小剂量环磷酰胺治疗尖锐湿疣对角质形成细胞的干细胞性及分化影响

目的研究小剂量环磷酰胺(CTX)治疗尖锐湿疣(CA)对表皮角质形成细胞(KCs)的干细胞性及分化的影响。方法20例初发CA患者作为对照组(CA组);8例小剂量CTX治疗CA患者为治疗组(CTX组),10例正常包皮环切患者为空白对照组(NS组)。采用免疫组化方法,对比研究表皮干细胞标志物P63和整合素α6(ITGA6)以及成熟KCs标志物K10在3组之间的表达差异。结果P63及ITGA6表达:NS组中主要表达于基底层;CA组表达量较NS组增多(P<0.01),而且表达部位不仅局限于基底层,在靠近基底层的棘层中也存在较多阳性表达;CTX组表达较CA组明显减少(P<0.01),阳性表达位置主要在基底层,而靠近基底层的棘层中仅有少量表达。K10表达:NS组表达于基底层以上的表皮结构中,基底层表达为阴性;CA组表达量较NS组明显减少(P<0.01),基底层不表达;CTX组中表达量较CA组明显增加(P<0.01)。结论小剂量CTX疗法治疗后能使CA疣体中KCs的干细胞性减弱,而细胞终末分化能力增强。

干细胞性标记：关于恶性肿瘤的“神奇标记物”

患者肿瘤细胞基因转录图谱的测定在肿瘤治疗研究中无疑是激励人心的一大进步。由此可使我们能够预测肿瘤患者对不同力度、不同治疗方法可获得的疗效，从而使实现肿瘤患者个体化治疗成为可能。但要将这种可能转化为现实并使患者从中受益，仍具一定的挑战性。基于“具有干细胞样性质的肿瘤预后较差”这一假说，Glinsky及其同事尝试以人鼠科动物为模型对一种可能的干细胞mRNA标记物进行了检测和鉴定。

人尿源性干细胞的分离培养及诱导分化为平滑肌细胞

背景:传统尿路修复重建手段受限于供体短缺、并发症多以及生理功能恢复不理想等问题,组织工程策略为此领域提供了新方向。鉴于尿路主要由肌性组织构成,其中关键在于发掘适合的种子细胞并高效诱导分化为平滑肌细胞,但关于不同平滑肌细胞诱导方案效能的对比研究仍较为匮乏。目的:旨在分离、培养及鉴定人尿源性干细胞,并比较两种不同成平滑肌诱导方案的效果。方法:采用多次离心法从11份健康成人志愿者尿液中分离提取尿源性干细胞,使用流式细胞仪进行表面标志物的鉴定,通过成骨、成脂诱导分化来验证尿源性干细胞的多向分化潜能。尿源性干细胞分别在含转化生长因子β1以及转化生长因子β1联合血小板衍生生长因子的成平滑肌细胞诱导分化培养基中诱导分化14 d,采用免疫荧光染色和Western blot检测平滑肌特异性蛋白(α-SMA、SM22)的表达差异。结果与结论:①成功从8份健康人尿液中分离出尿源性干细胞,细胞呈“米粒”样,具有很好的分裂增殖能力;②尿源性干细胞高表达间充质干细胞表面标志物CD73、CD90和CD44,极低表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45,不表达CD19、CD105和HLA-DR;③经成骨和成脂诱导分化后,可见明显的钙结节和脂滴形成,茜素红染色和油红O染色结果呈阳性;④成平滑肌诱导培养14 d,免疫荧光染色显示转化生长因子β1/血小板衍生生长因子组尿源性干细胞成平滑肌诱导分化率显著高于转化生长因子β1组(P<0.005);⑤成平滑肌诱导培养14 d,Western blot检测显示转化生长因子β1/血小板衍生生长因子组α-SMA和SM22蛋白表达量显著高于转化生长因子β1组(P<0.005)。结果表明:尿源性干细胞可以通过多次离心法无创分离获取;相较于单纯转化生长因子β1,转化生长因子β1/血小板衍生生长因子联合应用能显著提高尿源性干细胞诱导分化为平滑肌细胞的效率。

部分氧化的海藻酸钠凝胶联合肌源性干细胞改善老龄心肌梗死大鼠的心脏功能

目的探究部分氧化的海藻酸钠凝胶联合肌源性干细胞心肌内注射对老龄心肌梗死大鼠心脏功能的改善作用。方法通过结扎冠状动脉的方法构建老龄心肌梗死大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为生理盐水对照组、海藻酸钠组、肌源性干细胞组、海藻酸钠联合肌源性干细胞组(联合组),各30只,各组于心肌梗死区分别注射等量的相应材料。在手术8周后通过超声心动图观察心脏结构和功能情况,通过组织学方法观察心室重构的差异,并检测心室切片的血管生成及胶原分泌情况。结果联合组超声心动图指标、组织学指标、单位面积血管密度及胶原阳性面积百分比均优于其他组(P<0.05);海藻酸钠组及肌源性干细胞组大鼠的超声心动图指标、组织学指标、单位面积血管密度及胶原阳性面积百分比均优于生理盐水对照组(P<0.05),海藻酸钠组及肌源性干细胞组的数据组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论海藻酸钠联合肌源性干细胞心肌内注射能够显著改善老龄心肌梗死大鼠的心脏功能,其效果优于海藻酸钠或肌源性干细胞的单独注射。

血小板衍生生长因子DD对人肌腱源性干细胞增殖和多向分化能力的影响

背景:慢性肩袖损伤常伴有肌腱退变和肌腱干细胞功能受损,血小板衍生生长因子DD作为一种重要的细胞因子,对干细胞增殖和分化具有调节作用。目的:探讨血小板衍生生长因子DD对人慢性肩袖损伤组织来源肌腱干细胞增殖和多向分化能力的影响。方法:获取人体慢性肩袖损伤组织标本并体外分离培养肌腱干细胞,免疫荧光染色观察细胞的骨架形态,流式检测肌腱干细胞表型表达。将肌腱干细胞分成2组:对照组不进行任何干预,血小板衍生生长因子DD组以5μg/mL血小板衍生生长因子DD干预,通过细胞增殖实验和三系分化实验评估血小板衍生生长因子DD对肌腱干细胞增殖和多向分化能力的影响。结果与结论:①血小板衍生生长因子DD组EdU阳性细胞数量较对照组显著增加(P<0.05),且肌腱干细胞更早进入快速增殖期,细胞呈对数增长;②血小板衍生生长因子DD组油红O染色、阿利新蓝染色、茜素红染色阳性面积较对照组明显增大(P<0.05);③上述结果表明,血小板衍生生长因子DD显著促进肌腱干细胞的增殖和成脂、成骨、成软骨分化。

牙源性干细胞促血管化与组织再生的研究进展

牙源性干细胞具有间充质干细胞特性,通过与内皮细胞相互作用或分泌多种血管生成相关细胞因子促进血管再生。目前已分离并鉴定出的牙源性干细胞主要包括牙髓干细胞、脱落乳牙干细胞、牙周膜干细胞、根尖牙乳头干细胞、牙龈间充质干细胞和牙囊干细胞。本文通过整理分析近年文献资料,对上述牙源性干细胞促血管生成与组织再生的相关研究进展进行综述。

间充质干细胞源性外泌体在创伤性脑损伤治疗中的研究进展

间充质干细胞是具有自我更新和分化成多种类型细胞潜能的多能干细胞,其分泌的含有遗传信息的外泌体以旁分泌方式安全、高效地促进组织器官的发育、修复和再生,可避免直接移植干细胞所带来的风险。在创伤性脑损伤的治疗中,间充质干细胞源性外泌体可穿过血-脑脊液屏障,促进神经修复和再生,极大地改善患者预后。本文就间充质干细胞源性外泌体的结构、功能及其在创伤性脑损伤治疗中的研究进展作一综述,为间充质干细胞源性外泌体的临床应用提供依据。

尿源性干细胞的提取及鉴定

目的:对人尿源性干细胞(hUSCs)进行分离提取和鉴定,为干细胞的应用打下基础。方法:无菌操作下收集2例年龄20~40岁的健康成人约200 mL新鲜中段尿,离心法初步提取尿液细胞,用干细胞培养液筛选培养hUSC,细胞传代至第3代时冻存,流式细胞技术鉴定第4代hUSCs表面标志物,用成脂试验检测干细胞的诱导分化能力。结果:2例均提取成功,在培养第7天时成功提取出hUSCs,并体外培养形成集落,流式细胞术鉴定干细胞表面抗原CD44、CD105和CD73呈高表达,CD45和HLA-DR呈低表达,表明具有间充质干细胞的特性,成脂试验检测干细胞具有诱导分化能力。结论:运用特殊的干细胞培养基成功培养出hUSCs并保存,可建立成熟稳定的培养技术和体系。

转移性胃癌干细胞单抗6H6靶向治疗胃癌的实验研究

目的:研究一株识别转移性胃癌干细胞的单克隆抗体6H6的体外功能实验,为靶向治疗胃癌提供候选抗体药物。方法:流式细胞术分选胃癌细胞系SNU-16中CD44(+)细胞,双色细胞免疫荧光染色检测CD44与6H6单抗识别的抗原蛋白在SNU-16细胞中的表达。无血清悬浮培养检测流式分选SNU-16中CD44(+)细胞的自我更新能力及6H6单抗对CD44(+)细胞自我更新能力的影响。Transwell小室法检测SNU-16中CD44(+)细胞的侵袭能力及6H6单抗对CD44(+)细胞侵袭能力的影响,CCK8法检测单抗6H6对SNU-16中CD44(+)细胞顺铂耐药性的影响。裸鼠体内治疗实验分析6H6单抗联合顺铂对SNU-16移植瘤生长的抑制作用。结果:免疫荧光显示单抗6H6识别的抗原能与CD44在SNU-16细胞上共定位。与CD44(-)细胞相比较,成球实验和Transwell实验证明SNU-16中CD44(+)细胞具有更强的自我更新和侵袭能力。抗体的体外功能研究发现,单抗6H6能显著抑制SNU-16中CD44(+)细胞的成球率和侵袭率,抑制率分别达35.8%(P<0.01)和31.6%(P<0.01)。单抗6H6能够有效降低SNU-16中CD44(+)细胞顺铂耐药性,实验组与对照组的IC 50分别为0.76μg/mL和1.98μg/mL。此外,体内治疗实验发现单抗6H6可明显抑制SNU-16移植瘤的生长,当高浓度(40 mg/kg)时,其抑制作用高达81.9%,抗体抑制作用存在剂量依赖关系。结论:单抗6H6体外能够显著抑制转移性胃癌干细胞的干性特征,为胃癌靶向治疗提供有价值的候选靶向药物。

抑制趋化因子受体7表达对体外低氧状态下人尿源性干细胞的生物学影响

目的探讨抑制趋化因子受体7(CXCR7)的表达对低氧状态下人尿源性干细胞(USCs)增殖、迁移、分化和线粒体功能的影响。方法低氧组3%O2处理48 h,采用CXCR7 siRNA(siCXCR7)抑制CXCR7的表达,Real-time PCR和Western blotting检测CXCR7的表达;集落形成实验和细胞生长曲线检测细胞增殖能力;划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力;碱性磷酸酶、茜素红、油红O、阿利新蓝染色检测细胞多向分化能力;JC-1荧光探针、三磷酸腺苷(ATP)及活性氧(ROS)水平检测评估线粒体功能。结果低氧组USCs中CXCR7的表达显著上调,USCs的增殖、迁移和集落形成能力增强,抑制CXCR7表达可抑制低氧对USCs的增殖、迁移和集落形成的作用,对细胞分化没有影响。低氧处理提高了线粒体膜电位和ATP水平,降低了活性氧的产生,而抑制CXCR7可降低线粒体膜电位和ATP的产生。结论低氧可能通过CXCR7信号通路增强USCs的线粒体功能,从而促进细胞的增殖和迁移能力。

牙源性间充质干细胞外泌体在牙髓再生中的作用机制

牙髓再生是一种基于组织工程治疗牙髓坏死的新策略,应用种子细胞结合支架和生长因子,实现牙本质、血管和神经的新生。外泌体是一类直径约为30~150 nm的细胞外囊泡,在调控细胞间信息和物质传递中发挥重要作用。2016年以来,牙源性间充质干细胞分泌的外泌体因其在牙髓组织再生领域展现出的巨大潜力而备受瞩目。本文介绍了牙源性间充质干细胞来源外泌体的种类和培养环境,并对牙源性间充质干细胞外泌体调控细胞成牙本质向分化、血管生成、神经再生和成骨向分化的作用和机制作一综述。

牙源性干细胞在牙周组织再生中的作用

牙周炎,又称破坏性牙周病,其病因在于牙菌斑中的细菌对牙周组织的侵袭,从而引发一种慢性炎症反应。这一病理过程可能导致牙周支持组织(包括牙根、牙周膜、牙槽骨和牙骨质)遭受破坏,进一步引发牙周袋的形成,并伴随着炎症的加重、附着丧失以及牙槽骨的吸收。尽管通过规范的基础治疗可以有效地将炎症控制在最低水平,并通过手术治疗清除病变组织,但牙周组织的修复与再生仍然是当前治疗的难点所在。20世纪80年代,提出了引导性组织再生术,但引导性组织再生术治疗的把握性及预期性不佳。临床还常用骨粉植入促进牙槽骨生成,虽然可以修复牙周炎造成的牙槽骨缺损,但自体骨取材创伤大且再生效果不易预测;异体骨很难兼具骨引导、骨诱导和植入安全性。因此,牙周组织的再生在临床中面临着巨大的挑战。目前,干细胞因其卓越的自我更新与分化潜能,在牙周疾病的治疗中得到了广泛应用。在特定条件下,干细胞能够分化为成骨细胞,与生物材料和生长因子相结合,共同促进牙周组织的再生。此外,自体细胞移植不仅具有较高的安全性,而且在实际操作中展现出了显著的可行性。这种治疗策略为牙周疾病的康复提供了新的可能性。本文就牙源性间充质干细胞(DSCs)在牙周组织再生中的应用展开综述,聚焦于DSCs在牙周组织再生中的研究进展,总结DSCs的供体来源、如何高效保存及应用效率的研究现状及局限,为DSCs的前期研究和精准有效的临床应用提供思路。

牙源性间充质干细胞外泌体在组织再生中的研究进展

再生医学致力于研究如何促进创伤后组织再生和功能重建,主要利用干细胞疗法和组织工程技术来维持、修复、再生或改善受损组织和器官的功能。间充质干细胞是一种具有多向分化和再生能力的祖细胞,被广泛应用于再生医学和组织工程领域。特别是牙源性间充质干细胞,由于获取方便且不存在复杂的伦理问题,已成为研究的热点。牙源性间充质干细胞具有多种分化潜能,被视为组织再生工程的种子细胞,广泛应用于组织工程和再生医学领域。此外,间充质干细胞可通过旁分泌途径促进受损组织再生修复,外泌体是其主要分泌物之一。越来越多的证据表明,牙源性间充质干细胞外泌体在多种疾病和损伤模型中能促进组织再生。

尿源性干细胞及其外泌体对各系统组织损伤修复的研究进展

目的:探究尿源性干细胞(USCs)在泌尿系统损伤与对其它系统的影响作用及其在组织工程方面的应用潜力。方法:以“尿源性干细胞”为关键词进行文献搜索,分析总结其生物学特性,包括增值能力和多向分化潜能以及对损伤修复的机制,评估USCs在泌尿系统损伤修复和其他领域的应用可能性。结果:尿源性干细胞具有间充质干细胞的生物学特性,并具有简单取材与较强的增值和多向分化能力。研究显示USCs可能起源于肾脏,可以通过释放外泌体与多种细胞因子等对泌尿系统损伤的进行修复,对再生医学与组织工程的研究提供了理想的“种子细胞”。结论:国内外大量研究表明尿源性干细胞的研究前景广阔,其在多个领域的应用潜力巨大,特别是在泌尿系统损伤修复方面,USCs显示出重要的研究价值和临床应用的潜力。Objective: To investigate the effects of urogenic stem cells (USCs) on urinary system injury and other systems and their potential application in tissue engineering. Methods: Using “urogenic stem cells” as the keyword, the literature search was conducted to analyze and summarize their biological characteristics, including the value-added ability, multi-differentiation potential and the mechanism of injury repair, so as to evaluate the application possibility of USCs in the repair of urinary system injury and other fields. Results: The urine-derived stem cells had the characteristics of mesenchymal stem cells, simple sampling and strong ability of multiplication and multidirectional differentiation. Studies have shown that USCs may originate in the kidney and can repair the damage of the urinary system by releasing exosomes and a variety of cytokines, providing an ideal “seed cell” for the research of regenerative medicine and tissue engineering. Conclusion: A large number of studies at home and abroad show that the research prospect of urogenic stem cells is broad, and their application potential in many fields is great. Especially in the repair of urinary system injury, USCs shows important research value and clinical application potential.

牙源性间充质干细胞外泌体促进口腔组织再生的研究进展

干细胞来源的外泌体因具有易获取、“无细胞治疗”介导特性以及较强的促进组织修复与再生潜力而成为近年的研究热点。本文就牙源性间充质干细胞来源的外泌体应用于口腔组织再生方面的研究进展进行综述,包含其促进牙髓牙本质、牙周组织再生等功能。牙源性间充质干细胞外泌体有望克服干细胞临床应用的局限,为未来治疗相关口腔疾病提供新的解决思路。

组蛋白去乙酰化酶及其抑制剂在牙源性干细胞成骨和成牙本质分化中的研究进展

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)可使组蛋白去乙酰化,与DNA结合更加紧密,从而发挥抑制基因转录的作用。相反,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis)有利于染色质松弛,使各种转录因子与DNA特异性结合,发挥激活转录基因的作用。牙源性干细胞(DSCs)是人成体干细胞,此类细胞具有取材时损伤小和免疫排斥反应低等特点,在成骨、成牙本质等分化过程中是极其重要的种子细胞。大量研究表明,HDACs及HDACis两者在细胞分裂分化、信号转导、调控细胞炎症等多种生命过程中共同发挥作用。本文对组蛋白修饰中HDACs以及HDACis在DSCs成骨和成牙本质分化中的研究进展进行综述,旨在为研究HDACs及HDACis之间的相互作用,并有望对DSCs治疗牙齿及骨损伤的临床应用提供参考。

甘草干姜汤对人肾癌细胞及人尿源性干细胞的作用

目的:探讨甘草干姜汤(LDGD)对体外培养的人肾癌769-P细胞和人尿源性干细胞(hUSCs)活力和凋亡的作用。方法:常温离心法从人的新鲜尿液中分离培养hUSCs,观察hUSCs的生长状态并采用MTT法测定其活力;流式细胞术鉴定hUSCs表面标志物的表达。MTT法检测2.5~40 mg/mL LDGD作用769-P细胞和hUSCs 24~72 h后的活力,观察其细胞形态的变化;流式细胞术检测10 mg/mL LDGD诱导769-P细胞和hUSCs凋亡的情况,计算其凋亡率。结果:通过常温离心法获得细胞形态良好、生长活性较高的hUSCs,hUSCs表达间充质干细胞表面标志物CD44和CD90,不表达内皮细胞表面标志物CD31和造血干细胞表面标志物CD34。5~10 mg/mL LDGD作用24~72 h可抑制769-P细胞活力并呈时间和剂量-效应关系,而对hUSCs活力有促进作用。10 mg/mL LDGD作用48 h后,倒置显微镜下可见769-P细胞发生明显皱缩,体积缩小,细胞折光率下降,而hUSCs形态无明显变化。10 mg/mL LDGD作用769-P细胞48 h后的凋亡率为(11.93±0.51)%,相较对照组显著升高(P<0.01),而作用hUSCs后的凋亡率为(0.01±0.10)%,与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论:在本实验条件下,LDGD可抑制体外培养的人肾癌细胞活力,诱导其凋亡;可促进hUSCs的细胞活力,且无明显诱导细胞凋亡作用。LDGD对两种细胞的作用存在明显差异。

牙源性间充质干细胞来源的外泌体在牙周免疫调节的研究进展

外泌体(exosomes,EXOs)是细胞间通讯的重要介质,其内含有多种物质,包括miRNA、mRNA、DNA和蛋白质等,可通过多种方式作用于靶细胞。外泌体作为“无细胞治疗”手段,具有广阔的医学应用前景。EXOs的内含物随供体细胞及其状态的变化而变化,因此来自不同类型细胞的EXOs可能表现出不同的生物学效应。牙源性间充质干细胞来源的EXOs因其在组织再生医学和免疫调节领域表现出的生物学特性而受到越来越多的关注。在牙周免疫调节过程中促炎型(M1型)/抗炎型(M2型)巨噬细胞以及辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)之间的平衡转化是研究热点。现有研究表明,牙源性间充质干细胞来源的EXOs能够促进巨噬细胞和T细胞的转化并且这种功能可能取决于周围微环境以及干细胞的组织来源等因素,如牙髓间充质干细胞来源的EXOs中的miR-1246通过抑制NF-κB P65从而促进M2型巨噬细胞的极化;根尖牙乳头间充质干细胞来源的EXOs通过促进DNA去甲基化酶Tet2(Tet methylcytosine dioxygenase 2,Tet2)介导的FoxP3的去甲基化,维持FoxP3的稳定表达,促进Treg转化,从而缓解牙周炎局部炎症。此外炎症相关因子可以影响牙源性间充质干细胞来源的EXOs的免疫调节活性,如脂多糖预处理的牙囊间充质干细胞来源的EXOs可通过ROS/JNK信号通路降低RANKL/OPG比例,并通过ROS/ERK信号通路促进巨噬细胞向M2型极化;肿瘤坏死因子-α和干扰素-α两种促炎细胞因子预处理的牙龈间充质干细胞来源的EXOs通过高表达CD73和CD5L从而促进M2型巨噬细胞的极化;牙周炎患者牙周膜间充质干细胞来源的EXOs促进巨噬细胞向M1表型极化。本文综述牙源性间充质干细胞来源的EXOs在牙周免疫调节过程中对两种细胞平衡转化影响的研究进展,为EXOs治疗牙周炎提供参考。

牙源性干细胞在周围神经损伤再生中的研究进展

施万细胞在周围神经损伤(PNI)发生后的华勒氏变性中表现出很强的可塑性,激活成为修复型施万细胞,进行清除髓鞘碎片和引导轴突再生等重要修复过程。干细胞因其具有自我更新、多能分化能力和免疫系统调节等特性,故使用干细胞诱导定向分化为该种修复型施万细胞的治疗策略表现出极大的潜力。而牙源性干细胞(DSCs)较其余干细胞有着易于获取、微创性和可忽略的伦理问题等明显优势,本文就近年来各类型牙源性干细胞在PNI再生过程中表现出的定向分化、分泌营养因子、基因调节等作用展开综述。

多肽水凝胶负载人尿源性干细胞移植治疗创伤性脑损伤大鼠的可行性分析

目的:分析多肽水凝胶负载人尿源性干细胞移植治疗创伤性脑损伤大鼠的可行性。方法:选取2022年1月—2024年1月南昌大学第一附属医院神经外科购入的40只Wistar大鼠,制备成创伤性脑损伤大鼠,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各20只。对照组进行人尿源性干细胞移植治疗,观察组进行多肽水凝胶负载人尿源性干细胞移植治疗。比较两组移植细胞脑内存活和分化能力、移植细胞巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)表达水平。结果:观察组增强绿色荧光蛋白与红色荧光蛋白体积大于对照组。观察组Nestin、GFAP、β-tubulinⅢ表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论:多肽水凝胶负载人尿源性干细胞移植治疗创伤性脑损伤大鼠的效果更佳,且人尿源性干细胞便于采集、定向移植优势明显。