毕赤酵母表达猪干扰素-γ基因及其抑制蓝耳病病毒效果

为了研究和应用猪重组干扰素 γ(rPoIFN γ)预防和治疗病毒性疫病 ,将大白猪PoIFN γ基因插入到酵母整合载体pHIL S1、构建了重组GS115工程菌 (pHIL S1 rPoIFN γ)。经过SDS PAGE、Westernblot分析和抗滤泡性口炎病毒 (VSV)活性测定 ,证实rPoIFN γ分子量为 18kD ,在GS115中的表达量为 18% ;其抗VSV活性为 45 0～ 5 40u mL。用rPoIFN γ处理猪肺巨噬细胞系Marc 145后 ,经细胞病变抑制法 (CPE5 0 )测定 ,rPoIFN γ可以抵抗蓝耳病病毒 (PRRSV)感染。结果显示酵母表达的rPoIFN

猪干扰素-γ基因多态性及与早期生长、繁殖性能关联性分析

为研究IFN-γ基因作为猪抗病育种中一种分子标记的可能性,本试验采用PCR-SSCP技术检测包括军牧1号白猪、杜洛克猪、大白猪3个品种共481头个体的IFN-γ基因全序列单核苷酸多态性,并对其与早期生长性能、繁殖性能的关联性进行分析。结果表明,在猪IFN-γ基因内含子1、内含子3、外显子4内各检测到一个突变位点,分别为T825C、T2370C、G5301A;在T825C位点AB基因型个体的70日龄体质量显著高于AA和BB型个体(0.01<P<0.05),AA和BB型间差异不显著(P>0.05),断奶至70日龄日增体质量AB基因型个体极显著高于AA和BB型个体(P<0.01),AA和BB型间差异不显著(P>0.05);T2370C、G5301A位点的多态性对早期生长性能的影响不显著(P>0.05)。军牧1号白猪G5301A位点EF基因型个体的产仔数、产活仔数显著高于EE型个体(0.01<P<0.05)。T825C、T2370C位点各基因型间的产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝质量、21日龄窝质量差异均不显著(P>0.05)。研究结果提示:猪IFN-γ基因T825C位点多态性对仔猪70日龄体质量、断奶至70日龄日增体质量有影响;G5301A位点多态性对母猪的产仔数、产活仔数有影响。

干扰素-γ基因转导前后人肝癌细胞HepG1表型变化及基因表达图谱差异的研究

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了ＩＦＮ－γ基因的ＨｅｐＧ１ ｍＲＮＡ进行杂交，同时设一转导空白载体ＬＸＳＮ的ＨｅｐＧ１ ｍＲＮＡ与膜片杂交作为对照，比较杂交信号，获得表达差异的基因。结果：①ＩＦＮ－γ基因转导的ＨｅｐＧ１细胞生长速度减慢，表面绒毛结构数量增多，绒毛变细、变长，ＨＬＡⅠ类和Ⅱ类分子表达增高；②ＩＦＮ－γ基因转导后，ＨｅｐＧ１细胞有多种基因的表达发生变化，其中一些基因较未转导ＩＦＮ－γ时表达增高，一些较未转导ＩＦＮ－γ时表达减低。表达发生变化的基因主要为与细胞周期和细胞凋亡相关的基因。结论：ＩＦＮ－γ基因修饰ＨｅｐＧ１细胞后使细胞表型发生变化，并且在基因表达上也发生改变。运用微阵列技术为进一步了解这些基因的相互关系及其与肿瘤生物学行为的关系奠定了基础，也可为优化肿瘤免疫基因治疗提供线索。

猪干扰素-γ基因多态性及与部分免疫指标关联性分析

为研究干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)基因作为猪抗病育种中一种分子标记的可能性,采用PCR-SSCP及测序方法对军牧1号白猪、杜洛克猪、约克夏猪3个品种共481头个体IFN-γ基因全序列的单核苷酸多态性进行了检测,结果发现在猪IFN-γ基因的内含子1、内含子3、外显子4内各发现1个突变位点,分别为T825C、T2730C、G5301A。除在约克夏猪中没有检测到G5301A突变外,各遗传群体内T825C、T2730C、G5301A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。用最小二乘法分析了各个突变位点基因型与部分免疫指标的相关性,结果表明,T825C位点3种基因型间IgG含量AB型显著高于AA型和BB型(0.01<P<0.05);T2730C位点IgM含量CC型显著高于CD型和DD型(0.01<P<0.05);G5301A位点IgG含量EE型显著高于EF型(0.01<P<0.05)。

鸡IFN-γ基因在大肠杆菌中的表达及表达产物对鸡的免疫保护

将鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)成熟肽基因编码区序列亚克隆到原核表达载体pQE30上,并转化大肠杆菌M15感受态细胞。经诱导后,以镍金属亲和层析法对表达蛋白进行纯化,采用SDS-PAGE与Western-blot对表达蛋白进行鉴定。结果显示,经诱导的转化子在体外获得了高效表达,表达蛋白约占菌体蛋白的23%。0.5ng/mL以上的重组ChIFN-γ(rChIFN-γ)能显著抑制鸡新城疫病毒对细胞的侵染与伤害;但是,细胞先感染病毒后,再以不同剂量rChIFN-γ作用于细胞,则不具有对细胞的保护作用,说明rChIFN-γ对细胞的保护是通过调节机体免疫能力、干扰病毒入侵实现的。1ng/mL的rChIFN-γ可显著提高新城疫疫苗的免疫效价,具有较强的免疫协同作用。表明,原核表达的rChIFN-γ具有显著的生物学活性。

黄曲霉毒素B_1对肉鸭生长、肝组织结构及免疫相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮黄曲霉毒素B1(AFB1)对肉鸭生产性能、肝组织结构及免疫相关基因白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)表达的影响。试验选用1日龄健康双鬼头肉鸭240羽,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10羽。试验期4周(28 d),对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组饲喂在基础饲粮中分别添加50、100和150μg/kg AFB1纯品的试验饲粮,记录采食量和增重数据,计算生产性能;试验结束时屠宰,取肝脏样品,分别进行切片及实时荧光定量PCR检测分析。结果表明:1)饲粮中添加不同水平AFB1极显著降低了肉鸭的平均日增重和平均日采食量(P<0.01),与对照组相比,3个试验组肉鸭末重分别下降了14.67%(P<0.01)、30.38%(P<0.01)和31.83%(P<0.01),且100、150μg/kg AFB1还极显著增加了料重比(P<0.01),显著增加了死亡率(P<0.05);2)随着AFB1添加水平的增加,肉鸭肝脏组织病变程度逐渐增加,肝脏中IL-2和IFN-γ基因mRNA表达水平呈现不同程度的降低,其中100、150μg/kg AFB1极显著下调了IFN-γ基因mRNA的表达水平(P<0.01)。由此可见,饲粮中添加AFB1可导致肉鸭生产性能下降和肝脏组织结构损伤,并通过下调肝脏中IL-2和IFN-γ基因的表达,改变肉鸭机体的免疫水平。

IFN-γ基因多态性及术前炎症指标与宫颈癌术后感染的关联

目的 探究干扰素(IFN)-γ基因多态性及术前炎症指标与宫颈癌术后感染的关联。方法 选择2018年10月-2020年10月南阳市中心医院收治的126例宫颈癌患者为研究对象,患者均行手术治疗,比较术后感染组与非感染组患者IFN-γ基因多态性及术前炎症指标水平及其临床意义。结果 126例宫颈癌患者术后感染49例,感染率为38.89%,感染组患者+874T/A位点A等位基因频率及+2109A/G位点G等位基因频率均高于非感染组(P<0.05),感染组患者术前炎症指标IFN-γ、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均高于非感染组(P<0.05),IFN-γ基因+874T/A位点AA基因患者炎症指标水平高于TA、TT基因患者(P<0.05),+2109A/G位点GG基因患者炎症指标水平高于AA、AG基因患者(P<0.05)。结论 IFN-γ基因多态性与宫颈癌患者术后感染关系密切,并可能通过调节患者术前炎症因子水平介导患者术后感染的发生。