常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

抽提常氏肝癌细胞的总RNA ,以oligo(dT)为引物 ,通过两次转换模板 ,采用LD PCR合成全长cDNA ,在cDNA两端引入SfiⅠ的酶切位点。以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库。以ADAMs通用抗体 ,用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出 2 2个阳性克隆 ,经测序分析和BLAST检索 ,证实其中一个为新基因 ,部分区域具有蛋白酶的功能 ,对该基因进行了GenBank登录 ,获注册号为AY0 780 70。

常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及质量分析(英文)

目的 利用 RNA转录 5′末端转换机制 (SMART)构建适合免疫筛选的经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞 c DNA文库。方法 通过反转录 PCR和长距离 PCR获得常氏肝癌细胞的全长 c DNA,然后利用 SMART c DNA文库构建试剂盒建立经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞c DNA文库。结果 通过测定 ,高质量的包含常氏肝癌细胞全长 c DNA的 c DNA文库得到建立 ,扩增 c DNA文库的滴度高达 4.5× 10 10 pfu· ml- 1,重组子内平均插入外源基因片段长度在 2 0 0 bp到 40 0 0 bp之间 ,约 150 0 bp左右 ,并且此文库适合免疫筛选。结论 结果显示所构建的经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞 c DNA文库具有很高的质量 ,为进一步研究常氏肝癌细胞和筛选相关基因获得 c