干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠植入前胚胎中的表达

目的研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在小鼠植入前胚胎中的表达情况,探讨GRIM-19在早期胚胎发育中的动态变化。方法采用Western blot分析和Real-time PCR检测小鼠植入前胚胎(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期、桑葚胚和囊胚期)中GRIM-19蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在小鼠植入前各期胚胎中均有表达,其蛋白和mRNA水平从2-细胞期逐渐增高,至8-细胞期达高峰,随后呈下降趋势。结论小鼠植入前胚胎中GRIM-19的表达量随发育时程的改变而改变,提示GRIM-19在早期胚胎发育过程中具有一定的作用。

干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其作用

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其与胚胎着床的关系。方法收集早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测GRIM-19蛋白在子宫内膜上皮细胞中的表达及定位情况;收集早期妊娠、假孕和雌孕激素处理小鼠子宫组织,采用Western blotting和Real-time PCR检测GRIM-19蛋白和mRNA水平;TUNEL方法检测早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织细胞凋亡情况;采用p EGFP GRIM-19质粒GRIM-19-siRNA转染技术使RL95-2细胞系过表达或低表达GRIM-19,检测其对RL95-2-Be Wo共培养体外着床模型球状体黏附率的影响,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,线粒膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位;采用Western blotting和Real-time PCR检测转染后信号转导子和转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF）-α及白细胞介素（IL）-11蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在早期妊娠第1~6天小鼠子宫腔上皮和腺上皮均有表达,妊娠第4天GRIM-19蛋白和mRNA水平减低,细胞凋亡减少;假孕第1~6天小鼠子宫内膜GRIM-19表达无明显差异;雌激素处理组小鼠子宫内膜GRIM-19表达减弱;过表达GRIM-19后,RL95-2-Be Wo共培养球状体黏附率降低,细胞凋亡增加,线粒体膜电位减低,RL95-2细胞系中STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平减低,TNF-α蛋白和mRNA水平升高。结论 GRIM-19在胚胎着床中发挥重要作用,可能是通过调节细胞凋亡和免疫耐受为胚胎着床提供保障。

干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因19表达与紫外线诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的关系

背景长期暴露于紫外线照射的环境中可通过破坏细胞线粒体的跨膜电位等机制促进相应组织中的细胞凋亡，包括人晶状体上皮细胞（LECs）。干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）位于线粒体呼吸链Ⅰ上，与紫外线照射诱导的LECs凋亡过程是否有关尚不明确。目的探讨GRIM-19与长波紫外线照射诱导的人LECs损伤的关系。方法将人LECs系SRA01／04用常规培养方法在含质量分数10％胎牛血清的α-MEM培养液中进行培养，当细胞生长至对数生长期并达到80％融合时用长波紫外线照射，时间分别为5、10、15、20、25min，长波紫外线剂量分别为30、60、90、120、150mJ／cm^2，照射后继续培养1h，对照组细胞与实验组培养方法相同，但不用长波紫外线照射。采用流式细胞技术测定各组培养的凋亡率，应用Westernblot法检测各组培养上清液中GRIM-19蛋白的表达强度和相对表达量，采用单因素方差分析法对不同组间LECs凋亡率和GRIM-19蛋白相对表达量的差异进行比较，用Pearson积矩线性相关分析法评估LECs凋亡率与GRIM-19蛋白相对表达量的关系。结果不同剂量的紫外线照射培养的LECs后各组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=149．32，P〈0．01），其中60、90、120及150mJ／em。紫外线照射组与对照组比较，细胞凋亡率均明显增加，差异均有统计学意义（q=-17．02、-25．20、-29．41、-8．61，P〈0．01）。不同剂量的紫外线照射培养的LECs后细胞上清液中GRIM·19的表达明显增强，各组LECs上清液中GRIM-19的相对表达量（GRIM-19／β-actin）的总体差异有统计学意义（F=6．87，P〈0．05），其中60、90、120、150mJ／cm。紫外线照射组细胞上清液中GRIM-19的相对表达量分别为2．01±O．76、2．98±1．80、3．97±1．61和2．42±1．28，均明显高于对照组的0．56±0．23，差异均有统计学意义（q=-4．12、-5．04、-7．09、-3．85，P〈0．01）。Pearson积矩线性相关分析结果表明，LECs上清液中GRIM-19蛋白的相对表达量与LECs凋亡率呈正相关（r=0．7I，P〈0．01）。结论正常人LECs中可见GRIM-19的表达，但紫外线引起的人LECs凋亡过程与细胞中GRIM-19的表达上调-致；GRIM-19蛋白相对表达量与长波紫外线照射呈剂量依赖性。

维甲酸/干扰素联合诱导的细胞凋亡相关基因-19在恶性肿瘤中的研究进展

维甲酸/干扰素联合诱导的细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)是一种由干扰素和维甲酸联合诱导表达的细胞凋亡调节基因,通过降低细胞内GRIM-19蛋白水平,可抑制干扰素及维甲酸联合诱导的细胞凋亡。GRIM-19不仅通过与多种因子相互作用参与炎症因子相关的病理生理过程,而且在细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭等方面也发挥了重要作用。GRIM-19可能成为肿瘤的潜在治疗靶点,以GRIM-19为基础靶向治疗肿瘤可能是未来的研究方向。本文就GRIM-19在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

干扰素/维甲酸联合应用诱导凋亡的相关基因19调控信号转导与转录激活因子3信号通路抑制肾癌细胞生长与增殖的机制研究

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导凋亡的相关基因19(GRIM-19)抑制肾癌细胞生长与增殖的具体机制。方法取自于肾细胞癌患者肿瘤组织(30例,7例1期,8例2期,8例3期,7例4期),对照组取临近的正常组织(10例)。在肾癌细胞过表达GRIM-19后,应用RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)评估信号转导与转录激活因子3(STAT3)及其下游通路蛋白的表达水平变化,应用噻唑蓝(MTT)(药敏及细胞增殖实验)测定肾癌细胞增殖水平变化,应用流式细胞仪测定肾癌细胞的凋亡水平变化。结果与正常组织比较,GRIM-19在肾癌中表现为低表达,SATA3及其下游蛋白则表现为高表达。应用过表达GRIM-19腺病毒和空载腺病毒感染786-O细胞系,与空载腺病毒感染细胞组(1.62±0.07、1.47±0.08、1.23±0.50)比较,过表达GRIM-19腺病毒感染细胞组中GRIM-19(4.45±1.01)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)(2.11±0.30)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9(1.87±0.09)的表达水平显著提高。与空载腺病毒感染细胞组(1.68±0.70、0.91±0.30、1.38±0.20)比较,而STAT3(1.08±0.20)、B细胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)(0.67±0.40)和细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)(0.93±0.09)的表达水平明显降低。此外,干扰素(IFN)-β和ATRA可以抑制肾癌细胞的生长和诱导其凋亡,与IFN-β-GRIM-19组(15.30±2.60)、ATRA-GRIM-19(14.60±2.80)组比较,IFN-β-ATRA-GRIM-19组(21.70±3.10)显著地增加了(人肾细胞癌细胞系)786-O细胞的凋亡。结论肾细胞癌中GRIM-19的表达与STAT3诱导基因过度表达密切相关,GRIM-19通过调控STAT3信号通路抑制肾癌细胞生长与增殖。

维甲酸-干扰素联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在子宫颈癌中表达及作用研究

目的探讨维甲酸-干扰素联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在子宫颈癌组织中的表达水平,进一步揭示其在肿瘤生长中的作用及分子机制。方法选取自2014年9月至2016年7月西安市第四医院妇产科收治的30例子宫颈癌患者的活检组织标本为肿瘤组;另选取同期收治的20例子宫肌瘤患者或宫颈肌瘤患者,并在进行子宫肌瘤手术过程中,取得正常的子宫颈组织样本作为对照组。另外,选取HeLa细胞珠作为体外实验对象。运用免疫组化方法和Western blot分析GRIM-19在子宫颈癌细胞株及临床组织中的表达水平;细胞增殖实验探讨干涉GRIM-19后肿瘤细胞的生长情况及机制。结果与对照组的组织比较,肿瘤组的组织中GRIM-19 mRNA的表达水平显著增加,组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。低表达GRIM-19基因后,HeLa细胞的增殖活力显著降低。GRIM-19基因低表达后,HeLa细胞凋亡相关蛋白P53也受到抑制。结论在抑制HeLa细胞中的GRIM-19基因表达后,细胞的存活及抗凋亡作用能力显著降低,提示GRIM-19基因对肿瘤细胞起到了保护作用。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在十二指肠癌中的表达及其意义

目的:研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物信号转导和转录活化因子3(STAT3)在十二指肠癌中的表达,探讨其在十二指肠癌发生和发展中的作用。方法:32例十二指肠癌组织和30例十二指肠炎及溃疡对照组织,采用免疫组织化学方法检测其GRIM-19及STAT3蛋白表达情况。结果:十二指肠癌组织GRIM-19蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达减弱(P<0.05),且与十二指肠癌的分化程度有关(P<0.01);十二指肠癌组织STAT3蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达增强(P<0.01),且与十二指肠癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.01);十二指肠癌组织中GRIM-19与STAT3表达呈负相关(r=-0.470,P<0.01)。结论:GRIM-19蛋白在十二指肠癌组织中的低表达或缺失与十二指肠癌的发生和发展密切相关。十二指肠癌组织中有GRIM-19低表达与STAT3高表达共存现象。

GRIM-19在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨GRIM-19在肝细胞癌组织中表达的临床意义.方法:用RT-PCR检测40例肝细胞癌及非癌组织中GRIM-19mRNA表达水平,用免疫组织化学pv二步法和Westernblot检测40例肝细胞癌及非癌组织中GRIM-19蛋白的表达情况,分析GRIM-19与临床病理特征的关系.结果:GRIM-19mRNA在肝细胞癌的表达明显低于非癌组织(0.40±0.31vs0.56±0.67,P<0.05).GRIM-19蛋白主要定位于细胞质,肝细胞癌中的阳性率明显低于非癌组织(47.5%vs80%,P<0.05).GRIM-19蛋白在肝细胞癌的表达低于非癌组织(0.30±0.29vs0.57±0.10,P<0.05).在肝细胞癌组织中,GRIM-19的表达在临床分期为Ⅰ+Ⅱ与Ⅲ+Ⅳ组间、门脉有癌栓与无癌栓组间均有统计学差别(0.57±0.38vs0.30±0.20;0.04±0.02vs0.44±0.32,均P<0.05);GRIM-19的表达与AFP数值呈负相关(r=-0.352,P<0.05).结论:GRIM-19表达下降,是肝细胞癌发生过程的重要事件,可能与肝细胞癌的发生、发展、侵袭等有关.

全反式维甲酸联合干扰素-β对人骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用

目的观察全反式维甲酸（ARTA）联合干扰素（IFN）-13对人骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制试验以及对干扰素／维甲酸联合应用诱导凋亡的相关基因19（GRIM-19）和原癌基因信号转导与转录激活因子-3（STAT3）的表达的影响。方法噻唑蓝（MTF）比色法检测不同药物浓度的ATRA／IFN-13，单用或联合应用对MG-63的增殖抑制率；流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI法检测MG-63的凋亡；逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测MG-63中STAT3与GRIM．19基因的扩增情况；Westernblot检测MG-63中STAT3与GRIM-19蛋白的表达。结果ARTA和IFN．B单用或联合应用均可抑制MG．63的增殖，呈浓度依赖性并与作用时间有关；联合应用抑制作用明显增强，与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。ARTA、IFN．B单独作用，可诱导MG-63凋亡；联合应用时，诱导凋亡作用显著增强。ARTA联合IFN-B作用，GRIM-19mRNA的表达明显增强（1．620±0．095），GRIM-19蛋白明显升高（1．850±0．060），与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。STAT3mR-NA的表达明显降低（0．120±0．032），STAT3蛋白明显降低（0．540±0．075），与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论ARTA／IFN．13作用，可明显抑制MG-63的增殖并诱导其凋亡，其机制可能是诱导GRIM-19高表达，特异性结合于STAT3的转录活性区域，使原癌基因STAT3的表达降低。

GRIM-19在小鼠植入前胚胎中的表达及其作用

目的通过研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因(GRIM-19)在小鼠植入前胚胎中的表达及其与胚胎质量之间的相关性,探讨GRIM-19在小鼠植入前胚胎发育中的作用。方法采用实时定量PCR,检测小鼠植入前胚胎(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期、桑葚胚和囊胚)中GRIM-19 mRNA水平(n=16);将小鼠8-细胞期胚胎按卵裂球大小、形态、透明带、胞质碎片分为优胚组和非优胚组,分别检测两组胚胎GRIM-19mRNA水平,并分析其相关性(n=13);制作假孕鼠(23只),并随机分为A组(12只)和B组(11只),采用移植器将优质和非优质8-细胞期胚胎移入假孕鼠的子宫内,观察两组雌鼠妊娠率及产仔率。结果 GRIM-19在小鼠植入前各期胚胎中均有表达,其mRNA水平从2-细胞期逐渐增高,至8-细胞期达高峰,随后呈下降趋势。优质8-细胞胚胎的GRIM-19 mRNA水平明显高于非优胚组(P<0.05)。两组8-细胞胚胎移植后,A组雌鼠妊娠率及产仔率显著高于B组雌鼠(P<0.05)。结论小鼠植入前胚胎中GRIM-19的表达量随发育时程的改变而变化,且与胚胎质量密切相关。

GRIM-19蛋白在乳腺癌组织中的表达

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)在乳腺癌组织中的表达,分析其与乳腺癌的关系。方法应用免疫组化S-P法检测50例正常乳腺组织及50例乳腺癌组织中GRIM-19蛋白的表达。结果乳腺癌组织中GRIM-19蛋白的阳性表达率为26.00%,明显低于正常乳腺组织的84.00%(P<0.05);GRIM-19蛋白表达水平与乳腺癌TNM分期和组织分化程度有关(P<0.05)。结论GRIM-19的低表达可能与乳腺癌的发生发展密切相关。

食管鳞癌组织中GRIM-19的表达及意义

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因(GRIM-19)在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法检测50例食管鳞癌组织、50例正常食管黏膜组织、30例癌旁不典型增生组织中GRIM-19蛋白表达;应用原位杂交法检测50例食管鳞癌组织、50例正常的食管黏膜组织、30例癌旁不典型增生的组织中GRIM-19 mRNA的表达。结果 GRIM-19蛋白、mRNA在食管鳞癌组织中阳性表达率明显低于癌旁不典型增生组织以及正常的食管黏膜组织,三者比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。GRIM-19蛋白、mRNA的阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移均有关(P均<0.05),而与患者的性别、年龄均无关(P均>0.05)。结论 GRIM-19表达与食管鳞癌发生、发展有关,其表达的降低可能促进食管鳞癌的发生、发展。

食管鳞癌组织中GRIM-19的表达及意义

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组化技术检测68例食管鳞癌、35例癌旁不典型增生及68例正常食管黏膜组织中GRIM-19蛋白表达;采用TUNEL方法检测食管鳞癌组织中的细胞凋亡。结果 1)GRIM-19蛋白在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为80.9%(55/68)、34.3%(12/35)和11.8%(8/68),两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);2)食管鳞癌组织中肿瘤细胞的凋亡与GRIM-19蛋白表达有关,GRIM-19蛋白阳性表达组中肿瘤细胞AI为(5.06±0.93)%,显著高于阴性表达组的(1.12±0.06)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GRIM-19蛋白的低表达可能与食管鳞癌的细胞凋亡有关。

GRIM-19基因对肺腺癌耐药细胞株A549/DDP药物敏感性及相关基因表达的影响

目的:本研究旨在探讨干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因19(gene-associated with retinoid-interferon-induced mortality19,GRIM-19)对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP化疗药物敏感度及相关基因表达的影响。方法:采用脂质体法将重组质粒PIRES-Puro2-GRIM-19-Myc和空载体PIRES-Puro2-Myc分别转染顺铂(cisplatin,DDP)耐药的人肺腺癌细胞株A549/DDP。蛋白免疫印迹法检测亲本A549、耐药A549/DDP、转染GRIM-19基因的A549/DDP及转染空载体的A549/DDP细胞中GRIM-19蛋白的表达。MTT法检测稳定转染GRIM-19基因后A549/DDP细胞对多种化疗药物敏感度的改变。实时荧光定量-PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)法检测GRIM-19、信号转导子与转录激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)mRNA在稳定转染GRIM-19基因后A549/DDP细胞中的表达情况。结果:蛋白质印迹法检测结果显示,A549/DDP细胞转染GRIM-19基因后GRIM-19蛋白的表达上调;A549/DDP细胞较亲本A549细胞对DDP的耐药指数为16.86±1.32;A549/DDP细胞转染GRIM-19基因后,较转染空载体组A549/DDP细胞耐药性降低,耐药逆转倍数为3.70±0.91。转染GRIM-19基因后,A549/DDP细胞中STAT3、P-gp和VEGFmRNA表达均下调。结论:GRIM-19能增强DDP耐药细胞A549/DDP对化疗药物的敏感度,这可能与下调STAT3、VEGF和P-gp的表达具有相关性,GRIM-19可能成为逆转A549/DDP细胞耐药性的一条有效途径。

GRIM-19在胚胎停育患者绒毛组织中表达及其作用机制的研究

目的:探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因(gene associated with retinoidinterferon-induced mortality-19,GRIM-19)与胚胎停育的关系及作用机制。方法:选择50例胚胎停育患者为实验组,50例非意愿妊娠要求行人工流产的正常早孕患者为对照组。用免疫组织化学法对绒毛组织中GRIM-19进行定位检测;采用Western blotting和Real-time PCR检测绒毛组织中GRIM-19蛋白和mRNA水平。应用荧光探针JC-1测定绒毛细胞线粒体跨膜电位,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡率。采用GRIM-19-siRNA转染技术使HTR-8/SVneo细胞低表达GRIM-19,并测定转染后细胞线粒体跨膜电位与细胞凋亡率。结果:GRIM-19在所有患者绒毛中均有不同程度的表达,与对照组相比,实验组绒毛中GRIM-19蛋白和mRNA的表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组绒毛细胞线粒体膜电位较对照组降低,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后HTR-8/SVneo细胞线粒体膜电位明显降低、细胞凋亡率升高,较转染前均有统计学差异(P<0.05),且线粒体膜电位与细胞凋亡率之间存在着明显的负相关性(r=-0.754,P<0.01)。结论:GRIM-19在早期妊娠中起重要作用,而GRIM-19的低表达可能通过影响线粒体功能,增加细胞凋亡参与了胚胎停育的发生、发展。