基于JAK/STAT信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制

目的 基于Janus激酶(JAK)/信号转导与转录活性因子(STAT)信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制。方法 选取2020年3月—2022年2月收治的毛细支气管炎患儿156例,依据治疗方案不同分为观察组和对照组2组各78例。观察组予重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗,对照组予乙酰半胱氨酸治疗。比较2组治疗7 d后临床效果及症状和体征消失时间、住院时间,治疗前及治疗7 d后JAK/STAT信号通路关键蛋白[干扰素调节因子9(IRF9)、信号转导与转录活性因子1(STAT1)和信号转导与转录活性因子2(STAT2)]表达及相关细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)]、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平,以及治疗期间不良反应发生率、治疗后6个月喘息复发率。结果 治疗7 d后,观察组总有效率、IRF9、STAT1、STAT2表达和Treg水平高于对照组;IL-6、MMP-9、TIMP-1和Th17水平低于对照组(P<0.01)。观察组咳嗽、喘憋、喘息、湿啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗期间,2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后6个月,观察组喘息复发率低于对照组(P<0.01)。结论 重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果显著,可促进症状、体征消失,加速康复进程,降低喘息反复发作风险;机制可能为其抑制IL-6释放,激活JAK/STAT信号通路,促使Th17向Treg转化,增强机体免疫应答,且调控MMP-9、TIMP-1表达,减轻支气管及肺损伤。

肠道病毒71型通过下调IRF9的蛋白水平抑制干扰素的抗病毒作用

目的:初步探讨肠道病毒71型抑制干扰素(IFN)信号通路的具体机制,为以后EV71的治疗提供理论基础。方法:采用EV71感染人横纹肌肉瘤细胞(RD细胞)模型,实验组分正常对照组(Control)、EV71病毒对照组(EV71组)、仅有IFN-β处理组(IFN-β组)、EV71+IFN-β处理组(EV71+IFN-β组)。采用Real-time PCR法检测IFN诱导基因(ISGs)的表达。细胞核蛋白和胞浆蛋白分离后应用免疫印迹法检测p-STAT1在细胞中的分布。采用免疫印迹法检测STAT1、IRF9的表达。结果:EV71+IFN-β组与IFN-β组相比,OAS1、MX1、ISG54 mRNA表达水平明显降低,分别降低约47%、50%、48%,差异有统计学意义(P<0.05),提示EV71感染抑制了IFN-β诱导的ISGs mRNA的表达。EV71感染并不影响STAT1的蛋白水平和磷酸化过程。IFN-β组,p-STAT1主要定位在胞核中,而EV71+IFN-β组的p-STAT1主要定位在胞浆中,提示EV71可能抑制了pSTAT1的核转位。检测细胞总裂解液中IRF9的蛋白水平,结果发现,在IFN-β处理的细胞中,IRF9的表达明显上调;而与IFN-β组相比,EV71+IFN-β组IRF9的蛋白水平明显降低,提示EV71感染抑制了IFN-β诱导的IRF9的表达。结论:EV71通过降低IRF9来抑制ISGF3的核转位,进而阻断IFN的抗病毒作用。

α干扰素和利巴韦林抗丙型肝炎病毒作用的比较研究

α干扰素(IFN-α)联合利巴韦林是目前临床治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的标准方案。本研究以体外培养的感染性病毒HCVcc为研究对象,比较IFN-α和利巴韦林对HCV复制的影响,以及对干扰素调节因子9(IRF9)和干扰素刺激基因15(ISG15)等抗病毒基因的调节能力。结果显示,100u/mlIFN-α显著降低HCV RNA水平,利巴韦林剂量依赖性抑制HCV复制,且IFN-α联合利巴韦林对HCV复制及HCV NS3和E2蛋白表达具有协同抑制作用。5～80u/mlIFN-α剂量依赖性诱生IRF9和ISG15;1和5μg/ml利巴韦林不促进IRF9和ISG15水平升高;而利巴韦林联合IFN-α对两者亦无促进作用。

IRF-9在喉鳞状细胞癌细胞中的表达及作用

目的探讨干扰素调节因子9(interferon regulatory factor 9,IRF-9)在喉鳞状细胞癌细胞中的表达及其对喉鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的作用。方法采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和免疫组织化学法检测35例喉鳞状细胞癌和30例声带息肉的组织标本中IRF-9蛋白的表达情况,并观察IRF-9与临床病理参数之间的关系。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot检测IRF-9 mRNA和蛋白的表达。通过细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)、Transwell实验、流式细胞凋亡实验分别检测沉默IRF-9后人喉鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。结果IRF-9在喉鳞状细胞癌组织的表达水平显著高于声带息肉组织(P<0.01)。IRF-9蛋白的表达与喉鳞状细胞癌的临床分期、病理学分级、远处转移密切相关(P均<0.05)。IRF-9小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)可以下调喉鳞状细胞癌细胞IRF-9 mRNA和蛋白的表达(P均<0.05);沉默IRF-9后喉鳞状细胞癌细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力明显减弱,凋亡增加(P均<0.01)。结论IRF-9在喉鳞状细胞癌中明显过表达,IRF-9基因有望成为喉鳞状细胞癌潜在治疗靶点。