干扰素诱导基因IFIT1与卵巢癌免疫浸润及预后的相关性

目的探讨干扰素诱导基因IFIT1与卵巢癌免疫浸润及预后的相关性。方法通过GEO数据库筛选肿瘤免疫相关基因,Kaplan-Meier与Prognoscan预后数据库筛选与卵巢癌预后显著相关的差异基因。GEPIA、Human Protein Atlas与Timer数据库分析IFIT1在卵巢癌组织与正常组织中的表达差异。UALCAN数据库分析IFIT1在不同分级和分期的卵巢癌组织中的表达情况。David数据库对String和Genemania数据库筛选的相互作用基因与蛋白进行GO富集分析。Timer和Tisidb数据库相互验证IFIT1与免疫细胞的相关性。IFIT1干扰质粒成功构建后,利用IFIT1干扰稳转株构建裸鼠移植瘤模型,观察IFIT1敲降后肿瘤生长情况,免疫组化检测中性粒细胞浸润。结果GEO数据库、Kaplan-Meier与Prognoscan预后数据库筛选出IFIT1是与卵巢癌预后显著负相关的肿瘤免疫基因。GEPIA、Human Protein Atlas、Timer数据库以及UALCAN数据库表明IFIT1在卵巢癌组织中表达显著高于正常卵巢组织(P<0.05),但与肿瘤的分期、分级并不存在显著相关性。String、Genemania、David数据库分析发现IFIT1的互作基因与蛋白富集于2’-5’寡聚腺苷酸合成酶的活化、病毒防御、先天性免疫等过程。Timer数据库表明IFIT1与卵巢癌中CD8+T细胞、B细胞、树突状细胞、中性粒细胞和巨噬细胞浸润呈正相关,其中与中性粒细胞相关性最为明显(P<0.001)。Tisidb与GSCA均验证了IFIT1与卵巢癌组织的中性粒细胞浸润呈高度正相关(P<0.05)。RT-qPCR和Western blot证明卵巢癌细胞中IFIT1被成功敲降后,IFIT1干扰细胞的移植瘤生长显著减缓(P<0.05),肿瘤中性粒细胞浸润减少。结论IFIT1可能促进中性粒细胞浸润影响卵巢癌的恶性进程。

三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2在肺癌中的表达及其临床意义

目的研究三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2(interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 2,IFIT2)在肺癌组织中的表达,并分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法用组织芯片技术和免疫组织化学染色法分别检测90例肺腺癌、78例肺鳞癌组织,以及相应癌旁组织中IFIT2的表达,用Wilcoxon秩和检验比较肺癌及癌旁组织中IFIT2表达水平的差异,χ^2检验分析肺癌组织中IFIT2表达水平与患者临床病理特征的关系,用Kaplan-Meier生存分析法分析IFIT2表达水平与患者预后的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果 IFIT2在肺腺癌、肺鳞癌组织中不表达和低表达为主,在癌旁组织中高表达,在癌组织及癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01);IFIT2染色强度与肺腺癌、肺鳞癌患者临床病理特征无相关性(P>0.05);Kaplan-Merier生存分析显示,在肺腺癌中,IFIT2低表达患者总生存期(OS)较IFIT2高表达患者短(HR=2.392,95%CI:1.103~5.186,P=0.027),多因素Cox比例风险模型显示,远处转移(HR=8.033,95%CI:3.664~17.614,P=0.000)可作为肺腺癌患者预后评判的独立风险因素;在肺鳞癌中,IFIT2低表达患者总生存期(OS)较IFIT2高表达患者短(HR=2.907,95%CI:1.118~7.559,P=0.029),多因素Cox比例风险模型显示,淋巴结转移(HR=3.390,95%CI:1.029~11.175,P=0.045)和IFIT2低表达(HR=3.762,95%CI:1.236~11.451,P=0.020)均可作为肺鳞癌患者预后评判的独立风险因素。结论 IFIT2在肺癌组织中下调表达,提示其在肺癌发生发展过程中发挥重要作用,可作为肺癌患者预后评估的重要因素。

IFIT1负反馈上调干扰素β表达促进抗HSV-1病毒保护

Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是危害人类健康的常见病原体之一,能够通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞并引起多种疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式识别受体,诱导干扰素β(IFN-β)的产生,通过表达干扰素刺激基因(ISG)发挥抗病毒功能。近年来,干扰素诱导的四肽重复蛋白1(IFIT1)在病毒感染过程中的作用引起了广大研究者的关注。然而,其具体机制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了小鼠成纤维细胞(L929)IFIT1敲除细胞株,免疫印迹方法检测敲除细胞株IFIT1在蛋白质水平的表达。转染HT-DNA和Poly[I:C]刺激L929 WT和IFIT1敲除细胞株,实时定量PCR技术检测发现,HT-DNA刺激敲除细胞时,IFN-β及下游ISGs的表达量显著升高。IFN-β的表达量比L929-WT组平均高出13.4倍,IFIT1和趋化因子10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)的表达量比L929 WT组分别平均高出6.7倍和21倍(P<0.001),而Poly[I:C]刺激无明显变化(P>0.05),表明IFIT1是通过DNA信号通路来行使其负反馈调节作用。为研究IFIT1基因的抗病毒作用,利用CRISPR/Cas9技术改造的HSV-1-VP26-mCherry病毒感染该敲除细胞株,通过测定病毒荧光数及病毒拷贝数,发现IFIT1敲除细胞株与L929 WT细胞相比,存活率提高了60%(P<0.001),病毒增殖能力在48 h后降低28.6倍(P<0.001)。该结果表明,IFIT1基因的缺失有利于抵抗HSV-1的感染。综上所述,IFIT1通过DNA信号通路负反馈上调IFN-β及ISG的表达,IFIT1的缺失对病毒入侵发挥了保护作用。该结果为后续研究开发治疗HSV-1感染相关的治疗药物提供了一个新思路。

三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2在食管癌组织中表达及临床意义

目的 观察三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2（IFIT2）在食管癌组织中的表达,探讨IFIT2与食管癌患者临床指标及预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测99例食管癌组织芯点及4例正常食管组织中的IFIT2表达,并分析其临床意义,运用Cox模型分析其与食管癌患者死亡的相关性.结果 IFIT2主要表达于食管癌细胞及食管正常组织的细胞质和细胞核,在食管癌肿瘤细胞中呈低表达为主,在正常的食管上皮细胞中呈高表达为主.男性患者IFIT2染色H-score≥50的比率显著高于女性患者（x^2=9.349,P＜0.01）;IFIT2染色强度与年龄、T分期、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、肿瘤大小等预后相关因素的关系差异均无统计学意义（P＞0.05）.Log-rank生存分析结果显示,IFIT2高表达组[57.16（50.83 ～63.50）个月]比低表达组[41.58（31.36 ～51.80）个月]平均术后生存时间显著延长15.58个月,差异有统计学意义（x^2=6.531,P＜0.05）.食管癌组织多因素Cox模型分析显示,IFIT2是食管癌独立的正性预后因素[风险比（HR） =0.41,95％可信区间（CI）：0.19 ～0.88,P＜0.05].结论 IFIT2在食管癌中呈低表达,其对食管癌的预后判断具有潜在价值.

三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2在胃癌组织中的表达及预后

目的探讨三角形四肽重复干扰素诱导蛋白2（IFIT2）在胃癌组织中的表达，并分析IFIT2的表达水平与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。 方法采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织芯片中90例胃癌组织和对应癌旁组织中IFIT2的表达，采用秩和检验比较胃癌及癌旁组织中IFIT2表达水平的差异，χ2检验分析IFIT2表达水平与患者临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier生存分析法分析IFIT2表达水平与患者总生存期关系，拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。 结果胃癌组织中IFIT2高表达比例（77.4%）显著低于癌旁组织（95.20%），差异有统计学意义（χ2＝11.334，P＝0.001）。Ⅲ～Ⅳ期胃癌组织中IFIT2高表达比例（72.00%）显著低于Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织（90.91%），差异有统计学意义（χ2＝4.364，P＝0.037）。IFIT2高表达较IFIT2低表达胃癌患者总生存期（OS）延长，差异有统计学意义（χ2＝10.990，P＝0.001）。Cox模型分析结果显示远处转移[风险比（HR）＝2.693，95%可信区间（CI）：1.164～6.232，P＝0.021]、IFIT2高表达（HR＝0.350，95%CI：0.169～0.727，P＝0.005）可作为胃癌患者的预后因素。 结论IFIT2在胃癌的发生及发展中具有重要作用，可作为胃癌患者预后评估的重要风险因素。

干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体基因在胃癌进展中的作用

目的探讨干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体（IFIT2）在人胃癌进展中的作用及机制。 方法通过使用RNA干扰（RNAi）技术构建IFIT2稳定下调表达的人胃癌细胞株SGC-7901及AGS，聚合酶链反应（PCR）和Western blot分别在RNA水平和蛋白水平验证两株细胞株LV-IFIT2-短发卡RNA（shRNA）组的IFIT2的表达水平，进一步研究IFIT2在人胃癌细胞株中的生物学功能。 结果Real-time PCR检测结果显示，SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组IFIT2 mRNA表达水平均显著低于LV-NC组（SGC-7901：0.426±0.140比1.000±0.157，P＝0.004；AGS：0.232±0.090比1.000±0.194，P＝0.003）；蛋白质印迹检测结果显示，SGC-7901以及AGS细胞系中LV-IFIT2-shRNA组的IFIT2的蛋白表达水平均显著低于LV-NC组（SGC-7901：0.344±0.041比1.000±0.062，P＝0.002；AGS：0.091±0.001比1.000±0.106，P＝0.000）。对稳定转染LV-IFIT2-shRNA及LV-NC的人胃癌细胞系SGC-7901和AGS进行CCK-8增殖实验、划痕实验、Transwell实验和细胞周期测定。在培养的48、72 h shRNA组的吸光度值显著高于LV-NC组，提示下调IFIT2的表达可以显著抑制人胃癌细胞系SGC-7901和AGS的增殖能力（SGC-7901：48 h：0.348±0.031比0.276±0.026，P＝0.013；72 h：0.523±0.042比0.411±0.027，P＝0.004；AGS：48 h：0.454±0.034比0.362±0.038，P＝0.011；72 h：0.696±0.053比0.553±0.030，P＝0.003）；划痕实验显示SGC-7901和AGS细胞IFIT2干扰组的迁移能力明显高于NC组的迁移能力，提示IFIT2表达的降低可明显增强SGC-7901和AGS细胞的迁移能力（SGC-7901：0.640±0.029比0.447±0.056，P＝0.006；AGS：0.444±0.036比0.166±0.034，P＝0.001）；Transwell侵袭实验中，LV-IFIT2-shRNA组的结晶紫染色迁移细胞数明显多于LV-NC组，表明SGC-7901和AGS细胞下调IFIT2表达后的侵袭能力提高（SGC-7901：299.3±45.6比162.3±25.9，P＝0.011；AGS：404.0±44.5比235.0±30.0，P＝0.003）；流式细胞术分析细胞周期显示，LV-IFIT2-shRNA组的S期细胞比例高于LV-NC组，提示人胃癌细胞系中IFIT2的敲除可显著影响细胞周期。 结论IFIT2表达降低可促进胃癌进展，并可预测患者的不良预后。

IFIT1通过激活Wnt/β-catenin通路促进胆管癌进展

目的:探讨干扰素诱导的三十四肽重复蛋白1(IFIT1)对胆管癌进展的影响及其调控机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定人正常胆管上皮细胞系HIBEpiC和6种不同分化程度胆管癌细胞系中IFIT1的mRNA和蛋白表达水平;检测人胆管癌和癌旁组织中IFIT1的表达水平,分析其与临床病理特征的相关性及预后价值。采用CCK-8、平板集落和Transwell实验检测IFIT1下调对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;选用胆管癌细胞系HuCCT1构建IFIT1稳定敲减的细胞株,分别采用裸鼠皮下移植瘤及肺转移瘤模型,观察IFIT1对胆管癌生长及转移的影响。通过公共数据库基因富集分析富集于IFIT1的相关信号通路,并进行验证。结果:相对于正常胆管上皮细胞和低侵袭性的胆管癌细胞系,高侵袭性的胆管癌细胞系中IFIT1呈高表达;人胆管癌组织中IFIT1表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),且与肿瘤恶性特征(肿瘤大小、淋巴结转移和肿瘤TNM分期)呈正相关,肿瘤组织中IFIT1高表达的患者总生存期相对较短(P<0.01)。IFIT1下调显著抑制胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。在皮下移植瘤模型中,敲减IFIT1后皮下移植瘤生长速度减慢,体积缩小,重量减轻(P<0.01);在尾静脉肺转移瘤模型中,敲减IFIT1可显著减少裸鼠肺表面转移瘤结节数目(P<0.01)。生物信息学分析提示,与上皮-间充质转化(EMT)相关的Wnt/β-catenin通路在IFIT1高表达组富集。胆管癌细胞中敲减IFIT1可抑制Wnt/β-catenin通路,且EMT标志物vi⁃mentin和Snail表达减少。结论:IFIT1通过激活Wnt/β-catenin通路增强胆管癌细胞EMT,从而促进肿瘤进展。

红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白细胞介素-8与谷胱甘肽的影响

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞表达炎症介质白细胞介素8(IL8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制。方法培养16HBE株的人支气管上皮细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响。将传代后的细胞按24、36、48h3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组。通过酶联免疫吸附实验检测细胞上清中IL8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子κB(NFκB)和激活蛋白1(AP1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)的含量;应用Western印迹检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γGCSHS)蛋白表达。结果红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE上清中IL8的含量;红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以下调H2O2(0.01mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NFkB、AP1的活性;红霉素(5μg/ml)预孵育48h抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γGCS的含量(3.46±0.41)以及γGCSHS蛋白表达、γGCSHS启动子区域AP1转录活性。结论红霉素通过下调NFκB、AP1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL8的释放,进而影响GSH及γGCS的合成调控。

转录因子HIF-1α通过正调控TPARM基因表达影响人结肠癌细胞株SW480的增殖、凋亡

目的探讨转录因子HIF-1α是否通过调控TPARM的表达从而影响结肠癌细胞的增殖及凋亡。方法通过生物信息学分析转录因子HIF-1α与TPARM的启动子序列是否结合。敲低和过表达HIF-1α后检测TPARM的mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证HIF-1α是否与TPARM的启动子序列有结合。CCK-8和免疫印迹实验检测HIF-1α和TPARM对结肠癌细胞株SW480增殖和调亡的影响。结果生物信息学网站提示转录因子HIF-1α与TPARM启动子的部分序列有结合位点。敲低和过表达HIF-1α能调控TPARM的mRNA和蛋白表达水平, 两者关系为正相关。双荧光素酶报告实验验证了转录因子HIF-1α能促进TPARM启动子活性。CCK-8和免疫印迹实验验证了HIF-1α通过上调TPARM来发挥促进结肠癌细胞株SW480增殖以及抗凋亡的作用。结论转录因子HIF-1α通过促进TPARM的mRNA和蛋白水平表达, 影响结肠癌细胞SW480的增殖、凋亡水平, 为确定结肠癌治疗的有效分子靶点提供了实验依据。