小鼠干扰素-γ诱生单核因子在昆虫细胞中的高效表达及其血管生成抑制作用

干扰素-γ诱生单核因子(monokineinducedbyinterferon-γ,MIG,CXCL,9)是一种具有趋化T淋巴细胞NK细胞的CXC趋化因子家族成员之一.通过RT-PCR技术从小鼠脑组织中克隆了小鼠MIGcDNA,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了MIG重组杆状病毒,并在Tn-581-4昆虫细胞内将其进行了表达,最后对表达产物进行了纯化和活性鉴定.结果显示:小鼠MIG蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中可得到高效分泌性表达;分泌到培养上清中的重组MIG蛋白经S-Sepharose纯化后得到的MIG蛋白纯度约为90%,产量为10mg/L;在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析中该蛋白质分子质量显示为14.4ku左右;该纯化蛋白在体外具有诱导CTLL-2淋巴细胞钙离子内流和抑制血管内皮细胞迁移和增值的活性,在鸡胚尿囊膜实验中小鼠重组MIG具有抑制新血管生成的功能.实验表明,在杆状病毒系统中高效表达的小鼠重组MIG蛋白具有抑制内皮细胞迁移、增殖和血管生成活性,为今后进一步研究其血管生成抑制活性的机理和将其应用于肿瘤血管抑制实验建立了基础.

干扰素-γ诱导的单核因子、单核细胞趋化蛋白-1和转化生长因子-β1在变应性鼻炎的表达及其意义

目的探讨干扰素-γ诱导的单核因子(monokine induced by IFN-γ,Mig)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)在变应性鼻炎发病中的作用及变应性鼻炎患者Th1/Th2/Th3亚群的功能状态。方法抽取变应性鼻炎患者和健康对照者外周血,用ELISA法检测血清Mig、MCP-1及TGF-β1的含量。结果健康对照组血清Mig为(90.99±21.92)pg/ml,高于变应性鼻炎组的(-4.91±28.01)pg/ml及变应性鼻炎合并哮喘组的(-8.33±8.34)pg/ml(P=0.000)。变应性鼻炎患者血清MCP-1浓度为(81.16±1.40)pg/ml,明显高于健康对照组的(51.56±2.91)pg/ml(P=0.000);变应性鼻炎合并支气管哮喘患者血清MCP-1浓度为(103.31±11.32)pg/ml,较单纯变应性鼻炎患者高(P=0.003);MCP-1与速发相反应的相关典型症状,如鼻塞(r=0.380,P=0.001)、喷嚏(r=0.314,P=0.006)、流涕(r=0.417,P=0.000)、体征(r=0.455,P=0.000)呈正相关。变应性鼻炎及变应性鼻炎合并哮喘患者血清TGF-β1分别为(51.66±5.42)和(54.43±5.10)ng/ml,高于健康对照组的(44.17±7.33)ng/ml(P=0.000),TGF-β1与鼻塞(r=0.882,P=0.000)、流涕(r=0.288,P=0.013)、体征(r=0.559,P=0.000)呈正相关。健康对照组、变应性鼻炎组、变应性鼻炎合并哮喘组血清MCP-1及TGF-β1表达不存在因年龄、性别引起的统计学差异。结论变应性鼻炎和支气管哮喘存在Th2亚群强势,变应性鼻炎患者体内出现保护性(或调节性)Th3功能增强,不同年龄、性别不影响血清MCP-1及TGF-β1表达。

干扰素-γ诱导的单核因子、单核细胞趋化蛋白-1、转化生长因子-β与变应性气道炎症的关系

变应性气道炎症的免疫失衡受多种免疫因子调节。Th1/Th2失平衡及 Th3细胞的免疫抑制作用是这方面的研究热点。本文主要阐述干扰素-γ诱导的单核因子、单核细胞趋化蛋白-1、转化生长因子-β在变应性气道炎症中的作用机制。了解调节性 T 细胞的免疫调节机制有助于开拓变应性气道炎症治疗的新方法。

活血化瘀方对血清中γ-干扰素诱导蛋白-10、单核细胞趋化蛋白-1、转化生长因子-β1水平的影响及结核性胸膜炎疗效的研究

目的 观察活血化瘀方治疗结核性胸膜炎对病人胸膜厚度及血清中γ-干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平的影响。方法 收集新乡医学院第一附属医院2017年4月至2019年12月收治的结核性胸膜炎病人104例,采用随机数字表法分为常规组及中医组,每组52例。常规组给予胸腔穿刺抽液术+抗结核药物治疗,中医组在常规组基础上加用活血化瘀方(血府逐瘀汤加减)治疗。治疗8周后,比较两组治疗前后血清中细胞因子水平及胸膜厚度的变化,两组胸膜腔穿刺抽液次数、治疗总有效率和治疗期间不良反应情况。结果 治疗8周后,中医组总有效率(92.31%)高于常规组(76.92%);中医组胸膜腔穿刺次数少于对照组(P<0.05);治疗期间中医组不良反应率(69.2%)与常规组(71.2%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗8周后,两组血清中IP-10、MCP-1、TGF-β1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-10(IL-10)水平较治疗前下降,胸膜厚度较治疗前上升,中医组血清中IP-10、MCP-1、TGF-β1、TNF-α、IL-5、IL-10水平及胸膜厚度[(286.35±46.14)ng/L、(23.71±4.74)μg/L、(159.85±61.85)μg/L、(374.39±46.05)ng/L、(168.63±32.05)ng/L、(84.32±29.54)ng/L、(2.76±0.36)mm]低于常规组[(359.62±57.48)ng/L、(29.87±6.45)μg/L、(204.95±76.44)μg/L、(425.85±57.52)ng/L、(209.68±41.41)ng/L、(117.43±45.21)ng/L、(3.15±0.42)mm](均P<0.05)。结论 活血化瘀方治疗结核性胸膜炎可调节相关细胞因子的表达水平,减轻胸膜增厚程度,且不增加不良反应。

哮喘小鼠肺组织中趋化因子干扰素-γ诱导蛋白-10、干扰素-γ诱导单核细胞因子表达及其意义

目的:探讨趋化因子干扰素-γ诱导蛋白-10(IP-10)、干扰素-γ诱导单核细胞因子(Mig)在哮喘小鼠肺组织中的表达及其意义,观察地塞米松(DX)、卡介苗(BCG)干预对哮喘小鼠表达IP-10、Mig的影响。方法:健康雄性昆明小鼠40只,分为哮喘组、DX组、BCG组和对照组,每组10只。哮喘组分别于实验第1、3、5、7、9、11、13天腹腔注射卵清蛋白(OVA)10μg致敏,第21天起予1%OVA5 ml雾化吸入30 min,每天1次,连续7天,激发哮喘。DX组在雾化吸入前30 min,按2 mg/kg腹腔注射DX溶液。BCG组在致敏前7、3、1天分别皮内注射BCG 0.025 mg。对照组用生理盐水代替OVA。各组小鼠于末次雾化吸入24 h后,制备肺组织标本,免疫组化法检测肺组织中IP-10、Mig表达。结果:哮喘组IP-10表达较对照组明显增加(P<0.01),DX组明显降低(P<0.05),BCG组IP-10表达有下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。哮喘组Mig表达较对照组明显降低(P<0.01),DX组和BCG组增加(P<0.05)。结论:在哮喘小鼠肺组织中,IP-10表达增加,Mig表达降低;DX可以下调IP-10、上调Mig的表达;BCG上调Mig的表达,但对IP-10作用不明显。趋化因子IP-10、Mig参与哮喘发病过程,DX与BCG可不同程度干预IP-10、Mig的表达。

干扰素-γ诱导单核细胞因子(MIG)在类风湿关节炎患者滑膜液及血清中的表达及意义

目的分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血清中干扰素(IFN)-γ诱导单核细胞因子(MIG)水平变化,探讨MIG在RA的临床意义。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)技术检测RA患者滑膜液及血清中MIG及IFN-γ水平,分析MIG与IFN-γ及临床指标的关系。结果滑膜液中,RA患者MIG及IFN-γ水平明显高于对照组(P均<0.01),MIG与IFN-γ水平呈正相关(r=0.486,P=0.035);血清中,RA患者活动组MIG及IFN-γ水平明显高于稳定组(P均<0.01),而后者又明显高于对照组(P均<0.01),RA活动期患者MIG与IFN-γ水平呈正相关(r=0.304,P=0.043);30例活动期RA患者治疗前MIG及IFN-γ水平明显高于治疗后(P均<0.01),且治疗前后MIG水平的变化与RF、ESR、CRP的变化无相关性(P均>0.05),与DAS28的变化呈正相关(r=0.405,P=0.029)。结论 RA患者的血清及滑膜液中存在异常增高的MIG,且其水平与病情活动相关,可作为RA病情活动新的参考指标,血清中MIG水平变化可为RA的疗效提供参考。

PHA体外诱导草鱼白细胞产生γ-干扰素的研究

于 1 997年 1 0月— 1 999年 3月 ,采用半数细胞病变抑制等方法 ,进行植物凝集素(Phytoagglutinin ,PHA)体外诱导草鱼白细胞产生γ 干扰素的研究。结果表明 ,在PHA诱导的草鱼白细胞培养液中出现了一种抗病毒因子 ,经理化和生物学性质鉴定证明 ,该因子是一种干扰素活性物质。但它不同于病毒诱导的α/β 干扰素 ,主要表现为 :对 56℃、pH =2和0 1 %SDS敏感 ;其活性不能被病毒诱导的干扰素抗体所中和 ;其诱生剂为PHA ,来源于白细胞 ;在诱导条件上 ,佛波酯 (PMA)和白细胞介素 2 (IL 2 )能显著地促进其诱生 ,这些特性与人类和高等脊椎动物中报道的γ 干扰素相符 。

鸡培养细胞γ-干扰素诱生条件的优化

目的:探讨鸡γ-干扰素(IFN-γ)的最佳诱生条件。方法:采用夹心ELISA对培养的不同种类细胞在不同诱生剂作用下IFN-γ的分泌水平进行了检测,并对影响IFN-γ产量的条件进行了优化。结果:在ConA、PHA、ARV三种诱生剂中,ARV诱生能力最强,ConA其次,PHA最弱;其最佳诱生剂量分别为:ARV105TCID50/mL,ConA30μg/mL,PHA1.5μg/mL。鸡脾淋巴细胞、外周血白细胞(PBL)和鸡胚成纤维细胞(CEF)在同种诱生剂作用下,脾淋巴细胞IFN-γ分泌量最高,为47.65±3.26pg/mL。各种细胞最佳浓度均为3.0×106/mL。脾淋巴细胞在ConA和PHA刺激下,培养60h时产生的IFN-γ最高;而ARV诱导48hIFN-γ即可达峰值。同种IFN-γ具有启动效应。结论:确定了鸡IFN-γ的最佳诱生条件,为鸡IFN-γ定量检测奠定了基础。

甘草酸二铵注射液对α-干扰素的诱生作用

目的 :观察注射甘草酸二铵对 α-干扰素 ( α- INF)的诱生作用。方法 :采用微量细胞病变抑制法观察注射甘草酸二铵对小鼠 α- INF诱生作用。结果 :注射甘草酸二铵后最适诱生 α-干扰素时间为 2 4 h,细胞浓度以 1× 1 0 -7/m L为宜。结论 :甘草酸二铵注射液有诱生 α-干扰素的作用。

γ-干扰素诱生蛋白10与肝病关系研究进展

趋化因子γ-干扰素诱生蛋白10(IP-10)和它的受体CXCR3在肝炎的发生发展过程中起重要作用,并可能对抗病毒治疗疗效的判断提供有益的线索。IP-10可以由多种细胞分泌,如T淋巴细胞、NK细胞、内皮细胞和肝实质细胞等。在病毒性肝炎发生的过程中,IP-10通过直接或间接作用于病毒特异性T细胞和NK细胞等效应细胞,趋化它们到肝组织局部发生免疫应答,发挥抗病毒作用。IP-10的分泌同时也会促进病毒性肝炎发展成为肝纤维化、肝硬化。在抗病毒药物治疗的患者中,血清基线IP-10水平与治疗后病毒DNA载量以及抗原滴度呈负相关关系,对于抗病毒药物治疗后免疫应答反应起了一定的预测作用。IP-10在肝病的发生发展过程中的具体作用机制还需要更深入的研究。

干扰素-γ基因+874位点及肿瘤坏死因子-α基因-238位点单核苷酸多态性与HBV宫内感染相关性研究

目的:研究IFN-γ+874位点T/A以及TNF-α-238位点G/A的单核苷酸多态性与HBV宫内感染的相关性。方法:采集HBV标记物单项或多项阳性孕妇的外周血,提取基因组DNA,根据新生儿是否感染HBV将孕妇分为宫内感染组和对照组。利用等位基因特异性PCR检测IFN-γ+874位点等位基因型,利用PCR-RFLP方法检测TNF-α-238位点等位基因型。结果:等位基因特异性PCR可以准确判断IFN-γ+874位点等位基因型,对照组IFN-γ+874位点等位基因频率A为0.562,T为0.438,而宫内感染组A为0.738,T为0.262,两组之间的差异具有统计学意义(χ2=4.38,P=0.036)。TNF-α-238位点等位基因型的检测可以使用PCR-RFLP方法,对照组TNF-α-238位点等位基因频率A为0.146,G为0.854,宫内感染组A为0.262,G为0.738,两组之间的差异无统计学意义(χ2=3.26,P=0.071)。结论:IFN-γ+874位点T/A等位基因与HBV宫内感染具有一定相关性,T等位基因对胎儿HBV宫内感染具有防护作用。TNF-α-238位点G/A等位基因型与HBV宫内感染的关系尚不明确。

人白细胞γ-干扰素诱生条件的探讨

本文报告了人白细胞γ-干扰素的诱生剂和诱生条件,结果表明:白细胞悬浮于ConA, RPMI 1640(或Eagles),维生素C和Hepes溶液中,置于37℃ 72小时后,可得到效价较高和稳定的粗制γ干扰素.

Ⅰ型干扰素诱生机理的研究进展

干扰素（Interferon,IFN）是1957年Isaaes和Lindenmann研究流感病毒干扰现象时发现的一种细胞因子,它可以干扰病毒的复制。IFN具有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生物活性,已成为免疫学、

肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ多态性与婴儿巨细胞病毒肝炎的关系

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因+238位点和+308位点G/A及干扰素-γ(TFN-γ)+874位点A/T单核苷酸多态性与婴儿巨细胞病毒(CMV)肝炎的关系。方法对CMV肝炎患儿87例和同期入院非CMV肝炎患儿89例,应用ABIPrism7700高通量荧光PCR系统进行测定TNF-α基因+238和+308及TFN-γ+874位点单核苷酸多态性。结果婴儿CMV肝炎患儿TNF-α基因+238和+308位点与对照组比较无显著性差异。IFN-γ+874位点在婴儿CMV肝炎患儿中AA型64例,AT型20例,TT型3例;对照组AA型45例,AT型26例,TT型18例,两组基因型和A/T等位基因频率分布存在显著差异(P=0.001,P<0.001)。结论IFN-γ单核苷酸多态性与婴儿CMV肝炎的易感性有一定的相关性;TNF-α+238和+308单核苷酸多态性与CMV肝炎易感性可能无关。

病毒体外诱导草鱼白细胞产生干扰素的研究

本文在草鱼白细胞分离、纯化的基础上 ,用病毒体外诱生出一种抗病毒因子 ,经理化和生物学性质鉴定表明 ,该因子是一种干扰素 .其特性与病毒体内诱导草鱼产生的干扰素相一致且具有相同的抗原性 ,表明两者是同一种干扰素 .提示白细胞是鱼体内产生干扰素的主要细胞 .

黄芩苷对肝脏缺血再灌注损伤大鼠诱生型一氧化氮合酶、核转录因子和Caspase-3表达的影响

目的观察黄芩苷对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝组织形态、肝细胞凋亡、诱生型一氧化氮合酶(i NOS)和核因子(NF)-κB m RNA表达及Caspase-3蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法采用Pringle's法建立大鼠肝脏缺血再灌注模型。实验大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芩苷组,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,黄芩苷组给予黄芩苷灌胃。观察大鼠肝脏组织病理形态,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数,RT-PCR检测肝组织i NOS、NF-κB m RNA表达,Western blot检测Caspase-3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组i NOS和NF-κB m RNA表达、Caspase-3蛋白表达水平及肝细胞凋亡指数升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄芩苷组i NOS和NF-κB m RNA表达、Caspase-3蛋白表达水平及肝细胞凋亡指数下降(P<0.05),肝损害明显改善。结论黄芩苷通过下调肝组织i NOS和NF-κB的表达、抑制Caspase-3介导的细胞凋亡,对缺血再灌注损伤大鼠肝脏发挥保护作用。

体外单核巨噬细胞诱生IFN-α的因素分析

观察了Ｍ－ＣＳＦ预处理、ＩＦＮ－γ预处理、长程培养及新城疫病毒（ｎｅｗ－ｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）刺激４个因素对正常人外周血单核细胞体外产生ＩＦＮ－α水平的影响，采用生物活性法检测ＩＦＮ－α。结果表明：单独使用Ｍ－ＣＳＦ不能诱生ＩＦＮ－α；单独使用ＩＦＮ－γ或单独使用ＮＤＶ均只诱生较低水平ＩＦＮ－α，只有Ｍ－ＣＳＦ＋ＩＦＮ－γ＋ＮＤＶ或ＩＦＮ－γ＋ＮＤＶ联合使用方可诱生较高水平的ＩＦＮ－α，并且发现Ｍο、－Ｍφ长程培养也是向高产发展的一个重要因素。结论：人血Ｍο、－Ｍφ在适当体外培养条件下。

干扰素联合更昔洛韦治疗儿童传染性单核细胞增多症的疗效及对患儿血清学指标的影响

目的 探讨重组干扰素α-2b联合更昔洛韦在传染性单核细胞增多症患儿中的应用效果,以及对患儿肝功能及血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平的影响。方法 选取2019年1月至2021年12月淮安市洪泽区妇幼保健院收治的60例传染性单核细胞增多症患儿,按随机数字表法分为两组,各30例。两组均行保肝、营养心肌、退热等对症处理,对照组患儿在对症处理的基础上联合更昔洛韦注射液治疗,观察组患儿在对照组的基础上给予重组人干扰素α-2b治疗,均给予为期10 d的治疗。比较两组患儿临床疗效及临床症状改善时间,治疗前后肝功能指标[天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总蛋白]及血清IL-4、IL-5、CK、CK-MB水平。结果 与对照组比,观察组患儿临床总有效率升高,肌酶恢复正常时间、淋巴结肿大消退时间、退热时间、肝脾回缩时间、咽扁桃体炎消失时间、异型细胞比率恢复正常时间均缩短;治疗后两组患儿血清AST、ALT及IL-4、IL-5、CK、CK-MB水平与治疗前比均降低,且组间对比,观察组降低幅度更大;两组患儿血清总蛋白水平均升高,且组间对比,观察组升高幅度更大(均P<0.05)。结论 干扰素联合更昔洛韦治疗儿童传染性单核细胞增多症可有效缩短患儿临床症状的改善时间,促进肝功能改善,减轻患儿的炎症反应,改善心肌酶谱,临床效果显著。