α-干扰素和COX-2抑制剂对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用研究

目的研究α-干扰素和环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布和α-干扰素处理对肝癌细胞增殖的影响;通过荧光显微镜检测细胞凋亡。结果实验组与对照组相比,能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,两种药物高浓度联合作用48 h后,对肝癌细胞的生长抑制率可达92.44%±0.98%。α-干扰素和塞来昔布对肝癌细胞的增殖抑制具有协同作用。荧光显微镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。结论 COX-2抑制剂塞来昔布和α-干扰素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖有协同抑制作用,同时能诱导其凋亡,并且呈剂量和时间依赖性,这提示α-干扰素和COX-2抑制剂塞来昔布对HCC的预防和治疗可能有积极意义。

重组人干扰素α-1b耳前注射治疗病毒性角膜炎

目的:观察重组人干扰素α1b耳前sc治疗病毒性角膜炎的疗效。方法:病毒性角膜炎病人72例(86眼),男性33例(38眼),女性39例(48眼),年龄(32±s16)a,分为2组。A组36例(46眼)用干扰素α1b,成人5～10μg,儿童2.5～5μg加2%利多卡因0.3～0.5mL,患侧耳前sc,疗程为3wk,wk1sc2～5次,wk2sc1～2次,wk3起每周sc1次。愈后随访3mo以上,每月sc1次×3mo,疗程3mo以上,其他用药与B组相同。B组36例(40眼)用常规阿昔洛韦等抗病毒药治疗。结果:wk1和wk3,A组有效率及治愈率均大于B组,2组疗效比较经Ridit分析P<0.05,P<0.01;2例出现发热不良反应。随访3mo,A组复发率明显低于B组(P<0.05)。结论:重组人干扰素α1b耳前sc是治疗病毒性角膜炎的一种有效疗法,尤其在缩短疗程和预防病毒性角膜炎复发方面更为突出。

利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸

目的获取大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(re-MAP)基因,构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶的原核高表达载体pACYCDuet-1-MAP,利用大肠杆菌BL21作为宿主菌进行原核表达,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法提取大肠杆菌BL21基因组作为模板,用PCR方法扩增得到大肠杆菌MAP基因,并克隆到载体质粒pGEM-7zf(-)中,将重组质粒pGEM-7zf(-)-MAP转化感受态大肠杆菌DH5α,蓝-白斑筛选及测序验证正确后,将reMAP基因克隆至表达载体质粒pACYCDuet-1,Nco I/BamH I双酶切及PCR验证正确后,将重组表达质粒pACYC-Duet-1-MAP转化至感受态大肠杆菌BL21中,筛选得到阳性克隆通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建re-MAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果 Nco I/BamH I双酶切、PCR验证及测序结果表明重组表达质粒pACYCDuet-1-MAP构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析结果表明re-MAP和rhIFN-α2b均得到正确表达;酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,切除MET的活性>30 pmol/(μg.min);两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94%、体外作用切除率>96%。结论 reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。

氧气驱动雾化吸入α-干扰素治疗毛细支气管炎的疗效观察

目的观察氧气驱动雾化吸入α-干扰素对小儿毛细支气管炎的疗效。方法 2011年10月至2012年3月对69例毛细支气管炎患儿应用氧气驱动雾化吸入α-干扰素治疗。结果治疗组显效率明显高于对照组(P<0.05),症状消失时间及住院天数均较对照组缩短,未见明显不良反应。结论氧气驱动雾化吸入α-干扰素治疗毛细支气管炎可减轻患儿咳嗽、喘憋等呼吸道症状,缩短住院时间,疗效显著,值得推广应用。

CD4^+CD25^+Treg细胞对慢性丙型病毒性肝炎患者干扰素治疗疗效预判作用研究

目的探讨CD4+CD25+Treg细胞在慢性丙型病毒性肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者干扰素治疗过程中的疗效判断作用。方法选取2013年10月至2014年8月收治的150例CHC患者,利用流式细胞术计数患者外周血CD4+CD25+Treg细胞的数量,使用实时荧光PCR检测HCV RNA含量。随访观察患者在α干扰素和利巴韦林治疗前和治疗24周后的CD4+CD25+Treg细胞和HCV RNA的变化情况。根据HCV RNA载量情况分为低载量组、中载量组和高载量组;根据治疗前后HCV RNA的变化情况分为转阴组、慢反应组和不反应组。结果 CHC患者性别和年龄在不同HCV RNA载量无统计学差异,而HCV RNA载量与CHC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞量间差异显著,两者呈正相关(r=0.996,P=0.005)。同时,CHC患者经α干扰素和利巴韦林治疗24周后,转阴组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平从(8.41±2.08)%降至(3.96±1.94)%(P<0.001),慢反应组细胞水平从(8.26±2.59)%降至(5.92±2.35)%(P<0.001),具有统计学意义;而不反应组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平反而升高,从(8.61±2.31)%升至(10.42±2.18)%(P<0.001),具有统计学意义。结论 CHC患者HCV RNA载量与其外周血CD4+CD25+Treg细胞量呈正相关。经α干扰素和利巴韦林治疗24周后,外周血CD4+CD25+Treg细胞随着HCV RNA的降低而降低,而HCV RNA经治疗降低无效时,CD4+CD25+Treg细胞反而会升高。提示CD4+CD25+Treg细胞可能参与丙型肝炎的进展,为研究丙型肝炎患者的治疗是否有效提供了新的思路。

生物治疗预防肾癌根治术后复发和转移的远期疗效观察

目的了解干扰素α(IFN-α)和白细胞介素2(IL-2)联合应用预防肾癌根治术后复发和转移的远期效果。方法136例肾癌根治术患者,根据术后治疗方法不同分为两组,治疗组(A组)79例应用IFN-α和IL-2,对照组(B组)57例仅行根治术。同时观察治疗前后T淋巴细胞亚群的变化,并和正常人群对照。结果肾癌患者CD4+、CD4+/CD8+较正常对照值明显减低,CD8+较正常高(P<0.001);A组患者治疗后CD4+升高明显高于B组(P<0.001),CD4+/CD8+明显高于B组,CD8+明显低于B组(P<0.005),均接近正常水平(P>0.05)。手术后B组CD4+、CD4+/CD8+较术前升高(P<0.05),CD8+减低(P<0.01),但均和正常组有明显差异(P<0.005)。A组Ⅲ期3年生存率和Ⅱ期、Ⅲ期5年生存率均较B组高(P<0.05)。结论肾癌病人的免疫功能低下。IFN-α和IL-2联合应用可使肾癌根治术后患者免疫功能恢复,增强机体抗肿瘤的免疫功能,减少复发率,提高长期生存率。

B7-H4在肾癌组织中表达的意义及其机制研究

目的探究B7-H4在肾癌组织中表达的意义及其机制。方法选择初诊肾细胞癌患者50例设为研究组，取10例健康人肾脏组织做对照组，构建人B7-H4重组逆转录病毒（pEGZHA-Term）载体，将载体转染L929细胞。将转基因细胞与T细胞共同培养，用空白T细胞做对照。用流式细胞仪检测B7-H4对T细胞增殖和凋亡的影响；研究B7-H4在正常肾脏与肾癌中的差异。结果研究组白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素IL-4、白细胞介素IL-10和干扰素-α（IFN-α）分别为（65．16±8．18）、（96．57±25．56）、（57．35±4．58）、（66．48±13．25）ng／L，对照组分另1为（82．88±9．75）、（73．82±22．92）、（53．84±9．10）、（92．25±18．45）ng／L，两组差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论B7-H4的过分表达可能是决定肿瘤发生和预后的重要因素，B7-H4是T细胞的一个强有力的减弱因子。