用RNA干扰技术创造高直链淀粉马铃薯材料

【目的】创造块茎高直链淀粉含量的转基因马铃薯材料。【方法】采用RT-PCR技术分别克隆了马铃薯Sbe1基因CDS内300bp的片段SⅠ和Sbe2基因CDS内410bp的片段SⅡ,并将SⅠ和SⅡ顺序连接得到融合片段SⅢ;以载体pHANNIBAL和pART27为基础,构建具有SⅢ反向重复结构的植物表达载体pRNAiⅢ;采用农杆菌介导法转化马铃薯优良品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋。【结果】获得了融合片段SⅢ,构建了以Sbe1基因和Sbe2基因为靶标的RNA干扰载体pRNAiⅢ,通过农杆菌介导法获得了24个转基因株系,其中21个转基因株系试管薯的淀粉粒形态发生明显变化,表观直链淀粉含量介于59.31%～87.14%,比受体材料平均高出3.2倍。RT-PCR分析表明,在8个直链淀粉含量超过80%的转基因株系中检测不到Sbe1和Sbe2基因mRNA的积累。【结论】采用RNAi技术通过沉默内源Sbe1和Sbe2,可获得高直链淀粉含量的马铃薯材料。

RNA干扰技术在哺乳动物中的应用

RNA干扰 (RNAi)是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的进化保守机制 .RNAi是由双链RNA触发的转录后基因沉默机制 ,具有序列特异性 ,在哺乳动物细胞中 ,RNAi由 2 1～ 2 3个核苷酸组成的双链RNA引发 .小干扰RNA (siRNA)可以在体外合成或通过表达载体在哺乳动物细胞内合成 .由于RNAi技术具有快速、简单和特异性强等特点 ,在基因功能研究。

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状

RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术是利用双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA），高效、特异性降解细胞内同源信使RNA（messengerRNA，mRNA），从而阻断特定基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。1998年Fire等[1]首次应用RNAi技术将dsRNA正义链与反义链的混合物注入线虫体内，结果发现注入dsRNA比单独注入单链RNA引起的基因沉默要强得多，并可导致子一代同源基因的沉默。

RNA干扰技术的应用研究进展

RNA干扰是指由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默现象,广泛存在于真菌、植物和动物中。RNA干扰技术是近年来迅速发展起来的高效、特异、易操作的基因阻断技术,在功能基因组的研究中有着广阔的应用前景。文章对RNA干扰的分子机制、生物学功能和RNA扰技术的优势以及其在功能基因组、基因治疗、转基因动物研究、药物开发等方面的应用做一综述。

RNA干扰技术及其在蜜蜂基因功能研究中的应用前景

RNA干扰作用(RNA interference,RNAi)是生物界一种古老且进化上高度保守的现象,自发现以来便成为研究基因功能的有效手段。作者重点介绍了RNA干扰技术发现的历史过程和作用机制,阐述了其在昆虫功能基因组学方面的应用进展,展望了其在蜜蜂基因功能研究中的应用前景。

RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究

目的应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索该技术干预肝癌的可行性。方法制备4个针对人POLD1基因的shRNA表达质粒,转染SMMC-7721细胞48 h后,荧光定量PCR法检测POLD1基因的表达,CCK-8检测细胞生长情况。结果测序鉴定证实4个shRNA表达质粒构建成功,将其转染SMMC-7721细胞后,NEO-POLD1-1和NEO-POLD1-4表达质粒抑制效果明显,使SMMC-7721细胞的增殖受到抑制,并且使POLD1基因表达在mRNA水平抑制,NEO-POLD1-1相对表达量为(0.1425±0.0205),NEO-POLD1-4相对表达量为(0.209±0.009)。结论针对POLD1基因设计的shRNA在体外有效地抑制了POLD1基因mRNA的表达和肝癌细胞的增殖,且实现RNA干扰具有序列选择性。

RNA干扰技术在胰腺癌基因治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)介导的、由特异性引起的转录后基因沉默现象。RNA干扰技术作为基因沉默的有效手段,在肿瘤治疗方面显示出良好的前景。现就RNA干扰的机制、双链RNA的设计、小干扰RNA(siRNA)的制备方法和RNA干扰技术在胰腺癌治疗研究中的应用进展作一综述。

RNA干扰技术在功能基因研究中的应用

RNA干扰是与靶基因序列同源的双链RNA所诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。它是一种跨越多种种属的古老的生物途径,同时它的出现为生物学家提供了一种快速、简便的反向遗传学技术,在后基因组时代功能基因的研究中具有重要的应用前景。

RNA干扰技术在肝细胞癌治疗方面的研究现状及进展

RNA干扰(RNAi)是生物进化过程中高度保守且借助双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发,高效特异性降解同源mRNA的现象。近来研究发现RNAi技术可高度特异地剔除或关闭目的靶基因,从而操控其表达。目前该技术广泛应用于研究靶基因功能、治疗部分疾病特别是恶性肿瘤的基因治疗。肝癌在我国高发,严重威胁患者的生命,针对肝癌的早期诊断、治疗和预后评估一直是外科肿瘤学领域的研究重点。近年,将RNAi技术与肝癌分子生物学机制方面的研究相结合,呈现出很多令人期待、值得深入的研究成果。对此领域的近期研究成果做扼要综述。

RNA干扰技术抑制EC-109细胞survivin基因表达及其促凋亡研究

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡.方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点收集转染细胞,利用流式细胞术及基因组DNA凋亡检测试剂盒,观察siRNA抑制survivin基因表达后诱导细胞凋亡的情况.结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达46.70%.半定量RT-PCR检测到pSIREN/S质粒在EC-109细胞内对survivin基因的转录抑制率为74.04%;蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pSIREN/S的EC-109细胞survivin蛋白表达量仅为正常组的41.64%,而对照质粒pSIREN/CN对survivin基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用.经pSIREN/S转染的EC-109细胞基因组DNA出现明显的DNAladder,流式细胞仪分析结果也显示凋亡细胞为60.78%.结论:survivin特异性siRNA可明显抑制survivin基因的转录和表达,并能有效地诱导EC-109细胞的凋亡,为下一步在体内利用pSIREN/S重组质粒沉寂survivin基因,促肿瘤细胞的凋亡提供实验基础.

利用反义技术和RNA干扰技术改良番茄品质特性的研究

综述了利用反义技术和RNA干扰技术,通过抑制番茄果实发育过程中许多重要基因(如PG基因、ACC合成酶基因、ACC氧化酶基因、LeCOP1LIKE、TBG6等)的表达,使番茄的耐贮性、番茄红素含量和裂果率等品质特性发生显著变化的研究进程,试验证明,反义技术和RNA干扰技术是抑制靶基因表达的有效手段。

RNA干扰技术及其应用研究进展

RNA干扰技术(RNAinterference,简称RNAi)是指将双链RNA(即dsRNA)导入生物或细胞内,引起与其同源的mRNA特异性降解,因而抑制其相应基因表达的过程。它具有高效、快捷、特异性强等特点。目前,它的作用机制已基本清楚,有广阔的应用前景。本文从RNAi的发现、分子机制、作用特点和RNAi技术的应用等方面进行了综述。

RNA干扰技术的研究进展

RNA干扰技术具有高特异性、高效性等显著优势,近年在医学领域广泛应用,包括基因组研究、病毒性疾病治疗、肿瘤治疗、自身免疫性疾病治疗及新药开发等。本文就RNAi技术的研究现状作一综述。

RNA干扰技术与消化系肿瘤的基因治疗

将靶基因序列同源的双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)导入细胞可以抑制某些基因的表达,即RNA干扰(RNA interference,RNAi).RNAi是机体中普遍存在的机制, 起到负责基因的表达和调控的作用.由于RNAi能够高效特异地抑制基因表达,RNAi技术在研究基因功能、遗传规律、信号转导机制等多个领域迅速展开.作为一项崭新的技术, RNAi在肿瘤的基因治疗方面具有非常广阔的前景.本文就近年来RNAi技术在消化系肿瘤的基因治疗中的运用作—综述.

RNA干扰技术在药物研究中的应用

RNA干扰是由双链RNA引发的转录后基因沉默。双链RNA经Dicer酶降解成21 23nt的小干扰RNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mRNA。随着RNA干扰机制的深入研究与广泛应用,RNAi已用在药物研究中的各个领域,尤其在药物开发上,能够解决临床前药物开发的一些瓶颈问题,如药靶鉴定,优化药靶,从而节省时间和资金,并提高成功率,加速药物的临床研究。同时RNA在药物研究的其他领域都也显示了卓越的作用,为药物研究提供了强大的工具。

RNA干扰技术新进展

20世纪90年代初，科学家在矮牵牛花中导入与花青素合成有关的查尔酮合成酶基因，原以为转基因的牵牛花会变得更鲜艳，结果却发现一些花反而变成白色，这种现象引起人们的高度关注，之后的研究将这种过度表达内源基因而引发的基因沉默称为共阻遏。

RNA干扰技术沉默脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因对脂肪细胞合成甘油三酯及分泌内脂素的影响

目的观察RNA干扰技术沉默脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因后,脂肪细胞甘油三酯合成及内脂素分泌的变化。方法将3T3-L1前脂肪细胞采用体外诱导分化为脂肪细胞,将脂肪细胞与0～1 mmol/L不同浓度脂肪酸共孵育后,测定其甘油三酯及内脂素的浓度。构建针对脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因的微小RNA质粒表达载体,将上述载体转染3T3-L1脂肪细胞,用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因及蛋白的表达,将0.5 mmol/L脂肪酸与沉默前后的脂肪细胞共孵育24 h,用逆转录聚合酶链反应检测脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因沉默前后脂肪细胞内脂素mRNA表达的变化,并测定其甘油三酯及内脂素浓度的变化。结果随着脂肪酸浓度的增高,与其共孵育的脂肪细胞内甘油三酯浓度也随着增加(P<0.05),其分泌的内脂素浓度也随着增加(P<0.05);构建脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白微小RNA质粒载体,转染脂肪细胞后,能显著抑制脂肪细胞内脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05);沉默脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因后脂肪细胞内甘油三酯浓度明显低于沉默前(P<0.05),其分泌的内脂素浓度也明显低于沉默前(P<0.05)。结论经RNA干扰技术沉默脂肪细胞内脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因能明显降低脂肪细胞甘油三酯的合成及内脂素的分泌。