鱼类白介素(IL-1β)及干扰素(IFN)重组质粒构建及联合应用研究

为增强鱼类自身防病抗病能力,本研究人工合成了细胞因子白介素(IL-1β)及干扰素(IFN)基因序列,分别与p IRES2-EGFP真核表达载体连接,构建荧光表达质粒。两种质粒分别接种Hela细胞,倒置于荧光显微镜下观察,确定质粒在细胞内的表达情况。之后将两种质粒注射免疫鱼体,于免疫后第2周抽样采集腹水、肌肉组织及血清,通过荧光、RT-PCR及SDS-PAGE方法检测目的蛋白表达情况。最后将两种质粒联合免疫待产虹鳟亲鱼,同时在人工授精过程中进行二次免疫,抽样采集孵化出的虹鳟鱼苗,检测目的蛋白表达情况。结果表明,两种质粒转染Hela细胞均可见荧光反应,空白对照无荧光,表明两种质粒在细胞内成功表达;室内动物试验结果表明只有两试验组腹水中检测到荧光信号,RT-PCR结果可见两试验组每组10尾均可检测到目的片段,空白组未检测到目的片段。SDS-PAGE显示,两试验组在40KD处可见目的条带;中试试验幼鱼可检测到荧光蛋白表达;试验组繁殖成活率97%,空白对照组繁殖成活率56%。以上结果证明人工合成IL-1β、IFN荧光质粒免疫鱼体,显著提高了鱼体自身免疫力,可有效的增强鱼体自身防病抗病能力。

鹅γ-干扰素成熟蛋白的表达及其生物学活性研究

【目的】检测重组鹅IFN-γ的生物学活性。【方法】将鹅IFN-γ成熟蛋白基因分别克隆到原核表达载体pET30a,杆状病毒转移载体pMelBacA和pBlueBacHis2A。对鹅IFN-γ成熟蛋白进行原核和真核表达系统表达;利用体外活性试验检测表达产物的生物学活性。【结果】原核和真核表达系统表达了重组鹅IFN-γ成熟蛋白,并制备其原核表达产物的多克隆抗体;重组鹅成熟IFN-γ可以诱导鹅巨噬细胞产生NO,并能抑制GPMV在鹅胚成纤维细胞中的增殖。【结论】重组鹅成熟IFN-γ具有鹅巨噬细胞激活活性和抗病毒活性。

鹅α和γ干扰素基因的克隆及序列分析

从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT_PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18_T载体中,进行序列分析。克隆到的鹅IFN_α和IFN_γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN_α96.70%I、FN_γ94.95%;氨基酸序列同源性分别为IFN_α93.72%I、FN_γ93.29%。这为进一步研究鹅干扰素的生物学特性和应用奠定了基础。

脑出血患者外周血干扰素-γ、细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3 mRNA表达及意义

目的探讨脑出血患者外周血干扰素(IFN)-γ、细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(TIM)-3的表达及意义。方法 96例脑出血患者均为发病6 h内来诊,按发病距采血时间分为≤6 h组、>6 h且≤24 h组、>24 h且≤72 h组和>72 h组。另选24例正常人为对照组。检测各组IFN-γ的水平及外周血中单个核细胞TIM-3 mRNA的表达。结果各实验组IFN-γ的表达与对照组均具有统计学差异(P<0.05)。>24 h且≤72 h组IFN-γ的表达显著高于其他实验组(P<0.05)。各实验组TIM-3 mRNA的表达与对照组均具有统计学差异(P<0.05)。>24 h且≤72 h组TIM-3mRNA的表达显著高于其他实验组(P<0.05)。结论脑出血患者发病6 h内,IFN-γ、TIM-3的表达增加,IFN-γ和TIM-3参与脑出血后的病理过程。

人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制

筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化。纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测。筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件。纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85 821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符。内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求。体外生物细胞活性高达1.6×106IU/mg。具有良好的工业应用价值。

黄芪对湿疹大鼠皮损中白细胞介素-4和干扰素-γ影响的实验研究

湿疹（eczema）是一种南多种内外因素引起的真皮浅层及表皮的过敏性、炎症性皮肤病，病因复杂，其发病可能与细胞因子异常有关。本实验观察黄芪对湿疹大鼠皮损中白细胞介素（IL）-4和干扰素（IFN）-γ的影响，探讨黄芪治疗湿疹可能的机制。

γ-干扰素对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的影响

为了研究γ-干扰素(IFNγ)对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的作用,采用免疫组织化学方法对胆碱能神经元的特异性标记酶-胆碱乙酰基转移酶(ChAT)进行染色,ChAT阳性细胞的数量反映了胆碱能神经元的数量,并用14C-乙酰CoA作底物来检测ChAT活性。结果显示,IFNγ处理过的实验组,ChAT阳性细胞数量显著增加,ChAT活性也增加,这种增加被大鼠抗小鼠IFNγ单克隆抗体(Ab-IFNγ)完全拮抗。采用流式细胞术对细胞周期进行分析,细胞周期及细胞百分率无明显改变。用MAP2标记神经细胞,神经细胞数基本未增加。以上结果提示:IFNγ不能促进基底前脑和隔区神经元增殖,胆碱能神经元表达增加不是因为神经元数目增加而是分化的结果。

干扰素治疗白细胞减少慢性丙型肝炎患者疗效观察

目的:观察聚乙二醇干扰素α-2b(pegylated interferonα-2b,Peg-IFNα-2b)分层方法治疗白细胞(WBC)减少慢性丙型肝炎(CHC)的临床疗效。方法:将入组的105例患者分为3组,均使用保肝降酶药物,A组患者初始加用Peg-IFNα-2b,50μg,1次/周,B组患者初始加用普通干扰素α(IFN-α)1MU/次,1次/隔日,均皮下注射。两组患者均同时口服利巴韦林300mg/次,3次/d。根据患者反应,逐渐加大IFN剂量,密切监测血常规及不良反应,必要时采用辅助升白细胞药物。最后Peg-IFNα-2b达到80μg/次,1次/周,IFNα达到3MU/次,1次/隔日。C组患者仅使用保肝降酶药物。疗程1年。结果:在治疗1年时A、B、C 3组患者组ALT分别为(34±22)U/L、(67±44)U/L、(154±58)U/L,AST分别为(40±12)U/L、(79±32)U/L、(139±86)U/L;透明质酸(HA)分别为(48.13±30.21)μg/L、(89.34±76.42)μg/L、(201.34±106.21)μg/L,层粘蛋白(LN)分别为(102.1±79.52)μg/L、(239±87.54)μg/L、(536.68±358.35)μg/L,A、B组显著低于C组(P<0.05),A组显著低于B组(P<0.05);腹水出现率分别为0、0、10%;门静脉宽≥1.3cm比率分别为0、3.85%、10%;脾厚>4cm比率分别为4.34%、7.69%、16.67%,A、B组显著低于C组(P<0.05),A组显著低于B组(P<0.05);丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)<1000IU/ml比率分别为91.30%、59.61%、0;WBC>3.0×109/L比率分别为91.30%、59.61%、0,A、B组显著高于C组(P<0.05),A组显著高于B组(P<0.05)。结论:白细胞减少的CHC患者可予干扰素抗病毒治疗。

猪流行性腹泻病毒逃避宿主干扰素抗病毒作用机制的研究进展

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种全球分布的α冠状病毒,能引起仔猪流行性腹泻,猪流行性腹泻一旦暴发会给养殖业带来巨大的经济损失。在病毒感染期间,Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferon,IFN-Ⅰ)是先天性抗病毒反应的关键介质。大多数冠状病毒通过限制IFN的产生和IFN应答的激活而产生一些策略以规避IFN应答。然而,PEDV颉颃IFN抗病毒作用的分子机制尚未完全清楚。猪感染PEDV后,机体的先天免疫不能有效抵抗PEDV的侵害,PEDV通过限制或阻断IFN的功能和隐藏自身的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)两种途径逃逸宿主先天免疫。在此过程中,PEDV的结构蛋白和非结构蛋白及一些蛋白酶起到了关键作用,核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白能抑制IFN-Ⅰ的产生,协助病毒逃避机体的抗病毒天然免疫,木瓜样蛋白酶通过去泛素化酶活性阻断天然免疫信号通路,PEDV也可通过阻断双链核糖核酸(double-stranded RNA,dsRNA)诱导IFN-Ⅰ的产生,以逃避宿主的先天免疫。这些研究为深入了解IFN在PEDV致病过程中的作用及PEDV逃避IFN抗病毒的机制提供了理论依据,并有助于深入了解病毒与宿主先天性免疫之间的关系,同时也为PEDV的防治及PEDV疫苗的研发提供参考。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型外周血干扰素-γ与蛋白激酶-θ的表达及其意义

本研究通过建立免疫介导的再生障碍性贫血（AA）动物模型，研究小鼠外周血单个核细胞（PBMC）干扰素（IFN）-γ mRNA与蛋白激酶（PKC）-θ mRNA的表达关系．探讨AA动物模型的免疫发病机制，为AA发病机制的研究提供资料。

α—干扰素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目前国内、外治疗慢性乙型肝炎的方法、药物种类、剂量及疗程有较大的差异,报道的疗效亦各不相同。近年来我们用精制人白细胞a—干扰素(IFN)联合小牛胸腺肽治疗慢性乙型肝炎10例,结果报告如下。

干扰素-γ对胆管损伤后瘢痕成纤维细胞的影响

近年来发现干扰素（IFN）-γ在体内及体外均抑制成纤维细胞的增殖与胶原的合成，以及激活胶原酶的活性，从而抑制瘢痕的挛缩。现在瘢痕的研究一般都集中于皮肤的病理性瘢痕的研究，以胆管瘢痕为对象的研究较少。胆管瘢痕与皮肤瘢痕相比主要机制虽然相同但是各有特点。本实验旨在通过体外观察和研究IFN-γ对兔肝外胆管损伤修复模型的瘢痕成纤维细胞的生物学作用，为寻求应用IFN-γ治疗胆管狭窄探索一条新的途径。

鸭肠炎病毒感染诱导鸭胚成纤维细胞γ干扰素上调表达及初步机制的研究

目的探讨鸭肠炎病毒(DEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)中γ干扰素(IFNγ)的表达情况及初步机制。方法分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF总RNA,反转录成cDNA,使用特异性引物,运用荧光定量PCR方法 ,检测IFNγ及几个相关干扰素刺激基因(ISGs)mRNA水平的变化。结果感染DEV的细胞相对于未感染的细胞,IFNγ的mRNA在24 h、36 h、48 h、60 h均显著上调,且相关ISGs包括抗黏液病毒基因(Mx)、DEAD框蛋白50(DDX50,是一种ATP依赖的RNA解旋酶)、2'-5'寡腺苷酸合成酶L(OASL)等基因的mRNA表达水平也均显著上调。结论 DEV感染DEF能够诱导IFNγ产生及相关ISGs表达的上调。

干扰素生物学活性及其在家禽临床上的应用

干扰素(IFN)是由干扰素诱生剂诱导生物细胞后所产生的一类高活性多功能的糖蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。干扰素在临床上的应用也取得了显著的成效,但是还有一些问题需要进一步探索。本文就家禽IFN的产生、分类、生物学活性、临床应用等方面做一综述。

干扰素-Tau的生物活性及研究进展

干扰素-Tau(IFN-τ)作为从反刍动物体内发现的一种新型干扰素,具有抗黄体溶解、免疫调节、低细胞毒性等生物学功能,特别是对反转录病毒抑制的高度特异性。IFN-τ在胚胎滋养层细胞中表达,无需病毒诱导;该文对IFN—τ的结构、生物功能及研究进展一一作了描述。

不同感染途径对慢性丙型肝炎干扰素α-2b联合利巴韦林疗效的影响

观察干扰素α-2b联合利巴韦林治疗不同途径感染的慢性丙型肝炎的疗效。对154例慢性丙型肝炎患者根据感染途径不同分为三组,进行干扰素α-2b联合利巴韦林治疗24周,在治疗24周结束和完成24周随访后,检测患者ALT和HCV-RNA定量水平,以生化应答率、病毒学应答率作为主要的评价指标,以复发率作为次要观察指标。治疗结束时,输血感染组、密切接触感染组和不明原因感染组生化应答率分别为77.27%,69.44%,54.17%;病毒应答指标中SVR分别为45.45%,47.23%,25%;NR分别为5.68%,8.33%,20.83%。治疗结束随访24周后,三组复发率分别为70.97%,68.00%,46.15%。结果表明,在干扰素α-2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的疗效观察中,感染途径主要影响其生化应答和持续的病毒应答,甚至也影响治疗后的复发率。

干扰素概述及应用前景

干扰素是一类高活性、多功能细胞因子,由细胞基因控制并在特定诱导剂的作用下产生,是第一个用于肿瘤治疗的细胞因子。随着生物工程技术的不断进步,干扰素已经成为治疗肿瘤疾病不可或缺的药物之一,而干扰素副作用的日益凸显也成为其临床应用的障碍,但是由于干扰素的适应症范围广,其在疾病治疗方面起的作用仍然十分重要。综述了干扰素的生物学作用研究进展、适应症、毒副作用、临床应用前景。