基因多态性与慢性乙肝患者对α干扰素应答的相关性分析

乙型肝炎（hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的传播广、治愈难、危害性大的流行性肝病之一。每年都有约50万人死于HBV长期感染所导致的肝硬化和肝癌。α干扰素（interferon alpha,IFN-α）是治疗慢性乙型肝炎的一线用药,过往研究表明,乙肝患者对IFN-α治疗应答存在差异,乙肝病毒基因型、谷丙转氨酶（ALT）水平等都会影响IFN-α的治疗效果。

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C／C基因变异的临床及干扰素应答

该课题采用DNA扩增、测序及定量等先进的分子生物学方法，对34例各型HBV感染者进行研究。创新点：①在国际上，首先报告CPnt1726—1730聚集变异与无症状HBV携带者肝炎屡发有关；②在国际上，首先报告CPnt1726—1730聚集变异及CPT1726A1764变异的病人临床上表现为重型肝炎或迅速发展为活动性肝硬变；

Ⅰ型干扰素应答基因与类风湿关节炎生物制剂疗效

类风湿关节炎(RA)发生发展与TNF-α、IL-6、B细胞和T细胞密切相关。基于TNF-α、IL-6和T、B细胞表面标志分子的生物制剂治疗RA取得了显著成效,但仍有部分RA患者不应答。近年研究发现,Ⅰ型干扰素及其信号通路在RA患者生物制剂治疗应答中发挥作用。本文综述不同生物制剂治疗RA患者的应答情况以及Ⅰ型干扰素应答基因与生物制剂疗效的关系,探讨浆细胞样树突状细胞(pDC)对Ⅰ型干扰素应答基因表达的影响,为改善RA患者对生物制剂不敏感提供新思路。

辐照促进肿瘤细胞分泌cGAMP和NO增强Ⅰ型干扰素应答

目的揭示辐照诱导环鸟苷酸-腺苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,c GAMP)和一氧化氮(nitric oxide,NO)调节抗肿瘤Ⅰ型干扰素表达的新机制。方法RT-qPCR技术检测Ifnb、Cxcl10、Il6和Nos2基因的表达。免疫印迹技术检测cGAS-STING信号通路激活和诱导型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase 2 inducible,iNOS)的蛋白表达;液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)和ELISA检测细胞内外cGAMP的含量。通过使用LRRC8 volume-regulated anion channel(LRRC8/VRAC)和iNOS抑制剂阻断cGAMP释放和NO产生。结果辐照处理肿瘤细胞MC38后,显著诱导了p-STING、p-TBK1和p-IRF3的表达;相应地,Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达也大幅度升高(P<0.001);辐照处理Cgas或Sting基因敲除的MC38细胞后,Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达明显下降(P<0.001)。此外,辐照处理MC38细胞后,在胞外上清中可以检测到细胞释放出来的免疫调节分子cGAMP(P<0.001)和NO(P<0.01);DCPIB抑制LRRC8/VRAC导致c GAMP释放减少(P<0.05),同时Ⅰ型干扰素应答降低(P<0.001)。辐照还可以诱导MC38细胞表达iNOS,用SMT抑制iNOS后,细胞NO产生减少(P<0.05),Ⅰ型干扰素应答也降低(P<0.05)。结论本文证实c GAS-STING信号通路在辐照诱导抗肿瘤的Ⅰ型干扰素应答中至关重要,并揭示肿瘤细胞通过外运或分泌具有免疫调节功能的小分子cGAMP和NO可以进一步放大Ⅰ型干扰素应答,因此发现了辐照诱导Ⅰ型干扰素表达的新机制。

LGP2在HCV感染诱导的干扰素应答中的关键作用

【据《Hepatology》2017年3月报道】题：LGP2在HCV感染诱导的干扰素应答中起到关键的作用（作者黑蕾、钟劲） HCV是慢性肝病的主要致病因素之一,能够通过逃逸宿主的免疫防御机制来建立持续性感染,并最终导致肝硬化和肝癌。RIG-I样受体属于病原模式识别受体家族,包括RIG-I、MDA5以及LGP2。RIG-I和MDA5可以识别不同类型的外来RNA,激活下游干扰素信号通路,诱发宿主固有免疫反应。LGP2最早被认为在RIG-I介导的信号通路中起负调控作用。

替比夫定序贯疗法对干扰素应答不佳的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的临床疗效及其对血清转换的影响

目的:评价替比夫定(LDT)序贯疗法对干扰素-α(IFN-α)应答不佳的HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者的临床疗效和耐药性及其对血清转换的影响。方法:采用前瞻性随机对照临床研究方法,选取2014年8月—2017年12月间收治的经IFN-α治疗24周的HBV-DNA水平下降<10~2U/m L、HBeAg持续阳性CHB患者43例资料(观察组),给予LDT序贯治疗120周;另选同期HBeAg阳性CHB患者43例资料(对照组),给予初始单用LDT治疗120周;比较两组患者治疗后肝功能复常率、HBV-DNA阴转率、HBeAg阴转或血清转换率及耐药率的差异,并分析HBs Ag水平的变化情况。结果:两组患者治疗120周时ALT复常率、HBV-DNA及HBeAg阴转率经组间比较其差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者治疗后HBeAg阴转率和转换率的总发生率为62.79%高于对照组为34.88%(P<0.05);两组HBeAg血清转换患者(观察组20例,对照组10例)治疗不同疗程后HBsAg水平与基线比较,HBsAg水平随着疗程延长逐渐下降;治疗48周与基线比较其差异均有统计学意义(P<0.05);治疗72周与基线比较其差异也均有统计学意义(P<0.05);观察组2例患者在治疗96周后出现HBsAg阴转;两组患者中44例HBeAg持续阳性患者耐药10例(其耐药率为22.73%),其中对照组7例占16.28%,观察组3例占18.75%,经两组间比较其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对IFN-α疗效不佳患者,采用LDT序贯治疗120周的总有效率优于初始LDT单药治疗,HBeAg血清转换者长期抗病毒治疗有获得HBeAg阴转的可能;但对HBeAg持续阳性者,在后续LDT单药治疗中仍有发生耐药的风险,需考虑进一步优化治疗。

肠道菌群调控干扰素应答在病毒与肿瘤性疾病中的研究进展

由诱生和效应2个阶段构成的干扰素应答是抗病毒与肿瘤免疫的经典生物学事件,但干扰素拮抗与药物毒性限制了干扰素的临床应用。新近大量实验证据揭示了肠道菌群及其代谢产物与干扰素应答网络在病毒与肿瘤性疾病中的关键作用,为精准修正肠道菌群实现抗病毒或肿瘤治疗带来新的思路。现就肠道菌群调控干扰素应答在病毒与肿瘤性疾病中的作用进行概述,以期为进一步基础和临床转化研究提供参考依据。

替比夫定再治疗对α-干扰素无应答的慢性乙型肝炎患者血清转换和肝功能的影响

目的:分析替比夫定再治疗对α-干扰素无应答的慢性乙型肝炎患者疗效。方法:选取2020年10月至2022年10月在咸宁市中医医院经聚乙二醇α-干扰素治疗6个月后无应答的72例慢性乙型肝炎患者,将其随机分为治疗组36例和对照组36例,对照组给予恩替卡韦治疗,治疗组采用替比夫定治疗,均治疗4个月。采用实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA载量。采用酶联免疫吸附法检测血清HBsAg和HBeAg。采用全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及总胆红素(TBIL)水平。采用化学发光法测定血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)以及Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)水平。采用反向杂交法检测耐药位点。结果:治疗组和对照组ALT复常率、HBV DNA转阴率、HBsAg转阴率和HBeAg转阴率差异无统计学意义(χ^(2)=0.084,0.215,0,0.348,均P>0.05)。治疗后,治疗组ALT[(42.27±6.65)U·L^(-1)]、AST[(38.32±5.64)U·L^(-1)]、TBIL[(29.25±4.62)μmol·L^(-1)]、LN[(184.21±20.61)U·L^(-1)]、HA[(123.28±13.45)μg·L^(-1)]、IV-C[(212.61±22.56)μg·L^(-1)]和PC-Ⅲ[(129.27±13.34)μg·L^(-1)]水平低于对照组[(64.65±8.79)U·L^(-1),(55.76±7.72)U·L^(-1),(54.81±6.47)μmol·L^(-1),(249.57±25.83)U·L^(-1),(166.37±16.56)μg·L^(-1),(242.39±25.34)μg·L^(-1),(154.82±15.78)μg·L^(-1)](t=12.193,10.945,19.290,11.868,12.119,5.267,7.418,均P<0.05)。两组耐药率和总不良反应率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:α-干扰素无应答的慢性乙型肝炎患者应用替比夫定再治疗后获得较好疗效,有效改善肝功能和肝纤维化。

干扰素应答因子1对不同p53状态骨肉瘤凋亡的调节作用

目的观察干扰素应答因子1（IRF-1）基因对不同p53状态骨肉瘤细胞凋亡的调节作用，并探讨其机制。方法利用u20s（p53^＋/＋）和Saos2（p53^-/-）骨肉瘤细胞作为研究模型，用不同剂量阿霉素处理后，Western blot检测IRF-1表达的变化。进一步通过过表达IRF-1基因或敲除IRF-1基因，检测其对骨肉瘤细胞凋亡的影响。并通过实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测IRF-1对p53下游靶基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关x蛋白（bax）和p21的调节作用。结果不同剂量阿霉素处理U20S和Saos2后，Westernblot结果显示IRF-1的表达明显增高。进一步过表达IRF-1后，乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞死亡率明显增高（P〈0．05）；干涉IRF-1基因后，全量LDH检测细胞死亡率则明显降低（P〈0．05）。RT-qPCR检测显示，IRF-1对p53下游靶基因bax和p21在p53^-/-SaOS-2细胞中具有明显的促进作用（P〈0．05），而对于p53^＋/＋U20S中的作用并不明显（P〉0．05）。结论IRF-1可通过调节p53下游靶基因bax和p21的表达，从而显著促进阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡。

干扰素应答相关基因芯片在预测丙型肝炎抗病毒疗效中的应用研究

目的 探讨干扰素（IFN）应答相关基因在预测丙型肝炎抗病毒疗效中的作用.方法 采用功能分类基因芯片方法对IFN治疗前慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）IFN相关基因的表达进行检测,结合临床资料进行分析.采用SPSS 12.0软件进行统计学处理.结果 17例慢性丙型肝炎患者中,IFN治疗快速病毒学应答者（RVR）10例,非快速病毒学应答者（N-RVR）7例.与健康对照组比较,RVR患者PBMC中发现9个差异表达基因,其中1个为上调基因,8个为下调基因;N-RVR患者有18个差异表达基因,均为下调基因.RVR与N-RVR患者比较,发现5个差异表达基因,其中4个为上调基因,分别为PRKCZ、PRKRA、IRF5和TNFSF10（t=5.44、3.13、5.24和2.30,P=0.000、0.010、0.005和0.044）,1个下调基因为IFIT5（t=2.43,P=0.035）.17例患者中,12例为HCV1b型,5例为HCV2a型,HCV1b型与HCV2a型患者比较,发现2个下调基因,分别为IFI6和IFI44（t=2.42和2.45,P=0.038和0.033）.结论 IFN应答相关基因下调可能与慢性丙型肝炎患者对IFN治疗的应答有关.HCV1b型患者比HCV2a型患者更容易诱导IFN相关基因表达的下调,从而产生IFN抵抗.

干扰素α应答基因的克隆及在兔早期胚胎发育中功能分析

干扰素(interferon,IFN)在哺乳动物早期胚胎发育过程中具有重要的生理功能,但是其作用机制尚不清楚.通过筛选卵巢cDNA文库和5′-RACE方法,克隆了兔卵巢干扰素α应答基因(interferonresponsivegene,IFRG)的全长cDNA(登录号:AJ584672).利用RT-PCR证明IFRG在兔卵母细胞和植入前胚胎中均有表达,这将为深入研究IFN在早期胚胎中的作用机制提供理论参考,卵巢原位杂交表明IFRG在成熟卵泡(类型5)的颗粒细胞中有表达,在初级和次级卵泡的膜鞘细胞和粒层细胞中有很高的表达,鉴于这些细胞与卵泡的发育密切相关,推测IFRG在卵泡的发育、成熟和排卵中发挥重要作用.

白细胞介素-28B的基因多态性与干扰素抗丙型肝炎病毒治疗应答的关系

目的探讨IL-28B基因多态性与慢性丙型肝炎患者对干扰素治疗应答的关系。方法采用分子生物学方法提取基因组DNA,PCR扩增后直接测序,对我院感染科门诊和住院的63例应答组(SVR)和34例无应答组(NVR)的HCV 1型患者的SNPs rs8099917和rs12980275位点进行检测分析。结果 (1)rs12980275只检测到AA、AG,rs8099917只检测到TT、TG,二者均未发现GG型。(2)rs12980275、rs8099917基因型分布在SVR组和NVR组之间差异均具有统计学意义(OR=3.288,95%CI=[1.171～9.234],χ2=5.416,P=0.020;OR=2.865,95%CI=[1.006～8.154],χ2=4.081,P=0.043)。(3)rs12980275等位基因频率在SVR组和NVR组之间差异具有统计学意义(OR=2.846,95%CI=[1.086～7.464],χ2=4.828,P=0.028);rs8099917等位基因频率在SVR组和NVR组之间差异无统计学意义(OR=2.543,95%CI=[0.953～6.785],χ2=3.664,P=0.056)。(4)rs12980275、rs8099917的基因型及等位基因频率在SVR、NVR组中的相关性分析r均大于0(r=0.236,r=0.205,r=0.158,r=0.137),均呈正相关。结论 rs12980275和rs8099917多态性对干扰素抗丙型肝炎病毒治疗应答有重要影响,可以预测抗病毒疗效,为实现个体化治疗提供依据。

阿德福韦酯联合苦参素治疗干扰素无应答HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效观察

本研究选择20例标准干扰素治疗慢性乙型肝炎（CHB）无应答患者，口服阿德福韦酯胶囊（ADV）联合苦参素胶囊，连用2年（96周），现报道如下。资料与方法一、病例选择20例CHB经标准干扰素治疗无效患者，诊断符合2005年《中国慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准。年龄18-39岁，男15例，女5例，排除HIV、HAV、HCV、HDV、HEV，酒精性、药物性、自身免疫性、脂肪性等肝炎，排除合并肝癌、糖尿病、妊娠、心脏病、脑血管病、肾脏疾病。

丙型肝炎病毒1b基因型C区氨基酸70替代对干扰素刺激应答元件的影响

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)1b基因型(genotype 1b,GT-1b)C区氨基酸(amino acid,aa)70替代对干扰素刺激应答元件(interferon-stimulated response element,ISRE)的影响。方法首先构建HCV GT-1b C区aa70野生型和变异型核心蛋白表达质粒,测序鉴定后瞬时转染肝瘤细胞系Huh7细胞,Western blot法鉴定HCV核心蛋白的成功表达;然后利用ISRE双荧光素酶报告基因实验检测核心蛋白表达对ISRE活化的影响,并以SYBR Green real-time PCR检测3种主要干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)的表达情况。结果构建了HCV aa70野生型和变异型核心蛋白表达质粒,并在体外培养细胞中成功表达。但野生型和变异型核心蛋白表达对ISRE活化及3种主要ISGs表达的影响无明显差异。结论单纯R70Q/H变异的核心蛋白似乎并不足以直接导致IFNα耐药。

拉米夫定治疗干扰素无应答慢性乙型肝炎18例

目的:探讨拉米夫定治疗干扰素无应答慢性乙型肝炎的疗效。方法:对照组16例口服西利宾胺、甘利欣胶囊等护肝降酶药物。治疗组18例单用拉米夫定100 mg,qd,口服,疗程为12 mo。结果:治疗12 mo后,治疗组ALT复常率为83.3％,对照组37.5％,两组比较(x=7.53,P<0.01),HBV DNA阴转率:治疗组(61.1％),对照组(12.5％),两组比较(X=8.47,P<0.01)有显著性差异,而HBeAg阴转率、HBeAg/抗HBe转化率治疗组亦优于对照组,但两组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:干扰素无应答的慢性乙型肝炎患者给与拉米夫定治疗可以降低HBV复制,改善ALT水平,但治疗后出现YMDD变异率高,HBeAg/抗HBe血清转化率较低。

干扰素刺激应答元件介导IFN-α-2b对IFP35的转录调控

IFP35为分子量35 kDa的干扰素诱导蛋白,可以被Ⅰ型干扰素诱导表达,但是其受干扰素调控机制未知.为了阐明Ⅰ型干扰素对IFP35的转录调控机制,克隆了IFP35基因翻译起始点上游242 bp(-359～-118)的序列,将之置于萤火虫荧光素酶基因上游,构建报告质粒pGL-359,瞬时转染实验证实,该段序列具有启动子活性;序列分析表明其为GC box型启动子,-181～-170 bp序列符合干扰素刺激应答元件(interferon stimulate response element,ISRE)特征.用IFN-α-2b处理细胞后,pGL-359活性可提高达3.1倍,但突变pGL-359上的ISRE特征序列后,该突变启动子不再响应IFN-α-2b刺激.随后的凝胶电泳阻滞实验发现,用IFN-α-2b处理HeLa细胞后,其核蛋白可与IFP35启动子上的ISRE元件形成明显的阻滞带,表明ISRE介导了IFN-α-2b对IFP35的转录调控.

延长聚乙二醇干扰素疗程对普通干扰素治疗无应答的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的疗效

目的:观察研究延长聚乙二醇干扰素α-2a(polyethylene glycol interferonα-2a,PEG-IFNα-2a)疗程对普通IFN治疗无应答的HBeAg阳性慢性乙型肝炎(chronic viral hepatitis B,CHB)患者的疗效.方法:A组27例为普通IFN治疗无应答的HBeAg阳性CHB患者,采用PEG-IFNα-2a治疗,疗程72 wk.B组31例患者为普通IFN治疗失败的HBeAg阳性CHB患者,采用PEGIFNα-2a治疗观察,疗程48 wk.治疗结束随访24 wk.检测HBsAg和HBeAg、抗-HBe,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA及肝功能.结果:在治疗结束时,A组HBsAg阴转率、血清转换率、HBV DNA阴转率分别高于B组(14.8%vs 6.5%,48.1%vs 29.0%,66.7%vs45.1%,P<0.05),差异有统计学意义.在治疗结束随访24 wk时,A组HbsAg阴转率、HBV DNA阴转率、HBeAg血清阴转率均高于B组(18.5%vs 6.5%,70.4%vs 38.7%,55.6%vs32.2%,P<0.05),差异有统计学意义,A组ALT复常率高于B组,但两者差异无统计学意义.结论:延长PEG-IFNα-2a治疗疗程可以在普通IFN治疗无应答的HBeAg阳性CHB患者身上取得较好疗效,能帮助更多的患者获得理想的治疗终点.