肝细胞中固有干扰素调节因子7的表达及其抗病毒作用

目的:检测肝细胞中固有表达的干扰素调节因子7(IRF7)在免疫过程中的作用,揭示IRF7固有表达对肝细胞抵御病毒感染的影响。方法:以原代肝细胞、永生化肝细胞HuS-E/2以及肝肿瘤细胞株HuH-7细胞作为研究对象,利用仙台病毒(SV)感染原代肝细胞和HuH-7细胞,以RT-PCR法检测IFNα1、IFNβ、IFNλ3及视黄酸诱导基因蛋白(RIG-I)的诱导表达,以IRF7显性负性突变体表达载体pcDNA3-7DN转染HuS-E/2细胞,RT-PCR法及实时定量PCR检测上述基因的诱导变化。IRF7表达载体pcDNA3-IRF7转染HuH-7细胞后,进行2a型HCV病毒株JFH1感染,间接免疫荧光法检测HCV感染情况。结果:SV感染12 h内,HuH-7细胞中未检测到明显的IFNα1、IFNβ、IFNλ3和RIG-I的诱导表达;而在SV感染早期(3 h),原代肝细胞中即可检测到上述基因的mRNA条带。IRF7功能受到抑制后,RT-PCR结果显示SV感染的肝细胞中上述基因表达在感染早期的mRNA条带灰度降低;实时定量PCR可见SV感染3 h内,上述基因mRNA诱导表达水平均显著降低(P<0.001)。异位表达IRF7的HuH-7细胞中JFH1感染后未检测到明显的HCV信号。结论:肝细胞中固有IRF7的表达与细胞感染后的免疫反应密切相关,对于防御病毒感染起到重要作用。

鸡干扰素调节因子7的原核表达及多克隆抗体的制备

为表达鸡干扰素调节因子7蛋白并制备其多克隆抗体,通过RT-PCR技术扩增chIRF7基因的编码序列,构建重组质粒PET30a-chIRF7。将重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rchIRF7分子量约为60ku。将纯化的重组蛋白免疫接种小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA测定血清抗体滴度在1∶51 200以上,IFA检测结果显示制备的鼠抗chIRF7蛋白多抗能够与AIV刺激的CEF细胞内的chIRF7蛋白发生特异性反应,表明通过原核表达系统表达的重组蛋白rchIRF7具有很好的免疫原性,以其制备的鼠抗chIRF7蛋白多克隆抗体滴度高、特异性好。

HBV对健康产妇脐带血浆细胞样树突状细胞Toll样受体9、干扰素调节因子7、干扰素α表达的影响

目的观察HBV对体外培养的健康产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDC)Toll样受体(TLR)9、干扰素调节因子(IRF)7、干扰素(IFN)α表达的影响。方法体外培养Hep G 2.2.15细胞,收集各孔Hep G 2.2.15培养上清,超离心HBV病毒颗粒,PCR荧光探针法检测HBV DNA浓度。将培养第7天的pDC与不同载量的HBV(1×105拷贝/ml、1×106拷贝/ml、1×107拷贝/ml和空白对照)共培养24 h。随后每组均加入终浓度为2μg/ml的Cp G ODN 2216继续培养24 h。Real Time-PCR检测pDC中TLR9、IRF7mRNA的表达,Western Blot检测TLR9、IRF7蛋白表达,ELISA法测IFNα水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验;对HBV DNA拷贝数取常用对数,相关指标与HBV DNA的常用对数值用Pearson直线相关分析法。结果HBV 1×106拷贝/ml组和1×107拷贝/ml组TLR9 mRNA、IRF7 mRNA、pDC TLR9和IRF7蛋白、IFNα的表达水平明显低于空白对照组及HBV 1×105拷贝/ml组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。HBV对pDC TLR9 mRNA、IRF7 mRNA的表达和对pDC TLR9、IRF7蛋白的表达以及对pDC培养上清液IFNα的表达均呈浓度依赖性,HBV DNA载量越高,对TLR9 mRNA、IRF7 mRNA、TLR9和IRF7蛋白、IFNα表达的抑制效果越强(r值分别为-0.729、-0.761、-0.657、-0.703、-0.803,P值均<0.05)。结论 HBV体外干预后,正常pDC TLR9、IRF7 mRNA及蛋白表达下降,从而导致其下游IFNα的分泌减少。HBV能抑制正常pDC功能,导致HBV持续感染。

光动力治疗前后宫颈尖锐湿疣皮损Toll样受体7和9及α干扰素和干扰素调节因子7的表达

目的观察光动力治疗前后宫颈尖锐湿疣皮损Toll样受体(TLR)7和TLR9及α干扰素(IFN-α)和干扰素调节因子(IRF)-7表达量的变化。方法采用实时定量荧光聚合酶链反应(PCR),检测宫颈尖锐湿疣皮损在光动力疗法治疗前后TLR7、TLR9、IFN-α及IRF-7的表达,并进行对比分析。结果 15例患者宫颈部位皮损光动力治疗前可检测到TLR7、TLR9、IFN-α及IRF-7的表达,而且表达比正常对照组高。经过光动力治疗后,局部皮损TLR7、TLR9、IFN-α及IRF-7的表达量下降,前后对比差异具有统计学意义。结论光动力治疗后宫颈尖锐湿疣皮损TLR7、TLR9、IFN-α及IRF-7等免疫受体及细胞因子表达下降,提示光动力治疗尖锐湿疣前后局部免疫状态发生变化。

补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期产妇脐带血浆细胞样树突状细胞中Toll样受体9、干扰素调节因子7及α-干扰素表达的影响

目的:研究补肾解毒法对免疫耐受期产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDCs)中Toll样受体9(TLR9)、干扰素调节因子7(IRF7)、α-干扰素(IFN-α)表达的影响。方法:选择HBV感染免疫耐受期产妇10例,体外培养脐带血pDCs。同时制备补肾方(六味地黄丸)、解毒方(甘露消毒丹)、补肾解毒方(六味地黄丸合甘露消毒丹)含药血浆。将培养第7d的pDCs分为空白组、补肾药物血浆组、解毒药物血浆组、补肾解毒药物血浆组、无药血浆组5组进行干预。培养48 h后Real-Time PCR检测pDCs中TLR9、IRF7 mRNA的表达;Western blot技术检测pDCs中TLR9、IRF7蛋白表达;ELISA法检测pDCs培养上清液中IFN-α水平。结果:补肾与补肾解毒含药血浆均能一定程度上提高HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中TLR9、IRF7 mRNA及蛋白的表达,尤以补肾解毒方含药血浆对TLR9、IRF7 mRNA及蛋白的表达影响最大,而解毒方药物血浆不能提高pDCs中TLR9、IRF7 mRNA及蛋白表达。补肾与补肾解毒方药物血浆均能一定程度上提高pDCs培养上清液IFN-α的表达,尤以补肾解毒方影响最大,而解毒方药物血浆不能提高IFN-α表达水平。结论:补肾解毒方能更好地促进HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs TLR9、IRF7的表达及恢复分泌IFN-α的能力,故补肾解毒可作为调节机体免疫、治疗慢性乙型肝炎的基本治法。

干扰素调节因子7(IRF7)与系统性硬化症关系研究进展

系统性硬化症(SSc)是一种以血管病变、皮肤和内脏纤维化、免疫调节紊乱为特征的致死风险高的自身免疫性疾病,其首要死因是肺纤维化和肺动脉高压。如何破解SSc纤维化难题,是降低SSc患者死亡率的关键。目前,SSc病因尚不清楚,尚无有效的治疗方案。近年来研究表明,Ⅰ型干扰素(IFN)在SSc纤维化的发病中起重要作用,而IRF7作为Ⅰ型IFN的最主要调节因子参与Ⅰ型IFN诱导基因的转录调控及促进单核/巨噬细胞的表达和TGF-β信号转导,可能参与了SSc发病中纤维化的形成。

鸡传染性支气管炎病毒MM41株感染对干扰素调节因子7的影响

为探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染对天然免疫关键分子干扰素调节因子7（IRF7）的影响，为IBV致病及免疫机制研究提供理论依据，应用实时荧光定量PCR和West-ernblot技术检测了IBV感染鸡气管和肾脏中鹏F7mRNA和蛋白表达水平，并用免疫组化方法观察了IRF7在气管和肾脏中的定位，同时检测IBV载量及蛋白的表达。结果表明，IBV感染后气管中馏F7mRNA明显上调并在接种后3～5d（3-5dpi）显著上调（P〈0．05），分别上调13．42和6．16倍，蛋白水平在5和11dpi明显高于对照组，5～8dpi核转位明显，肾脏中侬F7mRNA仅在8dpi显著上调2．15倍（P〈0．05），蛋白水平在5和8dpi明显高于对照组，8dpi核转位明显。气管中IBV载量在1～11dpi迅速上升，5dpi达到峰值，肾脏中8dpi达到峰值。IRF7的表达和活化与IBV含量呈一致性。研究表明，IBVM41株感染后上调并激活了气管和肾脏中的IRF7，使其发生核转位，IRF7在抗IBV天然免疫反应中具有重要作用，气管和肾脏中的IRF7免疫应答存在一定差异性。

宫颈癌组织中Toll样受体9和干扰素调节因子7蛋白表达与人乳头状瘤病毒感染的关系

目的探讨子宫颈病变中Toll样受体9(TLR9)和干扰素调节因子7(IRF7)表达与人类乳头状病毒16(HPV16)感染的关系。方法以HPV-GenoCam-9600检测46例宫颈癌,25例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)和23例慢性宫颈炎组织HPV感染及分型;采用Illumina Hiseq 4000测序平台对15例宫颈病变组织进行转录组测序;通过免疫组化SP法检测TLR9和IRF7在慢性宫颈炎、HSIL和宫颈癌患者石蜡包埋组织中的表达水平。结果HPV基因芯片分析结果显示,在94例HPV阳性的标本中共检测到11个HPV基因型,在66例宫颈癌及癌前期病变中的10例为多重感染,多重感染率为15.1%(10/66)。3例HPV阳性的慢性宫颈炎组织中都是HPV16阳性。12个HPV基因型中高危型为10个,低危型2个。转录组测序结果显示,HPV16阳性的宫颈癌和HSIL组织中与TLR9相关的差异上调表达的基因有12个;免疫组织化学结果显示TLR9和IRF7在HSIL和宫颈癌组织中高表达,其表达水平呈正相关(P<0.05),但TLR9在HPV16阳性的宫颈病变组织中表达低于HPV16阴性的宫颈病变组织,且与IRF7蛋白表达呈正相关。结论 TLR9和IRF7蛋白参与了子宫颈癌发生发展,但具体调控机制需要深入研究。

稳定表达猪干扰素调节因子7的ST细胞株的建立

干扰素调节因子(IRF)在抗病毒感染中具有重要作用,为构建稳定表达猪IRF7(pIRF7)的猪睾丸细胞系(ST),本研究从猪淋巴细胞中扩增获得pIRF7基因,将其插入pEGFP-C3载体中构建重组表达质粒pEGFP-pIRF7。并转染于ST细胞中,通过G418加压筛选及细胞纯化获得G418抗性ST细胞株(STA1)。RT-PCR和western blot检测结果表明,STA1细胞株能够稳定表达重组pIRF7;而且以聚肌胞刺激STA1细胞可以观察到表达的pIRF7在细胞内具有核转位能力,该项研究为进一步研究猪瘟病毒对pIRF7的作用奠定基础。

用多克隆抗体检测干扰素调节因子7的表达(英文)

干扰素调节因子7(IRF-7)是调节Ⅰ型干扰素依赖型先天免疫反应的关键因子,在真核细胞防御反应中发挥重要作用。本文在大肠杆菌中表达了重组IRF-7,利用亲和层析的方法进行了纯化,并制备了鼠抗IRF-7的多克隆抗体。所得到的抗血清能够在稀释27 000倍后成功用于免疫印迹检测。该抗血清不但能识别来源于大肠杆菌的抗原,还能检测真核细胞内转染后表达的IRF-7。使用该抗体证实,转染293T细胞后表达的IRF-7主要分布在细胞质内。所制备的抗血清可用于IRF-7的表达和功能研究。

干扰素调节因子7在炎症和癌症中的作用研究进展

干扰素调节因子7(IRF7)是IRF家族成员之一,与IRF3是二聚体,位于模式识别受体(PRRs)介导的信号通路下游,对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)的产生至关重要。IRF7激活可能抑制细菌感染以及部分呼吸道病毒诱导的炎症,但却促进过敏性哮喘的发生。IRF7可能抑制某些肿瘤生长和转移,尤其是骨转移,但可能由于影响肿瘤微环境而促进胶质母细胞瘤和非小细胞肺癌的生长。我们总结了IRF7作为一种多功能因子,其通过调节IFN-Ⅰ产生或IFN-Ⅰ非依赖的信号通路在炎症和癌症相关疾病中的作用的最新研究进展。

通过TCGA数据库研究干扰素调节因子7在肾透明细胞癌中的作用

目的通过TCGA数据库研究干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达,并分析其表达水平对ccRCC患者预后的影响,探讨与其表达相关的基因网络。方法利用Ualcan、GEPIA、人类蛋白质图谱(human protein atls,HPA)、TIMER 2.0等数据库分析ccRCC组织中IRF7 mRNA和蛋白质水平变化。运用Ualcan、GEPIA、HPA数据库研究IRF7表达与ccRCC临床病理学参数的关系及对预后的影响。在String-DB数据库中探索并验证IRF7基因在细胞信号转导通路中的位置以及与其关系密切的上下游基因。结果IRF7在ccRCC中的表达升高,差异有统计学意义(P<0.01),且与ccRCC的不良预后相关,差异有统计学意义(P<0.05),其表达与ccRCC的临床分期、有无淋巴结转移及ccRCC亚型相关;预后分析显示,IRF7高表达组患者较低表达组生存率降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论通过数据库信息挖掘发现,IRF7在ccRCC组织中呈高表达,且高表达是ccRCC患者预后的不利因素,为后续的ccRCC研究提供重要的理论依据。

生物信息学分析鉴定干扰素调节因子7作为早期糖尿病肾病免疫损伤枢纽基因的研究

目的分析糖尿病肾病(DN)中肾小管差异表达基因(DEGs)的生物学功能和潜在机制。方法从NCBI-GEO数据库中检索获得GSE95376高通量测序数据,利用ARCHS4数据库及R语言软件相关程序包处理、分析并筛选出DEGs,应用CTD数据库搜索DN相关基因,最终筛选出CTD数据库与NCBI-GEO测序数据共有的差异表达基因(co-DEGs)。应用Cytoscape软件构建co-DEGs编码蛋白质的相互作用网络及模块分析,并利用DAVID 6.8在线生物信息数据库对co-DEGs进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路和基因本体论(GO)富集分析。将富集在Module-1的基因与富集在免疫反应集群中的基因进行维恩图分析,鉴定出免疫应答核心基因群,应用cytoHubba插件筛选出最关键的枢纽基因。通过体外细胞实验对枢纽基因进行进一步验证。对枢纽基因进行通路分析,绘制整合的信号通路图。结果通过ARCH4数据库及R语言软件的limma软件包分析GSE95376数据集,发现早期DN小鼠的4个干预时间点有435个DEGs,其中表达上调的基因130个,表达下调的基因305个。将上述CTD数据库DN(CTD-DN)相关基因与GSE95376数据集4个时间点co-DEGs进行维恩图可视化分析,找到229个co-DEGs。利用STRING在线工具分析该229个DEGs编码的蛋白质间的相互作用关系,使用MCODE插件筛选出最重要的模块Module-1,提示该模块中的26个基因之间关系紧密,其主要功能:对病毒的防御反应、应对病毒、免疫系统过程、先天免疫反应、细胞对IFN-β的反应。进一步将26个基因与富集在免疫应答集群中的DEGs进行维恩图分析,得到11个参与免疫应答的关键DEGs:干扰素调节因子7(IRF 7)、IIGP 1、IFIT 3、OASL 1、DDX 58、IFIT 2、IFIT 1、IFIH 1、RSAD 2、HERC 6和BST 2。应用Cytoscape软件的4种不同的计算方法(MCC、Degree、EPC和MNC)得出排序,均提示IRF 7位于这11个差异基因相互作用的核心位置。结论免疫过程在早期DN肾小管损伤中起着重要作用。枢纽基因IRF 7参与了这一过程。

鸭干扰素因子7基因克隆及组织表达特异性分析

【目的】构建樱桃谷鸭干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)基因CDS区序列的真核表达载体,分析IRF7蛋白结构和生物特性,检测不同组织内IRF 7基因的表达水平,为进一步对鸭天然免疫系统开展研究奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区,构建真核表达质粒,利用Western blotting检测蛋白表达。使用荧光显微镜观察Poly(I∶C)对IRF7蛋白核移位的影响。对IRF 7基因序列进行核苷酸相似性比对,构建系统进化树,并通过生物信息学方法在线分析预测IRF7蛋白的分子和结构特征。实时荧光定量PCR检测不同组织中IRF 7基因的表达特异性。【结果】成功克隆樱桃谷鸭IRF 7基因CDS区,长1536 bp,共编码512个氨基酸,通过对重组质粒的真核表达,提取细胞总蛋白,Western blotting检测蛋白表达,结果显示重组蛋白大小约为110 ku。Poly(I∶C)处理鸭胚成纤维细胞促使pCMV-C-EGFP-IRF7的核内定位增加。核苷酸相似性结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡的IRF 7基因核苷酸序列相似性分别为99.1%和80.8%,与非洲爪蛙的相似性仅为41.8%。系统进化树结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡亲缘关系最近,与非洲爪蛙亲缘关系最远。IRF7蛋白表现为结构不稳定的疏水性蛋白,主要由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成。IRF 7基因在各个组织内均有表达,在胆囊中表达量最高,在肺脏中表达量最低。【结论】樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区序列大小为1536 bp,编码512个氨基酸,IRF7蛋白为结构不稳定的疏水性蛋白,Poly(I∶C)刺激可引起IRF7发生核移位,该基因在不同组织表达差异较大。

干扰素调节因子7与肿瘤关系研究进展

干扰素调节因子7首次在EB病毒感染环境中克隆，是诱导I型干扰素产生的关键调节因子。异常表达I型干扰素与多种疾病有关，如肿瘤和自身免疫性疾病等。越来越多的证据表明，干扰素调节因子7是具有多种功能的转录因子，不仅调节机体的炎症、免疫反应，而且参与调节肿瘤的形成、细胞侵袭等多种生物功能。为此，本文结合最新进展对干扰素调节因子7和肿瘤的关系进行综述。

干扰素调节因子-7(IRF-7)对肿瘤细胞凋亡的影响

目的 :研究干扰素调节因子 7(Interferonregulatorfactor 7,IRF 7)对部分人肿瘤细胞凋亡的影响 ,探讨IRF 7抑制肿瘤生长的机制。方法 :将IRF 7的cDNA转染到人前列腺癌细胞 (TSU)和乳腺癌细胞 (MDA4 35 )中 ,采用Westernblot检测转基因细胞的caspase 3和Bax表达的变化 ;ELISA测定细胞裂解液中Bcl 2的含量 ,与转染空载体的对照组细胞进行比较。结果 :TSU和MDA4 35细胞转染IRF 7基因后 ,caspase 3和Bax的表达均增高 ,而Bcl 2的含量下降。结论 :干扰素调节因子 7(IRF 7)可能诱导肿瘤细胞出现凋亡 ,从而抑制肿瘤生长。

抗小鼠干扰素调节因子7多克隆抗体的制备及鉴定

目的获得小鼠干扰素调节因子7(IRF7)抗原,制备抗小鼠IRF7多克隆抗体并鉴定。方法构建原核表达质粒pET‐28a(+)‐IRF7,在大肠杆菌中表达IRF7,用Ni柱纯化获得抗原后,分别采用MnJ胶体锰佐剂和弗氏佐剂制备免疫原,3次免疫后心脏取血分离血清,采用间接ELISA法测定血清效价、纯化试剂盒纯化抗体、Western印迹和免疫沉淀对抗体生物学活性进行鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达IRF7并获得纯蛋白。两种佐剂制备的多抗血清,效价均可达到810×10^(3)倍。血清纯化后获得抗IRF7抗体,经Western印迹鉴定,两个多克隆抗体均能够特异识别真核表达的IRF7蛋白,并在免疫沉淀外源表达IRF7时,其效果明显优于商业化抗体。结论成功制备了抗IRF7多克隆抗体,为后续研究IRF7功能及作用机制奠定了基础。

五味子对对氯苯丙氨酸致失眠大鼠Toll样受体7信号通路相关基因mRNA表达的影响

目的:研究五味子对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠Toll样受体7(TLR7)信号通路相关基因mRNA表达的影响。方法:将32只大鼠随机分为空白组、模型组、五味子组、安定组,每组8只。模型组、五味子组、安定组大鼠腹腔注射PCPA建立失眠模型。五味子组给予五味子提取物灌胃,安定组给予地西泮混悬液灌胃,余组不予处理。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠脾脏TLR7、干扰素调节因子7(IRF7)、干扰素α(IFN-α)的mRNA水平。结果:造模后,模型组大鼠体质量下降,出现毛少无光、易受惊、烦躁易怒、昼夜节律消失等现象。模型组、安定组大鼠体质量均低于空白组(P<0.05)。给予五味子提取物灌胃后,五味子组与空白组大鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组大鼠身体状态均相对较好,毛发有光泽,白天安静倦卧,无烦躁、易怒等症状。荧光定量PCR仪检测结果显示,模型组TLR7、IRF7、IFN-α的mRNA表达水平均明显高于空白组(P<0.01);五味子组、安定组TLR7、IRF7 mRNA表达水平均明显低于模型组(P<0.01);安定组IFN-α mRNA水平低于模型组(P<0.05)。结论:五味子能改善PCPA诱导失眠大鼠的睡眠,其机制可能是通过下调TLR7信号通路的相关基因发挥治疗作用。

lncRNA717对胃癌细胞生物学行为的影响及调控机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)717对胃癌细胞增殖、转移等生物学行为的影响及其调控机制。方法收集2021年1至12月宁波大学附属第一医院手术切除或活检的31例胃癌组织及配对癌旁组织,以及胃癌细胞系AGS、HGC-27和人正常胃黏膜细胞系GES-1。采用qRT-PCR法检测lncRNA717在胃癌组织及癌旁组织、各细胞系中的表达水平。采用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法、Transwell法和划痕试验分别评估lncRNA717对细胞增殖、侵袭和迁移中的影响。采用荧光素酶报告基因测定、qRT-PCR法和Western blot法检测各组标本和细胞中lncRNA717、miR-762和干扰素调节因子(IRF)7表达水平。结果与癌旁组织相比,lncRNA717在胃癌组织中显著下调,与正常细胞相比,lncRNA717在胃癌细胞中显著下调。过表达lncRNA717抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。lncRNA717可以吸附miR-762,上调miR-762能抑制IRF7的表达,促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达lncRNA717后逆转了miR-762对细胞的增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论lncRNA717可抑制胃癌细胞的增殖和转移,这可能与调控miR-762/IRF7有关。提示lncRNA717可作为胃癌的潜在生物标志物和治疗靶点。