RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响

目的研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断(siRNA)对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48h、72h最明显,增生抑制率分别为53.2%和51.5%;S期细胞比值由(56.1±4.7)%降至(17.8±3.2)%,细胞阻滞在G0/G1期。结论针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病治疗提供新的途径。

保罗样激酶基因沉默体外抑制胶质瘤细胞侵袭与生长

目的观察保罗样激酶1基因(plk1)沉默对胶质瘤细胞株-H4体外生长的抑制作用,探讨plk1基因作为胶质瘤治疗靶点的可行性。方法化学合成小片断干扰RNA(siRNA)抑制plk1基因的表达,Western blot检测plk1蛋白质的表达变化,流式细胞仪检测H4细胞周期分布及凋亡程度的变化,体外侵袭实验检测H4细胞侵袭能力的变化,MTT法检测H4细胞增殖速度的变化。结果经siRNA作用48h后,plk1蛋白质水平明显降低;较多的H4细胞聚集于G2/M期附近(P<0.05);细胞凋亡明显上升(P<0.05);细胞体外侵袭能力下降(P<0.05);增殖速度明显缓于对照组(P< 0.05)。结论靶向plk1的siRNA可在体外抑制胶质瘤细胞H4的侵袭与增殖,plk1有可能成为新的潜在胶质瘤治疗靶点。

抑制plk1表达导致胃癌细胞cyclinB／cdc2复合体活性升高

目的观察抑制polo样激酶基因1(plkl)表达对胃癌细胞株MKN45的cyclinB／cde2复合体(MPF)及细胞周期的影响。方法化学合成小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞plkl基因的表达；实时定量PCR及Western印迹检测干扰前后plkl mRNA及蛋白质表达的变化；倒置显微镜观察细胞形态的变化；流式细胞仪检测MKN45细胞周期分布的变化；Western印迹检测cyclinB与cdc2表达水平的变化,激酶活性分析检测cdc2激酶活性变化。结果经靶向plkl的siRNA作用后,plkl siRNA mRNA及蛋白质表达明显下降；较多MKN45细胞变圆及呈现G_2期细胞DNA含量(P<0．05)；cyclinB平均表达水平在48及72h,较对照siRNA组升高了82．38％和32．89％(P<0．05),cdc2表达水平无明显变化,但其平均活性在48及72h较对照siRNA组升高了29．34％和80．33％(P<0．05)。结论 PLKl与其下游的cyclinB／cdc2复合体活性之间在MKN45细胞有丝分裂的前后期可能存在着不同的调控机制,PLKl在MKN45细胞有丝分裂的启动及退出方面均发挥关键作用。