Ⅲ型干扰素信号通路诱导肺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究半胱氨酸蛋白酶(Caspase)激活方式,探讨Ⅲ型干扰素(IFNλ)信号通路诱导凋亡的机制。方法用IFNλ刺激人肺癌细胞A549,或用IL-10刺激表达复合受体FL-10R1/λR1的A549/FL-10R1/λR1细胞。用流式细胞分析检测Caspase3、Caspase8和Caspase9的激活程度。用Caspase抑制剂Z-VAD-FMK抑制Caspase,用流式细胞分析检测Caspase的激活情况,并通过末端转移酶标记术观察其对细胞凋亡的影响。结果 IFNλ信号通路可以上调Caspase3、Caspase8和Caspase9活化水平(5.5、3.5和4.5倍)并诱导凋亡。Z-VAD-FMK抑制Caspase3和Caspase8激活(60.0%和57.9%),但是提高了Caspase9的激活水平(35.1%),且不能阻止凋亡。结论 IFNλ信号可以激活不同的Caspase,通过激活死亡受体通路和线粒体通路来诱导凋亡,但是Caspase不是IFNλ诱导凋亡所必需的。

猪Ⅲ型干扰素原核表达及其抗病毒效果研究

Ⅲ型干扰素(IFN-λ)具有较好的广谱抗病毒能力和免疫功能调节能力,一般在肠道等黏膜部位呈现高表达。猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是引起仔猪腹泻的重要肠道病原,严重困扰生猪产业健康发展。研究构建了携带猪PoIFN-λ3基因的重组表达质粒,转化大肠埃希菌Rosetta感受态细胞原核表达后,经SDS-PAGE和Western blotting检测分析,重组PoIFN-λ3蛋白成功表达,大小约为27 ku,且以包涵体形式存在。变性、纯化、复性后的PoIFN-λ3重组蛋白刺激IPEC-J2细胞,ISG-15、OAS1、Mx-1、IFIT1、IFIT3、IFITM1和IFITM3等干扰素刺激基因(ISGs)表达均显著上调,且在12 h达到峰值(P<0.001)。IPEC-J2细胞分别感染PEDV和PDCoV病毒时,用PoIFN-λ3重组蛋白预处理、同时处理和感染后处理这3种方式处理后观察病毒增殖情况,与对照组相比,PEDV和PDCoV病毒拷贝数均显著下降(P<0.05)。上述结果表明,变性、纯化、复性后的PoIFN-λ3重组原核表达蛋白具有较好的生物活性,不仅可以诱导IPEC-J2细胞免疫刺激基因表达上调,在体外也可以抑制PEDV和PDCoV在IPEC-J2细胞中的复制,为防治仔猪病毒性腹泻提供了基础。

四神丸对急性溃疡性结肠炎小鼠模型中Ⅰ型、Ⅲ型干扰素表达的影响

目的:探究四神丸对急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠组织中Ⅰ型、Ⅲ型干扰素(interferon,IFN)及其受体表达的影响。方法:将雄性C57BL/6Cnc小鼠随机分为对照组、模型组、四神丸组和柳氮磺胺吡啶组(salazosulfapyridine,SASP),对照组灌胃给予0.2 mL生理盐水,其余各组灌胃给予0.2 mL 4%葡聚糖硫酸钠(dextransodiumsulfate,DSS)造模5 d。造模开始第2天灌胃给药,四神丸组给予0.2 mL 1.5 g/kg四神丸,SASP组给予0.25 g/kg柳氮磺胺吡啶0.2 mL,2次/d,连续7 d。给药期间每日计算小鼠的疾病活动指数(diseaseactivityindex,DAI)。给药结束后,采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察各组小鼠结肠组织病理变化并计算组织学评分。采用qPCR法检测各组小鼠结肠组织IFN-α、IFN-β、IFN-λ2、IFN-λ3 mRNAs的表达情况;ELISA法检测各组小鼠结肠组织IFN-α、IFN-β、IFN-λ2、IFN-λ3表达水平;WesternBlot法检测各组小鼠结肠组织中各干扰素受体IFNAR1、IFNAR2、IFNLR1的表达。结果:模型组小鼠DAI水平较对照组显著上升(P<0.001);结肠组织炎性细胞大量浸润,淋巴结肿大,结肠黏膜结构破坏,隐窝结构缺失,炎症累及范围大,组织学评分显著升高(P<0.001)。IFN-α、IFN-β、IFN-λ2、IFN-λ3 mRNA水平显著降低(P<0.05~0.01);IFN-α、IFN-β、IFN-λ2、IFN-λ3表达显著降低(P<0.01~0.001);IFNAR1、IFNAR2、IFNLR1水平显著降低(P<0.01~0.05)。四神丸组小鼠DAI较模型组显著下降(P<0.001);结肠组织炎性细胞浸润明显减少,结肠黏膜的结构再生明显恢复,隐窝结构恢复,淋巴结明显缩小,炎症累及范围缩小,组织学评分显著降低(P<0.001)。IFN-α、IFN-β、IFN-λ2、IFN-λ3 mRNA水平显著上升(P<0.01~0.001);IFN-α、IFN-β、IFN-λ2、IFN-λ3水平显著升高(P<0.01~0.001);IFNAR1、IFNAR2、IFNLR1水平显著升高(P<0.05~0.001)。结论:四神丸通过调节结肠组织Ⅰ型、Ⅲ型干扰素的表达水平来缓解急性溃疡性结肠炎小鼠的症状及体征。

PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞后对Ⅲ型干扰素应答的调控

Ⅲ型干扰素(IFN-λ)是一种新发现的抗病毒因子,在天然免疫和获得性免疫应答方面具有多重功能;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后造成猪的免疫抑制状态,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的应答受到抑制,IFN-λ的应答情况还不清楚。为揭示PRRSV感染猪后IFN-λ的应答情况与调控机制,以期进一步揭示PRRSV抑制宿主抗病毒免疫应答的分子机理。利用PRRSV强毒与弱毒株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot检测IFN-λ在mRNA与蛋白水平的差异,并检测了不同非结构蛋白(NSP)对IFN-λ的调控作用。结果发现PRRSV感染PAM细胞后均在mRNA水平上诱导IFN-λ1和IFN-λ3表达上调,且IFN-λ3比IFN-λ1上调更明显;然而在蛋白水平上二者均为表达下调。人源IFN-λ3比IFN-λ1显示出更强的抑制PRRSV复制的作用,且对强毒株GSWW/15的抑制效果更明显。PRRSV NSP7b和NSP9转染PK-15细胞后能使IFN-λ3的mRNA上调表达,但蛋白水平无变化;而NSP7a对IFN-λ3的mRNA和蛋白水平均无影响,提示NSP7b和NSP9可能通过某种机制抑制IFN-λ3的应答。

Ⅲ型干扰素及其抗猪病毒性疾病研究进展

综述了Ⅲ型干扰素抗猪易感病毒研究进展,总结了Ⅲ型干扰素抗病毒机制及作为安全性抗病毒药物的优势,探讨了Ⅲ型干扰素及其抗猪病毒性疾病研究现状,重点阐述了Ⅲ型干扰素抗猪易感病毒作用及其防治猪病毒性疾病的相关应用和流行性猪易感病毒对Ⅲ型干扰素的免疫逃逸策略,分析了目前Ⅲ型干扰素未得到广泛应用的问题并提出了建议,展望了Ⅲ型干扰素作为安全性抗病毒药物的应用潜力及前景,以期为猪病毒性疾病的治疗提供理论依据及新思路。

Ⅲ型干扰素在抗人类免疫缺陷病毒感染中的作用

Ⅲ型干扰素由IFN-λ1、IFN-λ2、IFN-λ3和新发现的IFN-λ4组成,与Ⅰ型干扰素激活共同信号通路,生物活性相似,具有抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖和免疫调节等作用,在抗HIV感染中起重要作用。最初研究发现白细胞白介素28B的基因多态性与丙型肝炎病毒感染者治疗应答及自发清除相关,IL-28基因多态性可用来预测HCV感染的干扰素治疗效果和临床指导用药,使得该位点成为研究热点。而干扰素的抗病毒共性也引起了学者关于IL-28基因多态性与HIV感染相关性的关注,近来不少研究发现IFNL3/4基因座的遗传变异与艾滋病疾病易感性、抗病毒免疫应答和疾病进程存在相关性,而IFNL基因突变原因及对抗病毒感染的生物学机制尚不清楚。本文就Ⅲ型干扰素的生物活性、抗病毒作用机制、抗HIV感染及其基因多态性位点的相关性研究等方面进行综合论述。

Ⅲ型干扰素抵抗寨卡病毒感染导致不良妊娠的机制

寨卡病毒是一种蚊媒黄病毒,妊娠早期妇女感染寨卡病毒可引起新生儿小头畸形、胎儿宫内发育迟缓及胎儿自发性流产等不良妊娠。人胎盘原代滋养细胞分泌的Ⅲ型干扰素及Ⅲ型干扰素诱导产生的干扰素刺激基因可在细胞中建立抗病毒状态,保护胎儿免受寨卡病毒的感染。Ⅲ型干扰素对寨卡病毒导致的不良妊娠保护作用具有阶段特异性,对妊娠早期没有保护作用。本文就寨卡病毒导致不良妊娠和Ⅲ型干扰素抵抗寨卡病毒感染等方面的机制研究进行综述,为深入了解寨卡病毒致病机制和免疫预防提供参考。

Ⅲ型干扰素在HPV阳性宫颈癌中作用的研究进展

高危的人乳头瘤状病毒(HPV)持续性感染是导致宫颈癌的主要原因。在高危HPV感染过程中,Ⅲ型干扰素与相应受体结合,通过JAK/STAT途径发出信号,刺激干扰素刺激基因(ISGs)大量表达,进而抑制病毒复制。Ⅲ型干扰素作为抵御病原体入侵的第一道防线,具有抗病毒、调节免疫和抗肿瘤等与Ⅰ型干扰素相似的功能。虽然Ⅲ型干扰素和Ⅰ型干扰素在经典通路上有诸多相似之处,但两者的受体结构不同,且Ⅲ型干扰素受体只分布在上皮组织细胞,故Ⅲ型干扰素发挥功能时更具有靶向性。最新研究发现,Ⅲ型干扰素可以通过抑制肿瘤细胞复制、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制血管增生来发挥抗肿瘤的作用。目前临床上主要将Ⅰ型干扰素(重组干扰素α-2β)用于HPV感染患者及宫颈癌患者的治疗,Ⅲ型干扰素还处在研究阶段。有研究显示,Ⅲ型干扰素与Ⅰ型干扰素功能相近,但副作用更少,或将是治疗宫颈癌的一个新方案。故本文就目前Ⅲ型干扰素的抗病毒机制及其在高危HPV感染所致宫颈癌中的研究现状展开综述,以期为Ⅲ型干扰素的临床应用提供相关参考。

人干扰素-γ植物双元表达载体的构建

为研究在药用植物中表达人干扰素 (IFN) ,构建了人IFN -γ植物双元表达载体。方法是将IFN -γ基因的pstI片段插入克隆载体PBluescriptSK(+) 中 ,通过蓝白斑筛选以xbaI kpnI证实 ,以ndeI kpnI鉴定插入方向。得到中间载体PSKIFN,用xbaI kpnI双酶切PSKIFN ,回收 1.3kb片段 ,将此片段插入植物表达载体PROKII上 ,经限制性酶切分析及自动测序 ,结果证实插入片段大小及序列正确 ,构建获得成功 ,为进一步在药用植物中表达IFN

Ⅲ型干扰素的抗肿瘤作用

Ⅲ型干扰素(IFNλs)是干扰素家族中最新的一组成员。他们的很多生物学活性与临床上应用广泛的IFNα/β十分相似,但是他们所结合的受体与IFNα/β迥异。Ⅲ型干扰素的毒副作用显著小于IFNα/β,且抗肿瘤作用明显。本文回顾了近年来对Ⅲ型干扰素抗肿瘤功能研究的最新进展。

Ⅲ型干扰素相关生物学功能的研究进展

干扰素(Interferon,IFN)是一类具有多功能生物活性的糖蛋白,包含3个家族(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型)。Ⅲ型干扰素(TypeⅢinterferon,IFN-Ⅲ)是近16年发现的新型干扰素,其诱导过程及生物学功能与I型干扰素(TypeⅠinterferon,IFN-Ⅰ)相似,在抗病毒、免疫调节、抗肿瘤、抑制自身免疫病、抑制过敏性哮喘以及抗细菌和真菌等方面具有重要作用。本文将从IFN-Ⅰ和IFN-Ⅲ的分类、序列同源性和信号传导等方面进行阐述,并结合近年来IFN-Ⅲ在疾病治疗过程中所取得的成就,综述IFN-Ⅲ的生物学功能,旨在为IFN-Ⅲ的深入研究以及在多种疾病的诊断和防控中提供参考。

Ⅲ型干扰素--新型抗病毒细胞因子

干扰素(IFN)是抗病毒感染的第一道防线,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素不仅可抑制病毒,而且还能参与天然免疫反应和获得性免疫反应。最近干扰素家族增添一位新成员:Ⅲ型干扰素,即IFN-λ,因其具有类似干扰素的抗病毒活性且能诱导干扰素相关基因的表达而命名。IFN-λ受体与Ⅰ型干扰素的受体不同,但具有与Ⅰ型干扰素类似的诱导表达方式和信号转导通路,并能激活一系列相似的干扰素刺激基因。就IFN-λ家族及其受体、基因表达和信号转导机制、抗病毒作用等进行综述。

Ⅲ型干扰素抗流感病毒作用的研究进展

先天免疫应答是机体防御的第一道防线,激活炎症通路清除病毒。流感病毒感染可诱导Ⅲ型干扰素(Type Ⅲ interferons, IFNs),即IFN-λ1、λ2和IFN-λ3表达,是宿主抵抗流感病毒的关键细胞因子。流感病毒感染时,病原体相关分子模式的病毒成分被宿主病原体识别受体识别,激活多个先天免疫细胞信号级联通路,最终诱导产生Ⅲ型干扰素以及其他各种促炎细胞因子和趋化分子。Ⅲ型干扰素通过诱导干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes, ISGs)表达抗病毒因子抑制病毒复制以及调控T细胞免疫等机制,发挥抗流感病毒作用。本文综述了Ⅲ型干扰素及其在流感病毒先天免疫机制中的最新进展。

Ⅲ型干扰素抗病毒作用的研究进展

Ⅲ型干扰素(typeⅢinterferon,IFN-Ⅲ;亦称为IFN-λ)是2003年被发现的一种新型IFN,由IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28A)、IFN-λ3(IL-28B)和IFN-λ4等细胞因子组成。IFN-λ通过与细胞膜上特异性受体IFN-λ受体1(IL-28RA)和IL-10R2结合,激活Janus激酶/信号转导与转录激活子等信号通路进行信号转导,从而发挥其生物学作用。IFN-λ是一种极具临床应用前景的细胞因子,与Ⅰ型IFN相比,在慢性丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染中,能更好地改善病毒学应答以及提高病毒清除率,且不良反应更少。现就IFN-λ在消化道、肝脏以及呼吸道感染中的抗病毒作用作一概述。

家猪Ⅲ型干扰素的生物化学性质与抗病毒能力研究

根据(GenBank公布的家猪Ⅲ型干扰素序列,设计特异性引物,从猪肾细胞PK-15中调取了家猪干扰素PoIFN-λ1,-λ3的cDNA序列,构建成pcDNA3.1B-/PoIFN-λs真核表达载体,并进行表达及性质研究.首先检测了在中华仓鼠肾细胞(BHK-21)中的转录及翻译水平,发现PoIFN-λ1,-λ3分别具有1个及2个N端糖基化位点.其次,鉴定了PoIFN-λs在猪肾细胞IBRS-2及PK-15中对合成双链RNA poly I:C、口蹄疫病毒(FMDV)及伪狂犬病毒(PRV)的应答表达谱.此外,检测了PoIFN-λs在IBRS-2中诱导抗病毒基因及细胞因子的表达情况,结果显示PoIFN-λs可显著诱导MX、OAS、PKR等干扰素激活基因(ISGs)及细胞因子IL-6、TNF-α的表达.抗病毒实验表明,PoIFN-λs在PK-15/PRV及IBRS-2/FMDV系统均具有低于PoIFN-α12的抗病毒活性;但在与PoIFN-α12联合使用时,抗FMDDV效果增强,Real time PCR检测发现ISGs表达量协同升高.

Ⅲ型干扰素研究现状

最早发现的细胞因子是干扰素(interferon,IFN),因能干扰病毒的复制和感染而得名。Ⅲ型干扰素是2003年发现的新类型,其具有IFN和白细胞介素的特点,称为IFNλs(包括IL-28A、IL-28B和IL-29)。Ⅲ型干扰素受体复合物是由IL-28Rα和IL10-Rβ组成的异源二聚体,通过Janus激酶/酪氨酸激酶(Janus kinase/signal transducer andactivator of tran-scription signaling pathway,JAK/STAT)等信号途径,发挥抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。本文对Ⅲ型干扰素的研究进行综述,重点是其生物活性的最新进展。

树突状细胞分泌的IFN-λ在丙型肝炎病毒感染中的作用

近年来在Ⅲ型干扰素(IFN-λ)基因区域的单核苷酸多态性可以很好地预测自发性的或是经过药物治疗的丙型肝炎病毒(HCV)感染患者的愈后。至此,越来越多的证据表明,人体先天性免疫应答与IFN-λ基因型效应息息相关。树突状细胞(DCs)在宿主HCV感染的免疫应答中起到关键作用,并且这些至关重要的作用在IFN-λ基因型效应中也正逐渐体现。DCs可以分为很多个亚群,其中主要分泌IFN-λ的DCs,有骨髓样树突状细胞和浆细胞样树突状细胞。基于DCs生物学的复杂性,本综述旨在总结目前已知的有关DCs在HCV感染中所起到的作用以及IFN-λ与DCs的关系。

不同时期慢性HBV感染者血清IFN-λs水平的变化

目的了解不同时期慢性HBV感染者血清IFN-λs水平,探讨其变化与慢性HBV感染进程的关系。方法选择120例慢性HBV感染者,其中HBV携带者、慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者、乙肝肝硬化患者、HBV相关肝癌患者各30例,以20名健康人为对照。采用双抗体夹心ELISA法,检测各组研究对象血清IFN-λs(IL-29、IL-28A和IL-28B)水平。结果慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相关肝癌患者的血清IFN-λ1(IL-29)水平均明显低于健康对照组(P均<0.01),慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相关肝癌患者血清IFN-λ1(IL-29)水平明显低于HBV携带者(P均<0.01);HBV携带者血清IL-29水平与健康对照组相近(P>0.05)。各组慢性HBV感染患者的血清IFN-λ2(IL-28A)水平与健康对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。HBV相关肝癌患者血清IFN-λ3(IL-28B)水平高于健康人、HBV携带者、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者(P均<0.01);HBV携带者、慢乙肝、乙肝肝硬化和健康对照组间血清IL-28B水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性HBV感染者血清IFN-λ1(IL-29)水平明显下降,而且HBV相关肝癌患者血清IFN-λ3(IL-28B)的水平明显升高,可能与肝癌的发生有关。

HBV感染与IL-29表达的相关性

目的检测乙型肝炎患者血清中Ⅲ型干扰素IL-29的表达水平,探讨HBV感染是否会上调IL-29的表达。方法收集健康人、乙肝患者的血清,用ELISA试剂盒检测IL-29的表达,并从新鲜全血分离外周血单个核细胞(PBMC),提取总RNA,半定量PCR方法检测IL-29 mRNA表达水平。构建带萤光素酶(luciferase)报告系统的IL-29启动子质粒,分别转染到能稳定表达HBV病毒颗粒的HepG2.2.15细胞与对照的HepG2细胞,测萤光素酶活性,并分析HBV对IL-29启动子活性的影响。结果乙肝患者血清中IL-29与IL-29 mRNA的表达水平显著高于健康人,HBeAg阳性患者血清中IL-29及IL-29 mRNA的表达水平均高于HBeAg阴性患者。转染至HepG2.2.15细胞中的IL-29启动子报告质粒的活性显著高于转染至对照HepG2细胞者。结论 HBV感染后,激活机体Ⅲ型干扰素IL-29的启动子活性,从而使IL-29的表达水平显著上调。

IL-29及其抗病毒作用

人白细胞介素（Human interleukin-29，Hil-29）是新近发现的细胞因子，定位于19号染色体，是干扰素家族成员之一，也是一种多效的细胞因子。它具有抗病毒、抗增殖、抗肿瘤和免疫调节等多种功效。本文将重点探讨其抗病毒作用。