干扰素调节因子8与肿瘤的关系研究

干扰素调节因子8作为干扰素调节因子家族成员,在肿瘤发生以及抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用。该文对干扰素调节因子8在肿瘤中的研究进展进行综述。

干扰素调节因子8(IRF8)在髓系细胞形成和相关疾病中的作用

干扰素调节因子8(IRF8)是造血细胞中表达的转录因子,调控一系列转录因子的功能和表观遗传改变。在单核吞噬细胞祖细胞中,IRF8与富含嘌呤盒1(PU.1)联合促进末端增强子的形成,诱导单核细胞相关基因包括关键的下游Krüppel样因子4(KLF4)的表达,调节单核细胞的形成;IRF8还可以促进树突状细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞的形成;IRF8通过抑制CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的活性来抑制中性粒细胞的分化程序从而抑制中性粒细胞的产生。IRF8-/-单核吞噬细胞祖细胞不能分化成单核细胞、吞噬细胞,反而异常引起中性粒细胞产生。IRF8-/-小鼠及IRF8表达缺失或突变的人都会表现出免疫缺陷和类慢性粒细胞性疾病。本文主要概括IRF8在髓系细胞形成及在相关疾病中重要作用。

干扰素调节因子8在骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多亚型中的表达研究

目的研究干扰素调节因子8(interferon regulatory factor 8,IRF-8)在骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多(Myelodysplastic Syndromes with Excess Blasts,MDS-EB)亚型中是否存在表达异常,并分析其与MDS-EB的相关性。方法收集三组共30例实验标本。其中20例为MDS-EB病例标本,分为MDS-EB1组和MDS-EB2组。10例为健康体检的健康对照组。30例标本均采集自受试者外周静脉血,采集后立即进行外周血总RNA提取,并经逆转录PCR后,以实时荧光定量PCR检测各标本的IRF-8 mRNA表达水平。各组平均表达量以RQ值(x±s)表示。结果三组样本实时荧光定量PCR的平均RQ值:MDS-EB1组(0.59±0.08),MDS-EB2组(0.26±0.10),健康对照组(1.20±0.26),三组表达水平存在显著差异(P<0.01)。MDS-EB组的IRF-8表达水平均显著低于健康对照组(P<0.01),MDS-EB2组内IRF-8表达水平低于MDS-EB1组(P<0.05)。结论 IRF-8在MDS-EB中表达水平降低,表明IRF-8在MDS-EB中表达受抑,组间统计结果提示IRF-8的表达可能与疾病的恶性程度及进展相关。

干扰素调节因子8在慢性阻塞性肺病中作用及其机制

目的探讨干扰素调节因子8(IRF-8)对气道再生的影响及其机制。方法收集健康受试者和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的人支气管上皮细胞(HBEC)和痰液,检测IRF8的表达并分析IRF8表达与FEV1占预计值的百分比(FEV1%)的相关性。实验分为4组:Control组(健康受试者HBEC),COPD组(COPD患者HBEC),NC组(COPD+IRF8-NC),IRF8-siRNA组(COPD+IRF8-siRNA)。分析培养上清中IL-6,IL-8和TNF-α水平,HBEC增殖能力,及p65的蛋白表达水平。荧光素酶报告实验测定IRF8的靶向调控microRNA。结果与健康对照者相比,COPD患者的HBEC和诱导痰中IRF8均显著升高。COPD患者IRF8表达水平与FEV1%呈负相关。IRF8-siRNA组IL-6,IL-8和TNF-α明显降低,细胞增殖被显著抑制,p-p65蛋白水平明显降低。同时,miR-218靶向调控IRF8的表达。结论 IRF8基因敲除能够抑制COPD患者HBEC细胞的炎症反应和细胞增殖,且miR-218靶向调控IRF8的表达。

鞘内注射干扰素调节因子8小干扰RNA对术后持续性疼痛大鼠痛阈及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的:探究鞘内注射干扰素调节因子8小干扰RNA(IRF8 SiRNA)对PPsP大鼠痛阈及脊髓小胶质细胞活化的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH,n=12),模型组(SM,n=48),溶媒组(SD,n=12)和IRF8沉默组(SS,n=48),其中,SM组于大鼠后足中部隐静脉内侧按皮肤/肌肉切开牵拉(SMIR)法建立术后持续性疼痛(PPsP)模型,SH组仅切开不牵拉;SD组与SS组建模前一周先于L4/5椎间隙行鞘内置管术,SS组于建模后第5、6日连续鞘内给予IRF8 SiRNA溶液20μl(溶于DEPC水中,150 pmol),SD组给予等量DEPC水。测量并记录建模前(D0),建模后第1(D1)、3(D3)、7(D7)、12(D12)、22(D22)、33(D33)日等时点各组大鼠术侧后足机械刺激缩足反应阈值(PWT);建模后第12日各取6只,Western blot法检测脊髓背角Iba-1蛋白表达情况,并取SH组和SM组各3只,取术野隐神经行电镜观察其超微结构改变;再取SM组和SS组于上述各时点各6只,流式细胞术检测脊髓背角小胶质细胞活化情况。结果:与D0相比,SM组在D1~D22PWT降低(P<0.05或P<0.01),并在D33恢复至正常水平(P>0.05);与SH组相比,SM组PWT在D1~D22均降低(P<0.05或P<0.01);与SD组相比,SS组PWT在D7~D22增高(P<0.05或P<0.01);与SH组相比,SS组D7~D22降低(P<0.05或P<0.01);隐神经髓鞘平均厚度:SH组为(377.03±69.60) nm, SM组为(369.50±73.26) nm,两组间相比无统计学意义(P>0.05);与SH组相比,SM组Iba-1明显上调(P<0.01);与SD组相比,SS组Iba-1表达受到抑制(P<0.05),与SH组相比,SS组Iba-1表达也具有统计学差异(P<0.05),而SM组与SD组之间,Iba-1的表达无统计学意义(P>0.05);与D0相比,SM组小胶质细胞活化比率在D3~D22均显著增加(P<0.01),而SS组小胶质细胞活化于D3达到高峰(P<0.01);鞘内给药后,SS组脊髓背角小胶质细胞活化比率明显下降,与SM组相比,在D7~D12显著下降(P<0.01)。结论:SMIR诱导的PPsP大鼠显著且持续的机械痛觉过敏为非明显的外周神经损伤所致,可能是基于脊髓背角小胶质细胞活化所介导,而鞘内给予IRF8小干扰RNA可抑制脊髓背角小胶质细胞的激活,并逆转SMIR诱导的痛觉过敏。

斜带石斑鱼干扰素调节因子8基因的鉴定与表达模式分析

干扰素调节因子8(IRF8)是IRF家族转录因子中的一个成员.利用简并PCR和cDNA末端快速克隆(RACE)技术获得了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)IRF8基因(EcIRF8)全长cDNA序列,其编码422个氨基酸残基的蛋白质,含有脊椎动物IRF家族的特征性结构域,即N端保守的DNA结合结构域(DBD)和C端多样化的干扰素调控因子结合结构域(IAD),其中DBD中包含5个特征性的色氨酸残基和1个核定位信号.与绝大多数脊椎动物的IRF8基因相似,EcIRF8基因组序列也是9个外显子和8个内含子的结构.EcIRF8在斜带石斑鱼肝脏中高水平表达.活体聚肌胞苷酸刺激后6h,EcIRF8在头肾、中肾、胸腺、肝脏和肠中的表达量显著上调(p<0.05),其中在中肾中上调幅度最大,是对照组的106倍;副溶血弧菌(Vibrio paraheamolyticus)刺激后24h,EcIRF8在肝脏中的表达量也显著上调(p<0.05),但上调倍数仅为对照组的9.37倍.结果表明,EcIRF8基因可能主要参与斜带石斑鱼的抗病毒免疫反应.

干扰素调节因子8抑制辅助性T淋巴细胞17分化在白塞病发病机制中的作用

白塞病是一种主要表现为复发性口腔溃疡、生殖器溃疡、眼炎和皮肤损害的慢性系统性血管炎。白塞病发病机制尚不明确,可能是遗传易感个体在感染或环境等因素触发下发生的自身免疫性疾病,辅助性T淋巴细胞17(Th17)在白塞病发病过程中有重要作用。干扰素调节因子8(IRF8)可抑制Th17分化,从而抑制Th17及白细胞介素17产生的炎性反应。基因组学研究提示,IRF8相关单核苷酸多态性位点是白塞病的风险基因位点。近年来,IRF8抑制Th17分化在白塞病发病机制中的作用已经成为研究热点。

外周血干扰素调节因子-8和组织因子途径抑制剂-2甲基化水平可以作为肝细胞癌的早筛和预后存活的预测因子

目的探究外周血干扰素调节因子-8(IRF-8)和组织因子途径抑制剂-2(TFPI-2)甲基化水平对肝细胞癌的预测作用以及与预后的相关性分析研究。方法以58例肝细胞癌患者为实验组,16例体检健康者作为对照组。抽取入组者的清晨血,利用试剂盒检测血清中的IRF-8和TFPI-2的甲基化水平。同时收集患者的临床相关资料,利用Logistic回归分析肝细胞癌的易感因素,随访2年后患者的存活率,比较IRF-8和TFPI-2启动子甲基化水平与预后的关系。结果58例肝细胞癌患者外周血中发现865918个CpG位点中的2180个(0.25%)在肿瘤组织中差异甲基化。与数据库对比,发现干扰素调节因子-8(IRF-8)和组织因子途径抑制剂-2(TFPI-2)启动子甲基化水平变化最大。Logistic回归分析结果显示,年龄,BMI,HBsAg阳性,肝硬化病史,IRF-8甲基化水平和TFPI-2甲基化与肝细胞癌发病密切相关(P<0.05)。外周血中IRF-8启动子甲基化和TFPI-2启动子甲基化情况与年龄、HBsAg阳性、肝硬化、分化程度、淋巴结转移、浸润深度、卫星灶等呈正相关(P<0.05)。2年随访中存活患者的外周血中IRF-8和TFPI-2甲基化状态与未存活患者比较具差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血中IRF-8和TFPI-2甲基化水平可以作为肝细胞癌患者的早筛和预后的预测因子。

重组人粒细胞集落刺激因子调节IL-27和IRF8表达诱导供受者免疫耐受机制的初步研究

目的 rhG-CSF既是造血干细胞动员剂,也是免疫耐受诱导剂,可减轻移植物抗宿主病(GVHD);干扰素调节因子8(IRF8)拮抗小鼠RORγt的作用,可以抑制小鼠初始T细胞向Th17细胞分化;本文旨在研究rhG-CSF动员对IRF8基因表达及蛋白水平、外周血Th17和Treg细胞的比例和Th17分化的负性调控因子IL-27的调节作用。方法 采集10名造血干细胞移植供者rhG-CSF动员前后(第5天)外周血,通过免疫磁珠法分离CD4+T细胞,qRT-PCR及Western blotting检测CD4+T细胞IRF8基因及蛋白水平,流式细胞术检测Th17(CD3+CD8-IL-17+)和Treg细胞(CD4+CD25+Foxp3+)比例,ELISA法检测血清中IL-17及IL-27的浓度。结果 动员前、后外周血外周血单个核中细胞的比例(%):Th17细胞(2.597±1.993)%比(0.355±0.129)%(P<0.01)),Treg细胞(0.468±0.522)%比(1.491±1.216)%(P<0.01);动员前、后IL-17A(pg/ml):(21.75±18.77)pg/ml比(15.53±10.89)pg/ml(P<0.01);动员前、后IL-27(pg/ml):(5 180.06±1 860.75)pg/ml比(3 806.56±1 658.89)pg/ml(P<0.01)。IRF8基因表达在动员后基因表达相对增加1.69倍,IRF8蛋白在动员后比动员前表达显著增加。结论 rhG-CSF抑制供者外周血Th17细胞、促进Treg细胞群分化,诱导免疫耐受,可能与rhG-CSF促进CD4+T细胞中IRF8、IL-27和IRF8负性调控Th17细胞分化有关。

IRF8新发移码突变的基因功能分析

目的对反复肺炎患儿队列病因筛查中发现的干扰素调节因子8基因(interferon regulator factor 8,IRF8)新发突变(c.1266dupA)进行分子细胞水平的功能研究与验证。方法针对IRF8突变序列构建野生与突变蛋白过表达载体,通过质粒转染或构建慢病毒感染不同工具细胞,通过qPCR、Western blot、免疫荧光等实验手段检测其表达差异及对下游炎症相关基因表达调控的改变。结果IRF8野生及突变过表达载体构建成功,且转染效率可观,包装成的慢病毒感染效率亦较高。突变基因IRF8(c.1266dupA)相较于野生型IRF8转录水平降低,表达蛋白的相对分子质量略增大,表达量降低,突变蛋白IRF8mut相对野生型IRF8蛋白核质比增加,IRF8(c.1266dupA)对下游ISRE元件的抑制功能增强。结论IRF8新发移码突变属于功能获得型(gain of function,GOF)突变。

转录因子IRF8抑制Th17细胞分化并减轻T细胞免疫介导的小鼠结肠炎

目的:转录因子干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)家族与Th17的发育密切相关,近年来发现Th17细胞在炎症性肠病的发病中发挥重要作用,本研究探讨IRF8对Th17发育及T细胞转染免疫介导的小鼠实验性肠炎的影响。方法:(1)采用流式细胞术分选野生型(WT)或IRF8全基因敲除(IRF8-/-)小鼠脾脏和淋巴结的naive CD4+T细胞(CD4+CD62L+CD44low),在Th1、Th2或Th17极化的条件下培养,采用流式细胞术检测Th1、Th2和Th17的比例。(2)建立实验性肠炎模型:采用免疫磁珠法分选WT或IRF8-/-小鼠中的脾脏和淋巴结中CD4+CD25+Treg,WT小鼠的CD4+CD45RBhiT细胞单独或者分别联合WT或IRF8-/-小鼠的CD4+CD25+Treg腹腔注射给RAG1-/-小鼠;WT或IRF8-/-小鼠的naive CD4+CD45RBhiT细胞腹腔注射给RAG1-/-小鼠;观察上述小鼠每周体重的变化,第5周时处死小鼠,进行结肠炎病理评分和肠系膜淋巴结T淋巴细胞亚群检测。结果:(1)IRF8-/-较WT的naive CD4+T细胞在极化条件下向Th17细胞分化更明显(P<0.01),而对Th1和Th2细胞的分化无影响(P>0.05)。(2)CD4+CD45RBhiT细胞转染给RAG1-/-小鼠,IRF8-/-较WT供体鼠引起的RAG1-/-小鼠体重显著降低(P<0.05),结肠炎评分显著增高(P<0.05),且肠系膜淋巴结中IL-17+CD4+细胞比例明显增高(P<0.01),而IFN-γ+CD4+和Foxp3+CD4+细胞比例无影响(P>0.05);IRF8-/-小鼠的CD4+CD25+Treg对WT小鼠CD4+CD45RBhiT细胞转染给RAG1-/-小鼠诱发的免疫介导的结肠炎显示出正常的免疫抑制作用。结论:转录因子IRF8基因敲除促进CD4+T细胞向Th17细胞分化,促进转染naive CD4+T细胞诱导的实验性结肠炎的发生,IRF8基因敲除小鼠Treg细胞免疫抑制功能正常。

小干扰RNA沉默干扰素调节因子-8对缺氧复氧后肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的观察小干扰RNA(siRNA)靶向沉默干扰素调节因子-8(IRF-8)对缺氧复氧后肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法将IRF-8 siRNA、Negative control(NC)siRNA通过脂质转染试剂转染至肺泡上皮细胞株[L2(购自中国上海拜利生物科技有限公司)],将细胞分为4组,si-IRF-8组,转染含有IRF-8 si-RNA的细胞组;质粒对照组,转染Negative control(NC)siRNA的细胞组;正常对照组,无转染质粒,完全正常培养;阴性对照组,无质粒转染,给与缺氧复氧干预。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测肺泡上皮细胞L2细胞株转染后凋亡相关分子标志物:活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3);聚合酶链反应(PCR)检测Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的转录水平变化。组间比较采用独立样本t检验。结果转染IRF-8 siRNA后,L2细胞内IRF-8相对表达水平明显下调,差异有统计学意义[si-RNA组(0.146±0.009)对比si-NC组(1.001±0.055),t=15.566,P<0.01]。经过缺氧复氧干预后L2细胞株si-IRF-8组Caspase-3、bax水平(1.877±0.250、1.989±0.145)较si-NC组(3.681±0.292、4.636±1.261)明显降低,差异有统计学意义(t=-4.686、-5.110,P<0.01),bcl-2水平在L2细胞的si-IRF-8组(0.837±0.858)较si-NC(0.179±0.533)组显著升高,差异有统计学意义(t=15.955,P<0.01);Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白的表达水平(0.257±0.051)较质粒对照组(0.485±0.751)明显下调,差异有统计学意义(t=6.205,P<0.01)。结论IRF-8 si-RNA能特异性下调肺泡上皮细胞L2细胞株中IRF-8的表达,并显著降低缺氧复氧干预后细胞的凋亡水平,其机制可能与下调促凋亡相关蛋白bax、Caspase-3及上调抗凋亡相关蛋白bcl-2的转录过程相关。

IRF8与神经病理性痛的关系研究

神经病理性痛是一种病理机制比较复杂的慢性疼痛综合征,活化的小胶质细胞参与神经病理性痛的发生发展,而且干扰素调节因子8(IRF8)是调控小胶质细胞活化的关键转录因子。因此,本文通过厘清梳理IRF8与神经病理性痛的关系来探讨神经病理性痛的发病机制。

外周血IRF8基因甲基化水平与慢性乙型肝炎患者肝纤维化相关性研究

目的探讨外周血中干扰素调节因子8(interferon regulatory factor,IRF8)基因甲基化水平与慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝纤维化程度的相关性。方法选择2018年3月至2021年3月在山东省立第三医院住院治疗的236例CHB患者作为研究对象。参照《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》进行肝纤维化分期,以S2、S3、S4期患者为明显肝纤维化组,S0-1期患者为不明显肝纤维化组。收集所有患者的临床指标,检测外周血IRF8基因启动子区CpG岛(共14个CpG位点)甲基化水平及IRF8 mRNA的表达水平并进行组间比较。结果不明显肝纤维化组患者107例,明显肝纤维化组患者129例。两组患者年龄、性别、体重指数和总胆红素水平比较差异无显著性(P>0.05);明显肝纤维化组白细胞计数和血小板计数显著低于不明显肝纤维化组,谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平、天冬氨酸转氨酶/血小板比率指数和FIB-4指数显著高于不明显肝纤维化组,差异均有显著性(P<0.05)。在14个CpG位点中,明显肝纤维化组的CpG 2、CpG 6、CpG 9和CpG 13位点甲基化水平高于不明显肝纤维化组(P<0.05);明显肝纤维化组IRF8基因的总甲基化水平为2.24%±0.19%,显著高于不明显肝纤维化组(1.87%±0.16%),差异有显著性(P<0.001)。受试者工作特征曲线分析显示,应用IRF8甲基化水平诊断明显肝纤维化的曲线下面积为0.909(95%CI 0.873~0.945),敏感度为83.7%,特异度为86.0%。明显肝纤维化组IRF8mRNA表达水平为1.47±0.11,低于不明显肝纤维化组(1.82±0.14),差异有显著性(P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,CHB患者的IRF8 mRNA表达水平与甲基化水平呈显著负相关(P<0.001)。结论外周血IRF8基因甲基化水平与CHB患者肝纤维化程度具有显著相关性,可作为肝纤维化进展的生物标志物,在肝纤维化的无创诊断中具有一定应用价值。

NF-κB p65调控IRF-8基因启动子活性及其启动子结合元件的初步鉴定

目的:探讨大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件。方法:采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增大鼠p65基因蛋白编码区(complete sequence coding,CDS)序列,将其插入到空载p IRES2-EGFP质粒中,构建大鼠野生型(wild type,WT)p65过表达质粒(pIRES2-p65 WT)。在此基础上,将p65第535位丝氨酸(serine,S)突变为天冬氨酸(aspartic,D)或丙氨酸(alanine,A),分别构建p65持续活化突变型质粒(pIRES2-p65 S535D)和p65显性负性突变型质粒(pIRES2-p65 S535A)。之后应用生物信息学软件预测IRF-8基因启动子区p65的结合元件,并据此构建IRF-8启动子全长(full-length,FL)和3个截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-IRF-8-FL(-1892^+174 nt)、pGL3-IRF-8-1(-1360^+174 nt)、pGL3-IRF-8-2(-752^+174 nt)和pGL3-IRF-8-3(-68^+174 nt)。将上述质粒行不同组合共转染人胚肾293T(human embryonic kidney 293T,HEK-293T)细胞,Western blot和荧光素酶实验分别检查p65的表达和IRF-8的启动子活性,并分析IRF-8启动子区可能的p65结合元件。结果:菌液PCR及测序证实上述质粒构建成功。分别将pIRES2-p65 WT、pIRES2-p65S535D、pIRES2-p65 S535A和p GL3-IRF-8-FL共转染HEK-293T,发现过表达pIRES2-p65 WT或pIRES2-p65 S535D均可明显增加IRF-8启动子活性,且以pIRES2-p65 S535D更为显著;而过表达pIRES2-p65 S535A后,IRF-8启动子活性无明显变化。将pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1~3和pIRES2-p65 S535D共转染HEK-293T后发现,pGL3-IRF-8-3的启动子活性显著低于pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1和p GL3-IRF-8-2,提示大鼠IRF-8启动子-752~68 nt区域可能存在p65结合元件。结论:在HEK-293T细胞内过表达野生型或持续活化突变型p65可显著促进IRF-8基因的启动,且p65与IRF-8启动子的结合元件可能位于-752^-68 nt部位。

大鼠MIP-1α基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其IRF-8结合元件的初步鉴定

目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α基因启动活性的影响,同时筛选其可能的IRF-8结合元件。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠MIP-1α基因启动子序列,将MIP-1α基因启动子插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建MIP-1α基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-FL)。将上述p GL3-MIP-1α-FL和本课题组已构建的大鼠IRF-8过表达质粒(pIRES2-IRF-8)共转染HEK-293T细胞,检测细胞内荧光素酶活性,确定IRF-8对MIP-1α基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件,并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-1～3)。将上述MIP-1α基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和IRF-8过表达质粒共转染HEK-293T细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定IRF-8的结合元件。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述pGL3-MIP-1α-FL(-1 400～+94 nt)质粒构建成功。将pGL3-MIP-1α-FL和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,过表达IRF-8可显著增加MIP-1α基因启动子活性。应用生物信息学软件预测发现MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件(-1 157～-1 144nt、-740～-734 nt、-683～-670 nt、-365～-359 nt、-249～-236 nt),并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-MIP-1α-1(-453～+94 nt)、p GL3-MIP-1α-2(-352～+94 nt)和pGL3-MIP-1α-3(-3～+94 nt)。将pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1～3和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,p GL3-MIP-1α-3的启动活性显著低于pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1和pGL3-MIP-1α-2。提示IRF-8可能结合在大鼠MIP-1α基因启动子的-352～-3 nt区域的IRF-8结合元件(-249～-236 nt)上。结论:本实验成功构建了大鼠MIP-1α基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-8在MIP-1α基因启动子上的可能结合元件,为后续研究奠定了基础。

槲皮素介导IRF8/IFN-γ改善Hp感染诱导慢性萎缩性胃炎的机制研究

目的探究槲皮素介导干扰素调节因子8/γ干扰素(IRF8/IFN-γ)改善幽门螺杆菌(Hp)感染诱导慢性萎缩性胃炎(CAG)的机制。方法45只SD大鼠随机分为空白组10只和CAG组35只,采用水杨酸钠+乙醇+Hp悉尼菌株1菌液法灌胃建立Hp性CAG大鼠模型。将建模成功的CAG组大鼠余下30只大鼠随机分为模型组、槲皮素组(25 mg/kg)和胃复春组(0.43 g/kg),每组10只。相应药物干预30 d后处死大鼠,观察各组大鼠胃黏膜病理学变化,测定大鼠胃分泌功能(胃液pH、分泌量及胃蛋白酶活性),采用酶联免疫吸附法检测血清胃泌素17(G-17)、白细胞介素17(IL-17)和趋化因子1(CXCL1),实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测胃组织中IRF8、IFN-γ和干扰素诱导蛋白3(IFIT3)表达。结果模型组、槲皮素组和胃复春组胃黏膜组织炎症评分、胃液pH、血清IL-17、CXCL1、胃组织IRF8、IFN-γ和IFIT3 mRNA及蛋白表达均高于空白组,胃液总量、胃蛋白酶活性和G-17均低于空白组(P<0.05);槲皮素组和胃复春组胃黏膜组织炎症评分、胃液pH、血清IL-17、CXCL1、胃组织IRF8、IFN-γ和IFIT3 mRNA及蛋白表达均低于模型组,胃液总量、胃蛋白酶活性和G-17均高于模型组(P<0.05)。结论槲皮素通过抑制IRF8/IFN-γ轴,降低胃部炎症反应,增强其胃分泌功能,从而改善Hp感染诱导的CAG。