人类白细胞抗原DQ和干扰素λ4基因多态性与乙型肝炎病毒感染和清除的相关性研究

目的研究人类白细胞抗原DQ（HLA—DQ）和干扰素λ4（IFN—L4）的基因多态性与中国汉族人群乙型肝炎病毒（HBV）感染和清除的相关性。方法用Sequenom MassARRAYMALDI—TOF系统对HLA—DQ基因多态性位点rs9275319和IFN—L4基因多态性位点rs368234815、rs12971396、rs12979860、rs8099917进行分型。用logistic回归分析评估单核苷酸多态性（SNP）与HBV感染风险和自发清除的关系。用Haploview4．2软件和PHASE软件分析连锁不平衡和单体型频率。采用多因素降维法分析SNP—SNP之间的相互作用。所有结果均用SPSS19．0软件进行统计学分析和Bonferroni校正。结果本研究纳入的受试者分别为：健康对照组238例、HBV相关慢性肝病组397例和乙型肝炎感染后白发清除组434例，共计1069例。在HLA—DQ基因多态性位点rs9275319中，rs9275319TT在各组中最常见（HBV相关慢性肝病组86．2％、自发清除组77．6%和对照组75．9%）；而rs9275319C等位基因是HBV感染（等位基因模型P=0．0003；OR=0．514；95％6%0．359～0．738）和清除（等位基因模型P=0．002；OR：1．659I95％CI：1．197～2．300）的保护性因素。HLA—DQrs9275319与HBV的易感性（等位基因模型OR：0．514；95％CI：0．359～0．738；校正后尸=0．0003）和自发清除（等位基因模型OR：1．659；95％凹：1．197～2．300；校正后P=0．002）有很强的相关性。IFN—L4基因多态性与HBV的易感性（等位基因模型：rs368234815，P=0．082；rs12971396，P=0．063；rs12979860，P=0．517；rs8099917，P=0．695）和自发清除不相关（等位基因模型：rs368234815，P=0．358；rs12971396，P=0．105；rs12979860，P=0．640；rs8099917，P=0．640；P值均〉0．05）。多因素降维法分析结果显示，在HBV易感洼（最佳因子模型P=0．009）和自发清除（最佳因子模型P=0．014）中，IFN-IA（rs12971396、rs12979860）和HLA—DQ（rs9275319）SNP有三方互动作用。结论HLA—DQ和IFN-L4基因SNP—SNP间的相互作用与HBV感染和自发清除调节有关。

HCV感染相关干扰素L4真核表达载体的构建与表达

目的构建HCV感染相关干扰素IFNL4蛋白融合His标签的真核表达载体,并将其在293-T细胞中表达后进行初步纯化鉴定。方法采用PCR法从含人IFNL4基因序列的质粒pFC14A-p179中扩增出目的片段,将其定向连接到pcDNA3.1-His真核表达载体中,经酶切和测序鉴定正确后,以脂质体法转染293-T细胞,培养72h后裂解细胞,采用抗His-Tag抗体行蛋白质印迹法检测目的蛋白的表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-IFNL4-His,转染后经Western blot法检测显示20 kDa位置有目的蛋白条带,大小与目的蛋白相符。结论我们成功构建了HCV感染相关IFNL4与His标签融合的真核表达载体,体外转染293-T细胞后鉴定其工作良好,为后续对干扰素在HCV感染及抗肝纤维化治疗中的研究奠定了基础。

慢性乙型肝炎患者降钙素基因相关肽和α-干扰素-λ4基因多态性对α-干扰素治疗应答的影响

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清降钙素基因相关肽(CGRP)和α-干扰素-λ4(IFNL4)基因多态性对α-干扰素治疗应答的影响。方法2018年9月~2021年2月我院诊治的CHB患者92例,给予所有患者α-干扰素α-2b治疗1年。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测血CGRP基因rs155209位点及IFNL4基因rs368234815和rs12979860位点多态性,应用Logistic回归分析基因多态性与α-干扰素治疗应答的关系。结果在治疗1年末,本组应答67例(72.8%),未获得完全应答25例(27.2%);非应答组CGRP-rs155209位点CC基因型和等位基因C比率分别为36.0%和56.0%,显著高于应答组的16.4%和32.8%(P<0.05);非应答组IFNL4-rs368234815位点TT/TT基因型和TT基因频率分别为76.0%和86.0%,显著低于应答组的92.5%和95.5%(P<0.05);非应答组IFNL4-rs12979860位点CC、CT和TT基因型比率分别为44.0%、44.0%和12.0%,与应答组的40.3%、46.3%和13.4%比,无显著性差异(P>0.05);应用非条件Logistic回归模型计算校正性别和年龄,结果显示CGRP-rs155209位点CC基因型是影响治疗无应答的危险基因型【OR值为1.489(95%CI:1.103~2.009)】,而IFNL4-rs368234815位点TT/TT基因型是α-干扰素治疗应答的保护基因型【OR值为0.652(95%CI:0.477~0.893)】。结论CGRP基因rs155209位点CC基因型是接受α-干扰素治疗CHB患者可能无应答的危险基因型,而IFNL4基因rs368234815位点TT/TT基因型可能是治疗应答的保护基因型,将影响CHB患者对α-干扰素治疗的生化和病毒学应答反应。

IFNL4和IL-28B基因多态性检测评估慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗应答价值分析

目的探讨检测血干扰素λ4(IFNL4)和白介素-28B(IL-28B)基因多态性对慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗后应答的评估价值。方法2015年3月~2017年3月收治的CHB患者140例,均接受聚乙二醇干扰素α-2a治疗12个月。应用市售试剂盒检测外周血IFNL4和IL-28B基因多态性。结果在治疗结束时,在140例CHB患者中,108例(77.1%)获得应答,32例(22.9%)无应答;应答组IL-28Brsrs8099917位点基因TT型占比为88.9%,显著高于无应答组的68.8%(P<0.05);应答组血清ALT、AST和HBV DNA水平分别为(35.4±3.2)U/L、(38.6±2.1)U/L和(3.8±2.1)lg copies/ml,均显著低于无应答组的(61.5±4.8)U/L、(73.5±3.0)U/L和(5.2±3.1)lg copies/ml(P<0.05);125例IFNL4 TT/TT型患者血清ALT、AST和HBV DNA水平分别为(47.1±2.5)U/L、(49.1±1.6)U/L和(4.5±1.2)lg copies/ml,与15例TT/△G型患者的(48.0±2.1)U/L、(59.4±1.5)U/L和(4.7±1.3)lg copies/ml比,无显著性差异(P>0.05);118例IL-28B TT型患者血清ALT、AST和HBV DNA水平分别为(36.4±2.1)U/L、(38.9±2.7)U/L和(4.0±1.7)lg copies/ml,显著低于22例TG型患者【分别为(59.0±1.4)U/L、(72.1±1.1)U/L和(6.0±2.1)lg copies/ml(P<0.05)。结论CHB患者IFNL4rs368234815位点基因以TT/TT型和IL-28Brs8099917位点基因以TT型居多,检测IFNL4基因多态性可能对预测抗病毒疗效无明显指导意义,而检测IL-28B基因多态性可能对抗病毒疗效有一定的预测价值。

IL-28B、IFNL4基因多态性与慢性丙型肝炎患者聚乙二醇干扰素联合利巴韦林抗病毒疗效相关性的研究

丙型肝炎病毒（HCV）感染是导致肝硬化和肝细胞癌的主要原因，有效的抗病毒治疗能延缓病情进展，降低肝硬化及肝细胞癌的发生率。直接抗病毒药物（DAAs）治疗方案大大提高了丙型肝炎的持续病毒学应答率（SVR），使难治的HCV-1基因型慢性丙型肝炎（CHC）患者的SVR率提高到80％以上，同时疗程缩短，不良反应减少。

IFNL4单核苷酸多态性与TDF+3TC+EFV抗病毒治疗应答的关联性

目的探讨干扰素λ4(IFNL4)单核苷酸多态性(SNP)与替诺福韦(TDF)+拉米夫定(3TC)+依非韦伦(EFV)抗病毒治疗应答的相关性。方法选取2011年1月-2020年1月广西中医药大学附属瑞康医院门诊及住院确诊的HIV感染患者共137例,并予TDF+3TC+EFV抗病毒方案治疗12个月以上,定期门诊随访。对IFNL4的2个SNP位点进行基因分型,比较艾滋病患者抗病毒治疗12个月后基因分型之间的免疫应答和病毒应答情况。结果位点rs4803221-GC基因型占8.8%,CC基因型占91.2%,rs12971396-GC和CC基因型分别为97.8%和2.2%。IFNL4-rs4803221、rs12971396不同基因型的患者相比较,基线CD4^(+)、CD8^(+)T细胞计数、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值差异均无统计学意义(t_(rs4803221)=0.074、-0.612、0.701,t_(rs12971396)=1.896、1.682、-0.568,P均>0.05)。抗病毒治疗12个月后,不同基因型之间有效免疫学应答比例或有效病毒应答比例的差异也无统计学意义(P>0.05)。结论广西地区艾滋病患者的IFNL4-rs4803221基因型主要为CC,IFNL4-rs12971396基因型主要为GC,其基因型与TDF+3TC+EFV抗病毒应答无关。

IFNL3／IFNIA多态性与HIV-1患者应用高效抗逆转录病毒治疗的相关性研究

目的分析干扰素λ3基因（IFNL3）/干扰素λ4基因（IFNL4）单核苷酸多态性（SNPs）对HIV-1感染患者应用高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的影响。方法收集2015年6月至12月浙江大学医学院附属第一医院应用HAART≥1年的63例HIV-1成年患者。采用定量聚合酶链反应（qPCR）定量检测患者血浆HIV-1 RNA、外周血单个核细胞（PBMC）的HIV-1 DNA水平和外周血SNPs。应用磁珠法检测血浆炎性细胞因子水平，并采用流式细胞仪检测外周血CD4^＋T和CD8^＋T淋巴细胞计数。根据抗病毒治疗应答情况将患者分为HIV-1 RNA低表达组（〈100拷贝/mL）和高表达组（≥100拷贝/mL）；根据淋巴细胞计数将患者分为CD4^＋T淋巴细胞低表达组（〈250个/μL）和高表达组（≥250个/μL）；根据外周血HIV-1 DNA水平将患者分为HIV-1 DNA低表达组（〈100拷贝/106个细胞）和高表达组（≥100个拷贝/106个细胞）。分析IFNL3/IFNL4的SNPs、炎性细胞因子在HIV-1 RNA、HIV-1 DNA和CD4^＋T淋巴细胞各亚组的分布和水平，以及SNPs与炎性细胞因子的关系。采用SPSS 18.0软件对数据进行分析。结果rs368234815、rs8099917和rs4803223在HIV-1 RNA低表达组和高表达组的分布差异具有统计学意义（χ^2=0.043、0.047和0.032，P值均〈0.05）。IL-10在HIV-1 RNA低表达组较高表达组下降（U=4.00，P〈0.05）；IL-13水平在HIV-1 RNA高表达组和HIV-1 DNA高表达组较相对应组下降（U=0.00和2.00，P〈0.05）; IL-21水平在HIV-1 RNA高表达组及CD4^＋T淋巴细胞低表达组较相对应组下降（U=3.00和2.00，P〈0.05）; IL-28A水平则在HIV-1 RNA高表达组、HIV-1 DNA高表达组和CD4^＋T淋巴细胞低表达组均下降（U=3.00、0.50和3.00，P〈0.05或〈0.01）。此外，rs368234815与IL-21相关（H=6.690，P〈0.05），IL-21在rs368234815ΔG/ΔG[131.88（2.66，174.00）]亚型的表达高于TT/TT[6.79（2.81, 26.48）] （P〈0.05）；rs4803223与IFN-γ相关（H=6.690，P〈0.05），IFN-γ在GG亚型[62.26 （19.45, 96.49）]中的表达要高于GA亚型[6.98 （2.19, 99.14）] （P〈0.05）。结论IFNL3/IFNL4的rs368234815, rs8099917和rs4803223可能与HIV-1患者应用HAART治疗效果、炎性因子表达相关，并可能影响HAART疗效。