例,术后24个月复发1例,总复发率为22.00%(11/50)。结论 PA-MSHA和吡柔比星两种灌注药物对于预防非肌层浸润性膀胱癌患者TURBT术后复发的疗效差异无统计学意义,但两者不良反应的发生率存在差异,PA-MSHA的不良反应发生率低于吡柔比星。

3种膀胱灌注方案辅助治疗非肌层浸润性膀胱癌的疗效评估

目的评估表柔比星(EPI)+诱导灌注+维持灌注、EPI+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注、铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株(PA-MSHA)+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注3种方案对中高危非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)电切术后辅助治疗的有效性和安全性。方法回顾性分析182例经尿道膀胱肿瘤电切术后确诊为NMIBC患者的资料,依据术后灌注药物和灌注方法分为A组(EPI+诱导灌注+维持灌注)、B组(EPI+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注)、C组(PAMSHA+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注),各组按照肿瘤复发风险进一步分为高危组和中危组。随访2年,定期复查血尿常规、肝肾功能、心电图、泌尿系超声及膀胱镜检查,并记录膀胱癌复发情况以及膀胱灌注后不良反应的发生情况。结果 A、B、C组的不良反应发生率分别为42.86%(24/56)、38.24%(26/68)、18.97%(11/58);A、B两组不良反应发生率与C组比较,差异均有统计学意义(P=0.006、P=0.018)。A组高危患者与中危患者2年内肿瘤复发率分别为50.00%(10/20)、27.78%(10/36),B组高危患者与中危患者2年内肿瘤复发率分别为45.83%(11/24)、25.00%(11/44),C组高危患者与中危患者2年内肿瘤复发率分别为47.62%(10/21)、8.11%(3/37)。A、B两组高危患者2年内肿瘤复发率分别与C组高危患者比较,差异均无统计学意义(P=0.879、P=0.905);A、B两组中危患者2年内肿瘤复发率分别与C组中危患者比较,差异均有统计学意义(P=0.028、P=0.045)。结论 PA-MSHA+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注辅助治疗NMIBC的不良反应发生率较低。对于高危NMIBC,3种灌注方式的疗效无差别;对于中危NMIBC,PA-MSHA+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注效果最佳。