SCF/c-Kit信号通路通过抑制肥大细胞增殖调控影响病理性瘢痕形成的研究

目的探讨配体干细胞因子/c-KIT原癌基因(SCF/c-kit)对肥大细胞增殖的影响,并进一步探讨其在病理性瘢痕形成中的作用。方法收集病理性瘢痕组织和正常组织,通过甲苯胺蓝染色法检测组织中肥大细胞数目,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测患者血清中干细胞因子SCF的表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测组织中SCF和其受体c-Kit的表达。建立病理性瘢痕裸鼠模型,16 d后将造模成功的裸鼠随机分为模型+沉默阴性对照(si-NC)组和模型+si-SCF组,分别于裸鼠瘢痕内注射si-NC、si-SCF质粒和脂质体混合液0.25 mL,另设对照组,注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。7 d后收集标本,游标卡尺测量裸鼠瘢痕体积大小,V.G染色检测瘢痕组织Ⅰ型胶原含量,甲苯胺蓝染色评估瘢痕组织肥大细胞数目,Western blotting检测组织中SCF和c-Kit的表达。结果病理性瘢痕患者的瘢痕组织出现大量肥大细胞,同时在病理性瘢痕患者血清中发现SCF高表达,而且在其瘢痕组织中SCF和c-Kit蛋白表达也增多;在病理性瘢痕模型裸鼠体内沉默SCF,抑制了c-Kit的表达,减小了模型裸鼠的瘢痕体积,降低了瘢痕组织中Ⅰ型胶原含量,还抑制了肥大细胞增殖。结论SCF/c-Kit信号通路可能是通过抑制肥大细胞增殖,来调控病理性瘢痕的形成。SCF/c-Kit的表达失控可能也是病理性瘢痕形成的一个重要诱因。

大鼠慢传输型便秘发病的Cajal间质细胞特异性蛋白c-kit-SCF调控机制研究

目的分析大鼠慢传输型便秘发病的Cajal间质细胞特异性蛋白c-kit的调控机制。方法成年雄性SD大鼠皮下注射吗啡25 mg/kg,共45 d,诱导大鼠慢传输型便秘发病模型。分析便秘大鼠日均粪便粒数和质量及首粒黑便排出时间,Real-time PCR及Western blot法检测便秘大鼠SCF及c-kit蛋白表达水平,酶联免疫吸附测定法分析便秘大鼠体内炎症因子水平变化。结果便秘组大鼠日均粪便粒数明显降低,便粒质量明显升高,首粒黑便排出时间明显延长,且与对照组相比存在显著差异(P<0.05);便秘组大鼠SCF及c-kitmRNA及蛋白表达水平明显降低,炎症因子IL-1β、IL-2及IL-10水平明显升高,且与对照组相比存在显著差异(P<0.05)。结论 SCF及c-kit蛋白调控了大鼠慢传输型便秘发病过程,且此过程与炎症反应有关。