激光联合干扰素治疗对阴道上皮内瘤变患者阴道微生态、炎症因子及预后的影响

目的分析激光联合干扰素对阴道上皮内瘤变(VAIN)患者的阴道微生态、炎症因子以及预后的影响。方法60例VAIN患者,按随机数字表法分为对照组和研究组,每组30例。对照组患者通过二氧化碳(CO_(2))激光治疗,研究组患者通过CO_(2)激光联合干扰素治疗。比较两组患者临床治疗效果;并发症发生情况;治疗前后炎症因子指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、Toll样受体2(TLR2)];生存素(Survivin)、增殖细胞核抗原(Ki-67)阳性表达情况。结果研究组患者的临床治疗总有效率96.67%高于对照组的73.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组患者的TNF-α(9.66±0.43)ng/L、IL-10(8.83±0.54)ng/L、TLR2(6.31±0.29)ng/L均低于对照组的(12.09±0.78)、(10.79±1.36)、(7.95±0.46)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组患者Survivin阳性表达率(24.45±2.97)%、Ki-67阳性表达率(20.71±2.49)%低于对照组的(36.21±3.96)、(40.58±3.83)%,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组并发症发生率为6.67%(2/30),与对照组的10.00%(3/30)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论针对VAIN患者给予VAIN患者激光联合干扰素治疗的临床效果更佳,能够有效改善炎症因子指标及Survivin、Ki-67表达情况,减少患者并发症的发生,值得推广应用。

宫颈HSIL患者锥切术联合重组人干扰素治疗后复发残留的影响因素

目的探讨锥切术联合重组人干扰素治疗后宫颈高度鳞状上皮内病变(HSIL)复发残留的相关影响因素。方法回顾性选取2020年1月至2022年1月唐山市妇幼保健院收治的宫颈HSIL患者217例,收集患者术前、术后相关临床资料。根据患者术后1年是否复发或残留,分为复发残留组(n=41)及无复发残留组(n=176)。对比两组临床资料、HPV高危型及低危型发生率,并采用多因素Logistic回归分析宫颈HSIL患者锥切术后HSIL复发残留的影响因素。结果217患者经过治疗发生尿潴留7例,尿路感染3例,留置尿管时间和残余尿量分别为(10.26±3.25)d、(60.25±15.52)mL,患者均能自主排尿。复发残留组与无复发残留组年龄、初次性生活年龄、人工流产史、术前HPV感染类型、锥切标本宽度及厚度、累及腺体、切缘状态、术后用药、术后性生活比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。锥切术前,HSIL复发残留组HPV感染以高危型为主,无复发残留患者以低危型为主。Logistic分析显示,术前HPV高危型感染、锥切标本宽度≤2 cm、锥切标本厚度≤1 cm、累及腺体和切缘阳性均为锥切术后宫颈HSIL患者复发残留的高危影响因素。结论锥切术结合重组人干扰素治疗HSIL可以有效促进患者术后排尿功能的康复;锥切术前,HSIL复发残留组HPV感染以高危型为主,术前HPV高危型感染、锥切标本宽度≤2 cm、锥切标本厚度≤1 cm、累及腺体和切缘阳性均为锥切术后宫颈HSIL患者复发残留的高危影响因素。

重组猪干扰素α发酵纯化与抗病毒活性测定

本研究根据大肠杆菌的密码子偏好性,对UniProt数据库中的猪干扰素α序列(编号:P49879)进行优化,合成了相应的基因片段,并构建了pET-28a-INF-α原核表达载体。将重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经过20 L发酵罐培养24 h,在OD 600为108时收获细胞。表达的猪干扰素α主要以包涵体的形式存在,经过变性、复性、镍亲和纯化与酶切等步骤,得到了无标签的猪干扰素α蛋白。SDS-PAGE电泳显示,该蛋白的分子量约为19 kDa,纯度高达95%。细胞病变抑制法测定表明,该蛋白的抗病毒活性为1.28×10^(7 )IU/mg。本研究成功获得了高纯度、高活性的猪干扰素α蛋白,为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础,为进一步重组蛋白工业化生产提供了理论依据。

端粒酶、γ-干扰素、腺苷酸脱氨酶及结核感染T细胞斑点试验在诊断结核性和恶性胸腔积液中的作用分析

目的 评价端粒酶、γ-干扰素(IFN-γ)、腺苷酸脱氨酶(ADA)及T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测在诊断结核性和恶性胸腔积液中的价值。方法 纳入40例早期结核性胸膜炎患者(结核组)和40例恶性胸腔积液患者(肿瘤组),分别在治疗前抽取患者胸腔积液及空腹血液,应用酶联免疫吸附分析法检测端粒酶的含量和IFN-γ的浓度,应用比色分析法检测ADA的活性,采用Elispot斑点计数检测T-SPOT.TB阳性率。结果 结核组和肿瘤组的端粒酶含量分别为(1.46±0.73)×10~(-3) nmol/L和(3.34±1.72)×10~(-3) nmol/L,结核组端粒酶含量低于肿瘤组(P<0.01);结核组和肿瘤组的IFN-γ含量分别为(137.44±38.93) U/L和(27.94±8.46) U/L,ADA含量分别为(68.42±9.58) U/L和(15.39±4.43) U/L,2组患者IFN-γ含量和ADA含量比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结核组IFN-γ浓度、ADA活性及T-SPOT.TB阳性率均高于肿瘤组(P<0.01)。联合应用端粒酶、IFN-γ、ADA及T-SPOT.TB 4个诊断指标的诊断试验鉴别诊断结核性和恶性胸腔积液的敏感度为0.974,特异度为0.974。结论 联合应用端粒酶、IFN-γ、ADA及T-SPOT.TB 4个诊断指标的诊断试验在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的鉴别诊断中具有重要意义。

慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建

干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。

γ-干扰素试验在结核病诊断中的临床应用价值

目的分析CLIA检测γ-干扰素试验诊断结核病的临床应用价值。方法选取2023年5月-2023年9月在本院接受检查的疑似结核病患者1616例,以临床最终诊断结果为金标准,判断全自动化学发光法检测γ-干扰素试验在结核病诊断中的诊断效能。结果临床最终诊断结果显示,阳性患者916例,阴性患者700例。γ-干扰素试验结果显示,阳性患者908例,阴性患者708例。CLIA检验γ-干扰素试验在肺外结核中的阳性检出率较高,但与临床最终诊断结果比较差异有统计学意义(P<0.05);在结核病、肺结核、呼吸道疾病、肺部炎症疾病的阳性检出率与临床最终诊断结果比较差异无统计学意义(P>0.05);在结核病中的敏感度、特异度、准确度与临床最终诊断结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果采用CLIA检测γ-干扰素试验可对结核病进行诊断,可明确患者为结核病或非结核疾病,并且在结核病的诊断中具有较高的敏感度、特异性。

重组人干扰素α-1b治疗小儿轮状病毒感染性肠炎的效果及安全性

目的:观察重组人干扰素α-1b治疗小儿轮状病毒感染性肠炎的效果及安全性。方法:选取2022年6月—2023年6月枝江市人民医院收治的186例小儿轮状病毒感染性肠炎,依据随机数表法分为对照组和观察组,各93例。对照组采用临床常规治疗及布拉氏酵母菌散,观察组在对照组基础上采用重组人干扰素α-1b,持续治疗3 d。比较两组治疗3 d后临床疗效,临床症状缓解情况,治疗前、治疗3 d后的肠黏膜损伤指标、肠道菌群、免疫功能,以及研究期间安全性。结果:治疗3 d后,观察组总有效率高于对照组;观察组腹痛消失时间、止泻时间、热退时间早于对照组;治疗3 d后,两组乳杆菌、双歧杆菌和大肠埃希菌菌落数较治疗前均升高,观察组高于对照组,两组粪肠球菌菌落数较治疗前均降低,观察组低于对照组;治疗3 d后,两组血清晚期糖基化终末产物(AGEs)、内毒素(ET)、二胺氧化酶(DAO)水平与治疗前相比均降低,观察组低于对照组;治疗3 d后,两组外周血CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)与治疗前相比均升高,观察组高于对照组,外周血CD8^(+)较治疗前均降低,观察组低于对照组;研究期间观察组不良反应发生率低于对照组;上述各指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在小儿轮状病毒感染性肠炎的临床治疗中,应用重组人干扰素α-1b,能明显改善患儿的临床症状,改善肠道菌群,增强机体免疫力,缓解肠道黏膜损伤,安全性较高,且疗效显著。

重组人干扰素α-2b乳膏治疗小儿传染性软疣的临床效果

目的 探讨重组人干扰素α-2b乳膏治疗小儿传染性软疣的临床效果。方法 选取2022年3月至2023年3月在滨州市中心医院皮肤科就诊的84例传染性软疣患儿作为研究对象,按照奇偶分组法分为参照组(42例)与试验组(42例)。参照组采用夹疣治疗,试验组采用重组人干扰素α-2b乳膏治疗。比较两组治疗效果及复发情况。结果 试验组总有效率高于参照组,复发率低于参照组(P <0.05)。结论 重组人干扰素α-2b乳膏治疗小儿传染性软疣的临床效果较好,复发率较低,值得临床推广应用。

喉咽清颗粒与阿比多尔及干扰素联合治疗轻型/普通型新型冠状病毒感染的疗效与安全性

目的观察喉咽清颗粒、阿比多尔及干扰素联合治疗轻型/普通型新型冠状病毒感染的疗效与安全性。方法回顾性分析2022年12月7日—2023年4月30日苏州大学附属第一医院收治的轻型/普通型新型冠状病毒感染患者80例的临床资料,按照治疗方法不同分为二联组和三联组,每组40例。二联组患者给予阿比多尔联合干扰素治疗,三联组患者在二联组基础上给予喉咽清颗粒。2组患者均治疗14 d。比较2组有效率,治疗前后白细胞计数、淋巴细胞百分比,临床症状消失时间,核酸转阴时间及转阴率、肺部病灶开始吸收时间及完全吸收率,不良反应。结果治疗14 d后,三联组有效率为92.50%,高于二联组的75.00%(χ^(2)=4.501,P=0.034);2组白细胞计数、淋巴细胞百分比高于治疗前,且三联组高于二联组(P<0.01)。三联组发热、咳嗽、咽痛、鼻塞、流涕、乏力消失时间短于二联组(P<0.05或P<0.01)。三联组核酸转阴时间为(11.32±1.03)d,短于二联组的(14.48±0.95)d(t=14.263,P<0.001)。三联组治疗7 d后核酸转阴率与二联组比较,差异无统计学意义(50.00%vs.45.00%,χ^(2)=0.201,P=0.654)。三联组肺部病灶开始吸收时间短于二联组(P<0.01),治疗14 d后肺部病灶完全吸收率高于二联组(47.50%vs.25.00%,χ^(2)=4.381,P=0.036)。三联组治疗期间不良反应总发生率与二联组比较,差异无统计学意义(5.00%vs.7.50%,P=1.000)。结论在阿比多尔、干扰素基础上加用喉咽清颗粒治疗轻型/普通型新型冠状病毒感染具有较好的临床疗效及安全性,能够快速改善患者临床症状,促进肺部病灶吸收及核酸转阴。

聚乙二醇干扰素α-2b联合替诺福韦对乙型肝炎患者肝功能及安全性的影响

目的:探讨聚乙二醇干扰素α-2b联合替诺福韦对乙型肝炎患者肝功能及安全性的影响。方法:选取2018年10月—2020年8月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的96例乙型肝炎患者作为研究对象,采用乱数表法分为A组和B组,每组各48例。A组给予替诺福韦酯片治疗,B组在A组基础上加用聚乙二醇干扰素α-2b治疗。比较两组患者治疗前、后总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、白介素-4(IL-4)和白介素-2(IL-2)水平。比较两组患者乙型肝炎病毒(HBV)-DNA转阴率、乙型肝炎e抗原(HBeAg)转阴率、转换率和ALT复常率。统计两组患者治疗有效率和不良反应发生率。结果:治疗后,B组总胆红素(TBIL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平均低于A组,两组患者白蛋白(ALB)均升高且B组升高幅度大于A组,差异有统计学意义(t=15.629、27.253、30.580、11.761,P<0.05);治疗后,两组患者酶联免疫吸附测定干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)均升高,且B组升高幅度大于A组,白介素-10(IL-10)和白介素-4(IL-4)均降低,且B组降低幅度大于A组,差异有统计学意义(t=20.777、7.614、24.624、1.609,P<0.05);B组HBV-DNA转阴率、ALT复常率、乙型肝炎e抗原(HBeAg)转阴率、HBeAg转换率均高于A组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.381、4.800、4.019、4.909,P<0.05);B组治疗总有效率高于A组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.360,P<0.05);两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.079,P>0.05)。结论:聚乙二醇干扰素α-2b联合替诺福韦可有效改善患者肝功能,调节免疫功能且安全性较高。

重组人干扰素α1b雾化吸入联合布地奈德对反复上呼吸道感染患儿的治疗效果

目的分析重组人干扰素α1b雾化吸入联合布地奈德对反复上呼吸道感染(RURTI)患儿的治疗效果。方法选取2022年6月至2023年6月我院收治的90例RURTI患儿,随机分为联合组(n=45)和单一组(n=45),单一组予以匹多莫德治疗,联合组予以重组人干扰素α1b雾化吸入联合布地奈德治疗。对比两组的临床疗效、症状消失时间及不良反应。结果联合组总有效率为93.33%,高于单一组的75.56%(P<0.05)。联合组发热、咽喉肿痛、咳嗽、肺啰音消失时间短于单一组(P<0.05)。两组的不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论重组人干扰素α1b雾化吸入联合布地奈德治疗RURTI患儿可提高临床疗效,缩短发热、咽喉肿痛、咳嗽、肺啰音消失时间,安全性良好。

γ干扰素与脓毒性休克患者严重程度的相关性及对预后的评估价值

目的探讨γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)的表达水平和脓毒性休克(septic shock)患者病情严重程度的相关性及其对预后的评估价值。方法收集96例脓毒性休克患者的临床资料及血清,并按28 d结局分为存活组和死亡组;同时收集同期健康体检人群的30例血清作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测3组的IFN-γ的表达水平,分析组间IFN-γ的表达水平及各项临床资料。结果脓毒性休克患者血清的IFN-γ表达水平较健康体检人群低[212.80(151.11,255.79)ng/L vs.343.37(314.5,427.95)ng/L,P<0.01]。96例脓毒性休克中有54例存活组,42例死亡组,比较两组的临床资料,两组患者的性别、吸烟史、SBP、DBP、SI、Lac、IL-6、IFN-γ、PCT、SOFA评分、APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义(P<0.01)。logistic回归分析显示提示Lac、IFN-γ表达下降、APACHEⅡ评分是脓毒性休克患者死亡的独立危险因素[优势比(OR)和95%置信区间(95%CI)分别为6.491(1.404~30.004)、0.954(0.954~0.999)、3.476(1.210~9.984),P<0.05]。INF-γ和Lac、APACHEⅡ的Spearman相关性分析呈负相关,相关系数分别为-0.38、-0.35。绘制Lac、IFN-γ、APACHEⅡ的ROC曲线,三者的AUC分别为0.847、0.869、0.833,三者联合预测的AUC为0.978,三者联合预测的价值优于单一指标(P<0.001)。结论IFN-γ表达水平下降与脓毒性休克患者的严重程度呈正相关,对预后有较好的评估价值。

狂犬病病毒强、弱毒株糖蛋白调节Ⅰ型干扰素作用的差异分析

【目的】狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种高致死性人兽共患传染病。Ⅰ型干扰素(IFN-I)通路在抵抗RABV感染中发挥重要作用。RABV可通过磷蛋白及核蛋白的功能逃逸IFN-I的抗病毒作用,本研究旨在探讨对RABV的致病性有重要影响的糖蛋白(Glycoprotein,G)在调节IFN-I通路方面扮演怎样的角色。【方法】将RABV弱毒株Hep-Flury的G基因替换成致病株CVS-11的G基因,拯救得到重组病毒HepG,分析Hep-Flury、CVS-11和HepG这3种毒株在体内和体外感染对IFN-I通路激活和调控的差别,比较它们在神经细胞中对抗IFN-I抗病毒作用的差异性。【结果】替换了CVS-11的G基因后,重组病毒HepG致病力增强,能够100%致死小鼠,在鼠脑中的增殖水平显著高于亲本株Hep-Flury。在感染鼠脑早期及体外神经细胞时,弱毒株Hep-Flury能够较快地激活IFN-I通路相关基因的表达,重组病毒HepG的激活能力介于HepFlury和CVS-11之间。利用Poly(I:C)激活神经细胞的IFN-I通路后,Hep-Flury的增殖被显著抑制,CVS-11和HepG的复制几乎不受影响,表现出一定的抵抗能力。【结论】RABV的G蛋白在调节和抵抗IFN-I通路方面发挥重要功能,为进一步探究RABV致病毒株的G蛋白如何协助病毒在中枢神经系统中逃逸IFN-I提供了线索和依据。

核苷(酸)类似物序贯联合干扰素α-2b治疗低水平乙型肝炎表面抗原慢性乙型病毒性肝炎的效果观察

目的观察核苷(酸)类似物(NAs)序贯联合干扰素α-2b(IFNα-2b)治疗低水平乙型肝炎表面抗原(HBsAg)慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的效果,为临床提供参考。方法选取2016年1月至2021年12月东莞市长安医院收治的80例低水平HBsAg CHB患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各40例。对照组患者单用NAs治疗,观察组患者在NAs治疗基础上序贯联合IFNα-2b治疗。比较两组患者HBsAg转阴情况、HBsAg水平、谷丙转氨酶(ALT)水平、血清乙型肝炎病毒脱氧核苷酸(HBV-DNA)水平,分析观察组患者不良反应发生情况。结果治疗12、24周,两组患者HBsAg转阴率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗48周,观察组患者HBsAg转阴率高于对照组(P<0.05)。治疗48周,观察组患者HBsAg水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(均P<0.05)。两组患者血清ALT水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。两组患者血清HBV-DNA水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。观察组部分患者发生流感样症状、食欲下降、乏力、白细胞计数降低、血小板减少等不良反应,但均能耐受,无严重不良反应发生。结论NAs序贯联合IFNα-2b治疗低水平HBsAg CHB患者能提高HBsAg转阴率,降低HBsAg水平,安全性良好,但对血清ALT水平、HBV-DNA水平影响不明显。

鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定

【目的】通过原核表达系统表达鸡γ-干扰素(chicken interferon-gamma,ChIFN-γ),并制备其单克隆抗体,为建立检测天然ChIFN-γ的免疫学方法提供试验材料。【方法】将密码子优化的ChIFN-γ基因克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组质粒pET21a-ChIFN-γ;重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,利用IPTG诱导表达重组蛋白;用该纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫合格的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合;用建立的ELISA方法筛选分泌针对ChIFN-γ蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,Protein A/G纯化腹水获得特异性抗体;对单克隆抗体的类和亚类进行鉴定;Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测单克隆抗体的反应性、亲和力和特异性交叉反应;用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体,用两两配对的方法进行抗体配对。【结果】成功制备可溶性重组ChIFN-γ蛋白;Western blotting结果显示,ChIFN-γ与相应抗体结合呈现特异性条带(16 ku);获得7株针对ChIFN-γ的特异性杂交瘤细胞株:3E8、5F8、2G12、5A10、3D8、3B5、3G2。Western blotting和IFA结果显示,7株单克隆抗体反应性良好,均能特异性识别真核表达的ChIFN-γ;单克隆抗体的类和亚类鉴定结果显示,3E8、5F8、3D8、3B5和2G12重链均为IgG1,5A10重链为IgG2a,3G2重链为IgM,7株单克隆抗体的轻链均为Kappa型;所获得的7株单克隆抗体解离常数(dissociation constant,Kd)在1.04~58.33 nmol/L之间,为高亲和力抗体,并获得5组配对抗体。【结论】本研究成功制备了ChIFN-γ蛋白及其单克隆抗体,为进一步开展ChIFN-γ在禽类免疫学、病毒学及疫苗效果评价等相关研究奠定基础。

γ-干扰素诱导蛋白-10 mRNA检测试验对不同年龄人群结核病的辅助诊断价值

目的:探讨γ-干扰素诱导蛋白-10(interferon gamma-induced protein 10,IP-10) mRNA检测技术对不同年龄组结核病患者的辅助诊断价值。方法:前瞻性纳入2018年3月至2022年7月在首都医科大学附属北京胸科医院、河南省传染病医院和深圳市第三人民医院收治、且完成IP-10 mRNA检测的疑似结核病患者1590例。剔除诊断不明确200例,共1390例纳入分析。根据诊断结果分为确诊结核病组(475例)、临床诊断结核病组(518例)、非结核病组(397例)。按照年龄将入组患者分为中青年组(18~59岁)1062例和老年组(60~95岁)328例。在不同年龄组中,以临床诊断结果为标准,分析IP-10 mRNA检测对结核病的诊断效能。结果:中青年组IP-10 mRNA检测的敏感度和特异度分别为90.2%(721/799,95%CI:87.9%~92.1%)和68.8%(170/247, 95%CI:62.6%~74.4%),老年组IP-10 mRNA检测的敏感度和特异度分别为87.8%(159/181,95%CI:82.0%~92.0%)和54.7%(76/139,95%CI:46.0%~63.1%)。两个年龄组间IP-10 mRNA检测的敏感度比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.922,P=0.337),但中青年组IP-10 mRNA检测的特异度高于老年组,差异有统计学意义(χ^(2)=7.704,P=0.006)。随年龄增长,IP-10 mRNA检测的敏感度的变化差异无统计学意义(Z=-1.063,P=0.288),特异度随年龄增长明显降低(Z=-2.846,P=0.004)。结论:IP-10 mRNA检测对中青年结核病患者的辅助诊断更有价值;考虑IP-10 mRNA检测的敏感度受年龄影响较小,可能有助于在老年人群中应用该技术进行结核感染的主动筛查。

Mindin蛋白在经聚乙二醇干扰素α-2b治疗的慢性乙型肝炎中的动态变化及意义

目的 分析聚乙二醇干扰素α-2b(PEG-IFNα-2b)治疗慢性乙型肝炎(CHB)过程中Mindin蛋白的变化以及作用。方法 选取2018年1月—2019年12月于西安交通大学第二附属医院行PEG-IFNα-2b治疗的CHB患者29例,按照临床结局分为治愈组(n=17)与未治愈组(n=12)。分别采集治愈组和未治愈组基线、12周和24周的外周血样本,测量血常规、肝功能、乙型肝炎标志物定量和Mindin蛋白含量。分析比较各时间点HBsAg、ALT、AST及Minidn蛋白水平的组间差异。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。采用Spearman相关性分析法对Mindin蛋白与HBsAg、ALT、AST的相关性进行分析。多元线性回归分析探讨HBsAg、ALT水平对Mindin蛋白的影响。结果 基线资料分析发现,未治愈组和治愈组HBsAg、抗-HBe、Alb和白/球比值(A/G)水平两组间比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。治愈组Mindin蛋白水平呈现持续上升的趋势,24周时Mindin蛋白水平显著高于基线(P<0.05)。24周时治愈组Mindin蛋白水平显著高于未治愈组(P=0.019)。治愈组HBsAg水平均显著低于未治愈组,且组内各时间点与基线比较差异均具有统计学意义(P值均<0.05)。此外,治愈组ALT和AST的变化均呈现先升高后降低的趋势,12周的表达水平均显著高于基线(P值均<0.05)。未治愈组24周ALT和AST水平均显著高治愈组(P值均<0.05)。未治愈组12周时Mindin蛋白水平与ALT呈现出较强的直线相关性(r=0.760 8,P<0.05),进一步的多元线性回归分析同样证明两者间存在线性关系(偏回归系数为1.571,P=0.019)。结论 PEG-IFNα-2b抗病毒治疗24周时的Mindin蛋白水平在治愈组和未治愈组间存在明显差异。提示通过检测Mindin蛋白的动态变化可以更好地预测慢性乙型肝炎的治疗结局,为临床提供参考。

中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基克隆、表达及功能初步鉴定

目的克隆中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基(mhIFNAR2)的基因,并进行抗体制备及功能鉴定。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭脾组织中扩增得到序列,克隆至原核表达载体p RSET-B,表达重组蛋白,电泳和Western Blot法鉴定;重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠制备其胞外段多克隆抗体,免疫组化、免疫荧光和Western Blot法鉴定;再通过si RNA阻断的方法检测其功能。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果从mhIFNAR2扩增出149~1300 bp片段,其同源性在分析的种属中以土拨鼠最高,可达98.05%。成功地构建了表达胞外段mhIFNAR2_((50-181aa))蛋白的原核表达质粒,命名为pRSET-B.mhIFNAR2;其表达重组蛋白分子量27 kD,纯化后纯度约为95%,浓度约为160μg/mL。用纯化的重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠后,获得1∶1000的特异性多克隆抗体,用免疫组化及免疫荧光可见细胞膜、细胞质有表达。合成的三条siRNA,其中有一条起始于277位点的siRNA(siRNA277)与空白对照及阴性对照相比,可以沉默目的基因的表达,并能减弱干扰素的信号通路(P值均<0.05)。结论获得mhIFNAR2的部分序列,成功地制备出抗mhIFNAR2胞外段多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性,并能用于免疫组化、免疫荧光及Western Blot的检测。用siRNA277可以抑制目的基因的表达,并能阻断干扰素的信号通路。

干扰素基因刺激因子激动剂的研究进展

cGAS-STING通路作为固有免疫系统的重要组成部分,可以识别来自病原微生物和宿主细胞的胞质DNA,诱导Ⅰ型干扰素的分泌和炎症细胞因子的生成,激活机体免疫系统,抵抗病原微生物的入侵及增强机体抗肿瘤活性等。该文简要介绍了cGAS-STING通路的生物学功能,主要聚焦于STING激动剂的研究进展,包括CDN类和Non-CDN类STING激动剂的药理作用及其研究阶段,总结与展望STING激动剂研发过程中的问题与挑战,以期为后续相关药物的研发和疾病治疗提供思路。

铁蛋白与犬α干扰素的融合表达及抗病毒活性检测

为获得治疗犬病毒性传染病的特效药物,本研究将铁蛋白与犬α干扰素进行融合表达。首先根据GenBank中公布的犬α干扰素序列(IFN2a)合成模板,通过融合PCR连入铁蛋白编码基因的上游,并将该重组基因克隆至原核表达载体pCold-TF中,获得重组质粒pCold-TF-CaIFN2a-Fe。转化BL21后用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE),蛋白免疫印迹(Western blot)鉴定,获得约89 kDa的可溶性重组目的蛋白。重组蛋白经镍柱纯化后,使用犬肾细胞/水疱疹性口炎病毒(MDCK/VSV)微量细胞病变抑制法检测抗病毒活性,效价确定为8×104 IU/mg,显示出良好的应用前景。