尿肾损伤分子-1预示常染色体显性多囊肾病早期发展速度

目的:探讨尿KIM-1水平与早期ADPKD患者病情进展的相关性,及其预示作用。方法:(1)收集临床确诊为ADPKD患者(CKD1,2期)及体检健康人群各40例,并取其晨起后第2次尿液标本,采用ELISA方法测定尿液中Kim-1浓度,比较多囊肾病人群与正常人群在Kim-1表达程度的差异;(2)用多囊肾患者肾脏体积增长速度判断疾病进展状况,用MRI肾脏成像的方法计算6个月间隔后肾脏体积增长情况;(3)去除肾脏总体积大于1500cm3的患者,以肾脏体积半年增长率2.7%为界,将患者划分为高平均速度组和低平均速度组,比较两组间KIM-1水平差异。结果:(1)多囊肾患者与正常人群相比,eGFR水平(采用CKD-EPI公式计算)差异无统计学意义(P>0.05),但尿中Kim-1水平多囊肾病组显著升高[(837.9±821.5)pg/mlvs(440.3±270.2)pg/ml,P<0.05];(2)多囊肾患者半年肾脏体积增长速度为(4.88±3.86)%,显著高于国外报道的多囊肾患者半年体积增长速度;(3)高平均速度组KIM-1水平高于低平均速度组(P<0.05)。结论:Kim-1作为肾小管损伤后出现的一种重要的生物标记物在多囊肾病患者群中表达显著升高,能预示早期肾脏体积并未发展到一定程度的多囊肾患者肾体积的增长快慢,但Kim-1在疾病进展中的作用机制仍需要进一步的实验研究阐明。

米扎格列净通过抑制钠-葡萄糖共转运体1的功能抑制常染色体显性多囊肾细胞增殖和纤维化

目的探究钠-葡萄糖共转运体1(SGLT1)抑制剂米扎格列净(MIZA)在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)中的作用。方法用蛋白质印迹法、qPCR、免疫荧光染色测定PKD1^(-/-)小鼠和PKD1^(+/+)小鼠肾脏组织、人肾癌旁组织和人ADPKD组织中SGLT1的表达和分布。用MIZA处理囊肿衬里上皮细胞OX161和肾小管上皮细胞UCL93,37℃孵育24、48和72 h后通过MTT实验和集落形成实验观察细胞增殖情况。以100μmol/L MIZA处理OX161细胞48 h后,通过qPCR测定细胞中α1-Ⅰ型胶原蛋白、α1-Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白1的mRNA表达量。用犬肾细胞MDCK 3D囊肿形成实验验证MIZA对囊肿形成的作用。通过mRNA-seq数据分析筛选UCL93细胞和OX161细胞、OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h后的OX161细胞的差异表达基因,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行通路富集分析。结果SGLT1在ADPKD患者和PKD1^(-/-)小鼠多囊肾组织中的表达水平较正常肾脏组织升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光染色发现SGLT1主要表达在囊肿衬里上皮细胞。在体外实验中,MIZA呈浓度和时间依赖性地抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,3D形成实验表明MIZA抑制了囊肿的形成。mRNA-seq数据分析和KEGG富集分析结果显示,OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h的OX161细胞的差异表达基因主要富集在PI3K-Akt、MAPK等信号通路,与OX161细胞和UCL93细胞的差异表达基因富集通路相同。结论SGLT1抑制剂MIZA可能通过PI3K-Akt、MAPK等通路抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,延缓多囊肾的生长,是ADPKD的一个潜在治疗靶点。

多囊蛋白-1在肾透明细胞癌及常染色体显性多囊肾病患者体液中含量的比较研究

目的比较多囊蛋白-1在肾透明细胞癌、常染色体显性遗传多囊肾病患者及正常人体液中的含量。方法随机选择在本院就诊的肾透明细胞癌患者20例、常染色体显性多囊肾病患者20例及正常健康查体者15例,留取血液及尿液标本各1份。以本实验室制备的鼠源抗多囊蛋白-1单克隆抗体为捕获抗体,以兔源抗多囊蛋白-1多克隆抗体为检测抗体,采用夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测体液中多囊蛋白-1的含量。结果肾透明细胞癌患者血液中多囊蛋白-1含量为(53.613±8.697)μg/L,显著高于多囊肾病患者血液中含量(6.745±3.215)μg/L(P<0.01)及正常人血液中含量(20.386±14.234)ng/ml(P<0.01)。肾透明细胞癌患者尿液中多囊蛋白-1含量为(10.228±7.989)μg/L,显著低于多囊肾病患者尿液中含量(48.268±16.452)ng/ml(P<0.01),与正常人尿液中含量(10.083±8.941)μg/L比较无统计学差异。结论多囊蛋白-1属于一个新的跨膜蛋白家族,在肾透明细胞癌患者血液中表达增加,而在多囊肾患者血液中表达减少,为进一步揭示多囊蛋白-1的功能提供实验室依据。

常染色体显性遗传性多囊肾病基因型与临床表型的关系

目的 :研究华东地区汉族人常染色体显性遗传性多囊肾病 (ADPKD)基因型与临床表现型的关系。 方法 :利用聚合酶链反应 单链构象多态性分析方法对 79例ADPKD患者进行基因诊断 ,收集经基因诊断确定为 2型或 1型ADPKD患者的临床资料 ,以发病年龄、肝囊肿、高血压、尿路感染、尿路结石、血尿等主要临床症状为参数 ,通过统计学方法研究该病基因型与临床表现型的关系。 结果 :2型患者的平均发病年龄比 1型患者晚 9.7岁 [(4 6 .0 9± 9.86 )岁vs (36 .38± 1 1 .35 )岁 ],两者有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,主要临床症状的出现在两组间无显著性差异。 结论 :ADPKD2型患者与 1型患者临床症状相似 。

常染色体显性遗传多囊肾病间质病变

常染色体显性遗传多囊肾病(Autosomal dominant polycystic kidney disease, ADPKD)是一种常见的单基因遗传病。它是导致终末期肾衰的重要疾病之一,发病率约为1/1000~1/400,约占终末期肾病病因的10%。目前尚缺乏有效治疗药物。近年来,国内外对其发病机制、诊断及治疗方面进行了很多相关的研究及其论述,主要集中在囊泡的发生发展和囊液分泌等方面,对肾脏间质参与的病变过程,如间质的炎症和纤维化,探讨较少。本文主要综述ADPKD发病机制及其间质病变在ADPKD发病中的作用。

常染色体显性小管间质肾病-肝细胞核因子1β的临床特点和基因诊断

目的探讨常染色体显性小管间质肾病-肝细胞核因子1β(ADTKD-HNF1β)的临床特点和基因诊断。方法 2016年6月我院收治了1例肾衰竭、接受规律透析的男性患者(12岁),详细总结其临床资料,并利用二代测序技术对患者及其父母外周血进行基因检测。利用Sanger法对突变基因进行验证。结果患者既往"健康",无明确诱因出现终末期肾脏病(ESRD)。该患者的症状特点为,发育正常,无血尿,轻度蛋白尿,重度贫血,肝酶持续升高。尿蛋白电泳显示肾小管性蛋白尿为主(59.9%),尿糖阳性(血糖正常),尿β2微球蛋白、α1微球蛋白明显升高,显示明确的肾小管间质损伤。B超、CT检查显示双肾多发囊肿。共检测了163个肾病相关基因,发现患者HNF1β基因携带1个c.1413dupC(p.V472fsX78)杂合突变。患者父母均未检测到此突变。患者最终确诊为ADTKD-HNF1β。结论 HNF1β基因突变为诱发ADTKD的致病突变之一,可引起严重的肾小管间质损伤、多发肾囊肿和肝酶异常,导致ESRD,应引起足够警惕。本病例中该位点基因突变尚未见有文献报道。

cAMP-PKA信号通路在多囊肾病间质病变中作用的研究

目的本课题拟采用MDCK细胞模型、胚胎肾模型和Pkd1基因敲除小鼠模型系统研究cAMP-PKA信号通路在ADPKD肾间质病变中的作用;同时以TGF-β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）活化的信号通路为靶标,观察cAMP-PKA信号通路对其调节作用.方法在体模型采用Pkd1flox/＋;Ksp-Cre小鼠,分别收集出生后1,3,5,7天小鼠肾脏,分为WT（Wild-type,WT）和Pkd1肾组织特异性敲除的纯合子两组,用Westernblot方法检测其肾脏内TGF-β1、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）和纤连蛋白（fibronectin,FN）的蛋白表达水平变化.取13-5天小鼠胚胎肾,进行离体组织培养,实验组于第0天开始给予8-Br-cAMP刺激,显微镜拍摄各组肾组织形态学图片,并于第6天提取肾组织蛋白,Westernblot方法检测纤维化相关蛋白表达水平变化.体外模型采用MDCK（Madin-Darby canine kidney）细胞,给以不同条件刺激,提取蛋白.结果Pkd1敲除小鼠肾组织中TGF-β1,CTGF,FN的蛋白表达水平明显高于WT小鼠.8Br-cAMP可促进胚胎肾组织中FN,typeIcollagen蛋白表达水平升高.Forskolin（10μmol·L^-1）孵育MDCK细胞可以引起纤维化相关蛋白TGF-β1、CTGF、FN和typeIcollagen的表达水平升高,且该作用可被PKA抑制剂H89所抑制.给予Forskolin可抑制由TGF-β1引起的p-ERK、FN蛋白表达水平的升高;ERK抑制剂可抑制由TGF-β1引起的CTGF、FN、typeIcollagen的表达水平升高.另外,TGF-β1（10μg·L-1）可以诱导MD-CK细胞发生EMT过程,但是forskolin不能阻止EMT的发生.结论实验结果证明cAMP-PKA信号通路参与了ADPKD间质纤维化过程,并且具有双向调节作用.在MDCK细胞中cAMP-PKA信号通路一方面可以直接促进TGF-β1及其下游的间质纤维化相关蛋白分子的表达水平升高,促进ADPKD间质纤维化进程;另一方面又可以抑制TGFβ1活化的ERK信号通路和FN的蛋白表达水平升高.

肾消耗病与常染色体显性遗传性肾小管间质肾病诊治进展

肾消耗病(NPHP)是一种常染色体隐性遗传性肾病,是儿童终末期肾病最常见的遗传性疾病之一。NPHP相关致病基因表达产物几乎都与原发纤毛有关,因此NPHP被认为是一种纤毛疾病,并与肾外表现发生有关。常染色体显性遗传性肾小管间质肾病(ADTKD)是一组以显性遗传为特征的遗传性疾病,具有肾小管间质纤维化和肾功能进行性恶化的特征。NPHP与髓质囊性肾病(MCKD)以前被归类为一类疾病,而MCKD是ADTKD的历史别名。本文从多个方面描述了NPHP和ADTKD的研究进展,并对这两种疾病进行了系统的比较,以更好地促进临床医生对这两种疾病的认识。

常染色体显性多囊肾病患者与正常成人尿液的定量比较蛋白质组学分析

目的搜索常染色体显性多囊肾病(ADPKD)患者与正常成人尿液蛋白质组中有丰度差异的蛋白质成分。方法制备ADPKD患者(PKD1突变)及正常成人尿液蛋白组样品,同位素编码的亲和力标签法标记蛋白质、筛选被标记肽段,二维液相色谱-串联质谱法分离鉴定被标记肽段,从而鉴定蛋白质。通过计算两同位素试剂标记的相同肽段指纹峰面积比,寻找有丰度差异的蛋白质。根据被鉴定肽段的可信度,从鉴定出的蛋白质中选出6种,免疫印迹法验证其在两尿液蛋白组样品中的丰度差异。结果两尿液蛋白质组共鉴定出尿蛋白质106种, ADPKD患者尿液中水平较正常上调者48种,下调者45种。其中多囊蛋白1、肝细胞生长因子、单核细胞趋化蛋白3及孕激素受体等5种蛋白丰度差异为免疫印迹所证实。结论包括多囊蛋白1在内的多种蛋白质成分在ADPKD患者尿液中丰度发生改变,差异蛋白包括生长因子、凋亡调节蛋白、细胞外基质成分、受体、参与胞浆运输的蛋白质、酶类、细胞信号蛋白、转录因子及转录调节因子等,这些蛋白质信息可能为寻找与ADPKD发病相关的蛋白提供部分实验依据。

1,4,5-三磷酸肌醇受体3促进常染色体显性遗传性多囊肾病囊泡生长

本文旨在阐明1,4,5-三磷酸肌醇受体3(inositol 1,4,5-trisphosphate receptor 3,IP_(3)R3)在常染色体显性遗传性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)肾囊泡发生、发展过程中的作用,为ADPKD的治疗提供理论基础。使用2-氨基乙氧基二苯基硼酸盐(2-aminoethoxy-diphenyl borate,2-APB)和shRNA抑制IP_(3)R3的表达水平,通过MDCK(MadinDarby canine kidney)囊泡模型、胚胎肾囊泡模型、肾脏特异性Pkd1敲除(PKD)小鼠模型探究IP_(3)R3在囊泡生长过程中的作用,并通过Western blot、免疫荧光染色技术探究IP_(3)R3调控囊泡生长的分子机制。结果显示,在PKD小鼠肾脏中,IP_(3)R3的表达水平显著升高。在胚胎肾囊泡模型和MDCK囊泡模型中,通过2-APB或shRNA抑制IP_(3)R3的表达可显著延缓囊泡的生长。机制研究结果显示,在ADPKD肾囊泡生长过程中,异常活化的cAMP-PKA信号通路促进了IP_(3)R3的表达,并促进其从内质网向细胞间连接处转运。IP_(3)R3的上调以及亚细胞定位的异常激活MAPK和mTOR信号通路,加速细胞周期,引起囊泡上皮细胞异常增殖,最终促进囊泡的生长。上述结果提示,IP_(3)R3在促进ADPKD肾囊泡生长过程中发挥重要作用,抑制IP_(3)R3的表达及亚细胞再分布过程可以有效延缓囊泡的生长,而IP_(3)R3有望成为ADPKD的治疗靶点。

利用PCR-SSCP技术检测中国汉族人PKD2基因的突变

目的：检测中国汉族人Ⅱ型多囊肾病基因PKD2的突变。方法：筛选临床确诊的26个中国汉族家系中31例常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）患者，提取外周血白细胞DNA，应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR－SSCP），取异常条带标本进行核苷酸序列测定，判别PKD2外显子突变位置及类型。结果：以20例健康志愿者为对照，从31例患者中成功检测出2种突变。1种为无义突变，系PKD2外显子13的第2407位碱基由胞嚼陡置换为胸腺嘧啶，形成1个终止密码子；另1种为错义突变，系PKD2外显子4的第964位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶，使编码氨基酸由精氨酸变为色氨酸。结论：本研究建立了PCR－SSCP直接检测我国汉族人PKD2突变方法，检测出2种基因突变，为今后开展ADPKD患者囊肿前诊断提供了实验基础。

转化生长因子β1在人多囊肾病发病中的作用

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)在常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)患者中的表达分布特点,探讨其在ADPKD发病机制中的意义。方法:应用亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)酶联免疫吸附法(ELISA)测定39例ADPKD患者的血浆、尿液及囊液中TGF-β1浓度;采用原位杂交和免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白以及mRNA在正常肾及9例ADPKD患者肾组织中的表达分布特点,探讨其表达与肾间质纤维化程度的关系。结果:体液中血浆TGF-β1水平最高,ADPKD组为(15.12±8.53)μg/L、单纯性囊肿组为(11.43±8.93)μg/L,均显著高于正常对照组的(5.41±1.31)μg/L(P<0.05及P<0.01)。在ADPKD尿液中为(0.35±0.25)μg/(L.Cr)和囊液中为(0.31±0.21)μg/L,亦可检测出较低浓度的TGF-β1。在ADPKD患者肾组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、CTGF蛋白及mRNA的表达较正常肾组织明显增加(P均<0.05),主要分布在萎缩的肾小管、间质血管周围及囊壁细胞。肾间质纤维化的程度与TGF-β1 mRNA(r=0.51,P=0.001)和蛋白(r=0.52,P=0.001)的阳性表达及CTGF mRNA(r=0.53,P=0.005)和蛋白(r=0.49,P=0.003)的阳性表达均呈明显正相关。结论:肾局部和循环中的TGF-β1在人ADPKD肾间质纤维化的进展中起一定作用。

2-脱氧葡萄糖对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的影响

目的探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)对常染色体显性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞WT9-12增殖的影响及其可能的作用机制。方法将体外培养的细胞分为对照组、不同浓度2-DG处理组(5、10、20、40 mmol/L)。用CCK-8法筛选不同浓度2-DG处理多囊肾上皮细胞不同时间(12、24、36、48 h)后,抑制细胞增殖活力的最适浓度和最适时间。采用Ed U核酸标记技术和Western blot检测2-DG最适浓度处理多囊肾上皮细胞48 h后细胞的增殖抑制情况及代谢相关磷酸化-AMPKα(P-AMPKα)及增殖相关m TOR信号通路分子磷酸化-m TOR、p70S6K、4E-BP1(P-m TOR、P-p70S6K、P-4E-BP1)的水平变化;流式细胞术及Caspase-3试剂盒检测不同浓度2-DG处理多囊肾上皮细胞48 h后细胞的凋亡率。结果与对照组比较,2-DG可明显抑制多囊肾上皮细胞的增殖,且呈浓度和时间的依赖性(P<0.05);细胞代谢相关分子P-AMPKα的水平明显升高(P<0.05),增殖相关m TOR信号通路分子P-m TOR、P-p70S6K、P-4E-BP1的活性明显抑制(P<0.05);与对照组比较,各浓度2-DG处理组的多囊肾上皮细胞早期凋亡率均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 2-DG可能通过调控AMPK-mTOR信号通路,促进细胞凋亡,共同抑制多囊肾上皮细胞增殖。

遗传性间质性肾炎致病基因研究进展

近来遗传性间质性肾炎致病基因的研究取得一些进展,已发现常染色体隐性遗传的肾单位肾痨(NPHP)致病基因20种。另外,改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)提出了常染色体显性遗传性肾小管间质性肾病(ADTKD)的新定义及其诊断标准[1],现已发现4种ADTKD的致病基因(MUC1,UMOD,REN,HNF1B)。通过对上述致病基因的研究,探讨其可能导致的病理改变及临床症状,对遗传性间质性肾炎的预防、基因诊断、治疗、预后具有重要意义。

多囊蛋白-1的研究进展

多囊蛋白-1(polycystin-1,PC-1)是由多囊肾病基因-1(PKD1)编码的跨膜蛋白,属多囊蛋白家族成员,主要在上皮细胞、内分泌细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞上表达。PC-1可与多囊蛋白-2(polycystin-2,PC-2)、踝蛋白、纽蛋白等蛋白结合,参与细胞-细胞、细胞-基质黏附和细胞间信号转导。PC-1可调节肾小管上皮细胞的增殖和分化、介导细胞间的黏附,在肾脏的正常发育和常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)发病起重要作用。

肝细胞生长因子对ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成细胞外基质、基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用(英文)

目的 :观察重组人肝细胞生长因子 (rh HGF)对常染色体显性遗传性多囊肾病 (ADPKD)囊肿衬里上皮细胞合成细胞外基质 (ECM)、基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用。 方法 :采用放免法测定细胞合成层粘连蛋白 (L N )和 型前胶原氨基末端肽 (P NP) ,采用 EL ISA法检测细胞合成 型胶原 (Col ) ;采用 RT- PCR方法测定细胞表达转化生长因子β1 (TGFβ1 )、基质金属蛋白酶 2 (MMP- 2 )、金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP- 1)、金属蛋白酶组织抑制剂 2 (TIMP- 2 ) m RNA的情况 ;用蛋白质印迹方法检测细胞上清液中 MMP- 2蛋白表达 ,明胶酶谱法检测 MMP- 2活性。 结果 :rh HGF及 rh HGF+抗 TGFβ1 抗体组ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成 L N、Col 显著增多 ,但两组比较无显著差异。对照组、rh HGF组、 rh HGF+抗 HGF抗体组及rh HGF+抗 TGFβ1 抗体组各组间合成 P NP值均无显著差异。对照组、rh HGF组、 rh HGF+抗 HGF抗体组各组比较 TGFβ1m RNA表达无显著差异。与对照组比较 ,rh HGF显著上调细胞 MMP- 2 m RNA和细胞上清液中 MMP- 2蛋白表达及 MMP- 2活性 ,显著下调细胞 TIMP- 1、TIMP- 2 m RNA表达。 结论 :HGF促进 ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成 L N和 Col ,增加MMP- 2表达 ,抑制 TIMP- 1、TIMP- 2的表达。

多囊蛋白-1氨基段融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞周期及其调控基因表达的影响

研究多囊蛋白-1氨基段(PC-1NF)融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞(MC)周期及其调控基因表达的影响。应用Brdu-ELISA法检测PC-1NF融合蛋白对MC增殖的作用,流式细胞术观察PC-1NF融合蛋白对MC周期的影响,实时荧光定量RT-PCR方法检测PC-1NF融合蛋白对MC周期调控基因cyclinD1、p21WAF1表达的作用。结果表明PC-1NF融合蛋白能抑制MC增殖,呈现良好的时效与量效关系;PC-1NF融合蛋白能影响MC周期,使G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;4μg/mlPC-1NF融合蛋白作用后,cyclinD1mRNA水平比对照组明显下调(P<0.05);而p21WAF1mRNA水平比对照组显著上调(P<0.01)。PC-1NF融合蛋白能抑制MC增殖及周期的进展,其机制可能是通过下调cyclinD1、上调p21WAF1的表达,抑制细胞通过G1-S调控点而介导的。

初级纤毛对骨骼发育的影响

随着常染色体显性多囊肾病"初级纤毛学说"研究的深入,多囊蛋白-初级纤毛复合体在骨骼发育过程中的重要作用越来越受到人们的关注。多囊蛋白-初级纤毛复合体结构和功能的异常,可导致膜内成骨和软骨内成骨的延迟,且可出现骨质疏松、隐性脊柱裂和软骨发育不良等多种并发症。研究发现骨细胞-成骨细胞表面的初级纤毛作为一种机械感受器,具有多种激素受体和压力门控离子通道,可感受外界应力作用,调节细胞内离子浓度及信号传导通路,从而维持骨的正常发育。本文就多囊蛋白-初级纤毛复合体对骨骼发育影响及其分子机制进行了综述。

肾疾病

9702297 αβ-rδT细胞的肾脏浸润对 IgA 肾病进展的影响/Falk M C//Kidney I-nt.-1995,47(1).-177～185 冀医图9702998 肾脏对蛋白摄入及尿浓缩能力的适应:健康人和 CRF 患者的相似性/Bankir L//Kidney Int.-1995,47(1).-7～24