成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定

目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁培养U87 SLCs通过在培养表面包被Matrigel基质胶实现;通过RT-qPCR和Western blot检测培养物的干性标志物mRNA和蛋白质水平;通过流式细胞测量术检测培养物中CD133+细胞的比例;通过Seahorse实时细胞代谢分析检测细胞耗氧速率的变化;通过接种动物皮下移植瘤验证细胞成瘤能力的改变。结果干细胞培养基中的U87 SLCs在1周内即会成长为典型的细胞球形态,细胞球在培养过程中会不断增大;在贴壁剂合适的浓度下,U87 SLCs可以在干细胞培养基中完好地平铺贴壁增殖;CD133、nestin、OLIG2、CD44、CD15、整合素α6(ITGA6)等干性标志物的mRNA表达水平在两种方式培养后与U87相比均显著提升(P<0.05),CD133和nestin的蛋白水平在两种方式培养后也均升高(P<0.05);U87 SLCs展现出了更高的线粒体储备呼吸能力(P<0.05);U87 SLCs能够以更少的接种细胞数形成更大的皮下肿瘤(P<0.05),U87 SLCs体内增殖更加迅速,具有更强的成瘤能力。结论U87 SLCs具有典型的干性特征,是一个良好的干性更高的肿瘤细胞模型。

干细胞样CD8^(+)T细胞在抗肿瘤免疫治疗中的地位与演进效应

以抗细胞程序性死亡-1/细胞程序性死亡-配体1(programmed cell death-1/programmed cell death-ligand 1,PD-1/PD-L1)为代表的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)治疗显现了CD8+T细胞在治疗和可能治愈恶性肿瘤方面的潜力。但仅约20%的患者对ICIs治疗获益,因此阐明CD8+T细胞在免疫微环境中的有效抗肿瘤功能,及其分子和空间的决定因素尤为重要。具有自我更新、增殖分化和杀伤肿瘤细胞能力的干细胞样CD8^(+)T细胞亚群,在介导抗肿瘤免疫效应方面扮演极为重要的角色。本文就干细胞样CD8^(+)T细胞在抗肿瘤免疫循环中的地位与演进效应进行综述。

PD1-TCF1+CD8+干细胞样记忆T细胞对肿瘤患者免疫预后及三级淋巴结构的影响

目的探讨PD1-TCF1+CD8+干细胞样记忆T细胞在肿瘤微环境中的表达及对免疫治疗预后及三级淋巴结构(TLSs)的影响。方法收集33例武汉大学人民医院接受免疫治疗的晚期胸部肿瘤患者病理组织切片,18例NSCLC及15例食管鳞癌(ESCC)。多重免疫荧光技术对PD1-TCF1+CD8+T细胞表型进行定量分析,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Pearson检验进行相关性分析。结果PD1-TCF1+CD8+T细胞的高表达与更好的无进展生存期(PFS)和免疫治疗疗效有关;在NSCLC队列中,PD1-TCF1+CD8+T细胞的高表达还与三级淋巴结构的数量(P=0.0017)及相对面积(P=0.006)显著正相关。结论在NSCLC和ESCC患者中,PD1-TCF1+CD8+干细胞样记忆T细胞的高表达可能与良好的预后及免疫治疗疗效有关,并且在NSCLC中与肿瘤微环境内TLSs的形成密切相关。

干细胞样记忆T细胞在自身免疫性疾病中的作用

干细胞样记忆T(stem cell-like memory T,T_(SCM))细胞是一种长寿的、具有持续自我更新能力及重建记忆、效应T细胞亚群的多分化潜能的记忆T细胞亚群,是记忆T细胞系统中的最小分化细胞,具有类似干细胞的生物学特征,对于维持功能性免疫至关重要。由于T_(SCM)细胞强大的免疫重建功能,它在人类的许多病理和生理过程中发挥着核心作用,在多种自身免疫性疾病的发生及发展中起重要作用。T_(SCM)细胞在自身免疫性疾病中的独特作用可能使其成为治疗多种自身免疫性疾病的潜在靶点,可在相关疾病治疗中进行有效的免疫功能重建。

肿瘤中干细胞样T细胞的调控研究进展

干细胞样记忆T细胞(T_(SCM))具有自我更新能力和分化为效应细胞的多能性。肿瘤微环境中存在的TCF1+T_(SCM)细胞直接介导了PD-1免疫检查点阻断的功能性响应,并提供长久的免疫应答以增强抗肿瘤效应。T_(SCM)细胞的形成依赖于特定的免疫生态位,其中的时空调控机制仍然有待研究。本文综述了T_(SCM)细胞形成、分化和功能维持的具体调控机制及T_(SCM)细胞在肿瘤免疫治疗中的最新研究进展,为T_(SCM)在临床中的进一步转化应用提供参考。

人脑胶质瘤组织培养的干细胞样细胞具有体外高侵袭能力

目的:分离培养人脑胶质瘤干细胞样细胞(glioma stem-like cell,GSLC),研究其体外侵袭力。方法:选取中国医科大学第一医院神经外科2008年10月至2009年1月间住院患者手术切除的脑胶质瘤组织8例,以无血清成球培养法培养胶质瘤细胞球;免疫细胞化学实验检测其CD133的表达;荧光免疫显微镜观察其分化后胶质细胞标志物GFAP和神经元标志物TU-20的表达;matrigel侵袭实验检测其侵袭力,并与原代脑胶质瘤细胞进行比较。结果:成功分离培养出人脑胶质瘤细胞球细胞,该细胞表达干细胞标志物CD133;能自我更新与增殖;诱导分化后,GFAP和TU-20均为阳性表达,提示其为GSLC。胶质瘤细胞球细胞侵袭细胞数显著多于原代胶质瘤细胞[(261.23±87.20)vs(116.08±63.88)个,P<0.01];此外,胶质瘤细胞球细胞穿过matrigel胶后可再次聚集成球状生长。结论:成功分离培养人脑胶质瘤组织中的GSLC,其体外具有较高的侵袭力,可能参与脑胶质瘤的侵袭和转移。

姜黄素对直肠癌CD133^+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响

目的探讨姜黄素对直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性的影响。方法应用免疫磁珠分选器、阳性分离柱分选出直肠癌CD133+肿瘤干细胞,随机分成姜黄素组、姜黄素联合放疗组、放疗组,应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测24、48、72 h各组细胞生长抑制情况;膜联蛋白V-异硫氨基荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染色检测细胞凋亡率。结果姜黄素组随着时间变化肿瘤细胞抑制率变化不大(P>0.05);放疗组和姜黄素联合放疗组24、48、72 h细胞生长抑制率逐渐升高(P<0.05);同期三组细胞生长抑制率均有统计学意义(P<0.05),两两比较24 h细胞生长抑制率,姜黄素组与姜黄素联合放疗组和放疗组之间差异有统计学意义(P<0.05),姜黄素联合放疗组与放疗组之间差异无统计学意义(P>0.05);48、72 h抑制率两两之间差异均有统计学意义(P<0.05);姜黄素组48 h与72 h之间细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),姜黄素联合放疗组和放疗组48 h与72 h之间细胞凋亡率之间差异具有统计学意义(P<0.05)。同期内不同组细胞凋亡率之间的差异有统计学意义(P<0.05),两两比较细胞凋亡率之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素可以增加直肠癌CD133+肿瘤干细胞样细胞群放疗敏感性,抑制肿瘤细胞生长促进细胞凋亡。

miR-1269a表达对H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响

目的研究miR-1269a表达对非小细胞肺癌H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响。方法选取非小细胞肺癌H460细胞系进行无血清悬浮培养,通过流式细胞仪筛选CD133及CD44阳性的H460干细胞样细胞。通过RT-qPCR检测miR-30a、miR-148a、miR-148b、miR-152、miR-411、miR-497、miR-598、miR-424、miR-761、miR-1269a、miR-1280及CD44、CD133 mRNA在H460干细胞样细胞内的表达水平。采用CCK-8实验、干细胞成球实验、流式细胞术及彗星实验分析miR-1269a表达对H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响。结果H460干细胞样细胞的CD133及CD44 mRNA表达水平较H460细胞明显增加,分别为H460细胞的(1.30±0.03)倍和(1.19±0.02)倍(P<0.05)。miR-1269a在H460干细胞样细胞中的表达量最高,且高于H460细胞中的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-1269a inhibitor后经X线照射处理,H460干细胞样细胞的生长抑制率(72.11%±2.45%)明显增高,其凋亡率达17.70%±0.54%,细胞内DNA双链断裂也明显增加,在2 Gy的X线辐射处理后DNA尾矩为转染前的(1.19±0.02)倍,即转染miR-1269a inhibitor明显增加了H460干细胞样细胞对放疗的敏感性(P<0.05)。转染pcDNA3.1-SOX7后经X线照射处理对H460干细胞样细胞的作用与转染miR-1269a inhibitor相近。转染miR-1269a mimics可逆转pcDNA3.1-SOX7对H460干细胞样细胞恶性生物学行为的抑制作用。结论抑制miR-1269a可能增强非小细胞肺癌的放疗敏感性,其机制可能是通过上调SOX7的表达所致。

CD133^+卵巢癌干细胞样细胞在血管内皮细胞中的分化

背景:大量研究证实,新生血管形成在肿瘤的生长、浸润以及转移过程中发挥重要作用。目的:探讨CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的特点。方法:通过无血清培养方法从卵巢癌A2780细胞株中成功诱导出CD133+卵巢癌干细胞样细胞,在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内,观察不同时间点CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构能力。通过裸鼠皮下移植实验,免疫荧光法观察CD133+卵巢癌干细胞样细胞在卵巢癌血管新生中的作用。结果与结论:CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞(阳性对照)在未铺Matrigel基质胶上并不能形成相应的管腔结构,且不表达内皮细胞标志物CD31,在Matrigel基质胶上能够形成相对稳定的管腔结构,CD31表达明显。CD133+卵巢癌干细胞样细胞接种裸鼠皮下成瘤后,可观察到肿瘤组织中有人源性CD31的表达。结果表明CD133+卵巢癌干细胞样细胞能够分化为血管内皮细胞,参与肿瘤血管重建。

肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌于细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancerstemcell，CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养，获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检On,0Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CDl33的表达，平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3～7d后即可形成肝癌干细胞样细胞球，获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力，其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加[（99．6％±0．31）％猫（0．12％±O．05）％，P〈0．01]，但两种细胞CD90[（0．11％±0．06）％US（0．09％±0．07）％，P〉0．05]和CDl33[（0．17％±0．08）％椰（0．15％±0．05）％，P〉0．05l表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞[（188．67±12．5）协（79±16．7）个，P〈0．01]；当接种量为5X10^4个细胞时，与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比，接种Huh＇／干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（1I”s30d），成瘤率更高（100％郴16．67％）；接种5×10’数量级的细胞时，实验组成瘤体积[（171．90±10．94）伽（86．39±11．21）mm^3P〈0．01]和瘤体质量[（2．984±0．82）vs（0．324±0．17）g，P〈0．01]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞，其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。

LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化。MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAMhigh、EPCAMlow和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布。3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAMhigh细胞中CD44/EPCAM的表达。结果:LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别。CD44+/EPCAMhigh细胞增殖能力高于EPCAMlow细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期。以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而1×104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10)。小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAMhigh细胞仍能少量表达CD44和EPCAM。结论:LoVo细胞中存在CD44+/EPCAMhigh结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAMhigh可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究。

人膀胱癌组织中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及PIWIL2表达

目的从人膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中分离培养肿瘤干细胞样细胞(CSLC),鉴定其生物学特性,并研究PIWIL2在CSLC中的表达和意义。方法收集12例不同临床分期BTCC患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSLC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133+CD44+细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL2mRNA在CSLC中的表达;裸鼠皮下接种CS-LC,观察其成瘤能力。结果成功地从人膀胱癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSLC,CSLC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×104、1×105个CSLC均可全部成瘤,PIWIL2mRNA在CSLC的表达显著高于正常膀胱组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人膀胱癌组织中分离获得CSLC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL2,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。

Bcl-2在人脑胶质瘤干细胞样细胞中的表达及病理相关性

目的检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因在胶质瘤干细胞样细胞(GSLCs)中的表达水平,并分析Bcl-2与来源胶质瘤恶性程度的相关性。方法从8例临床标本中培养出GSLCs并鉴定后,检测Bcl-2在GSLCs以及相应原代胶质瘤细胞中的mRNA和蛋白水平并比较分析;此外对GSLCs中Bcl-2水平及来源胶质瘤恶性程度之间的关系进行分析。结果从8例胶质瘤标本中培养出GSLCs并通过鉴定。实时逆转录酶-聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测显示Bcl-2在GSLCs中的mRNA和蛋白水平均显著高于对应的原代胶质瘤细胞,配对t检验结果分别为P<0.001和P<0.005,有统计学意义。此外,Bcl-2的在Ⅳ级脑胶质瘤来源的GSCLs中的表达水平明显高于Ⅲ级脑胶质瘤来源的GSCLs。结论首次检测并发现GSCLs中Bcl-2的表达水平高于相应的原代胶质瘤细胞,此结果与胶质瘤干细胞(GSCs)特点相符,这可能是GSCs产生治疗耐受性并逃避凋亡的原因之一。以Bcl-2为靶点的抗肿瘤治疗须能诱导GSCs凋亡,才有望治愈胶质瘤。

消痰散结方对结肠癌干细胞样细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的探讨消痰散结方对结肠癌干细胞样细胞(CCSCs)凋亡的影响及相关机制。方法采用无血清培养法由HCT116结肠癌细胞诱导培养CCSCs,通过检测CCSCs标志物CD44进行鉴定。消痰散结方浸膏冻干粉末溶解在细胞培养液中,制备消痰散结方保存液。以不同浓度消痰散结方(0.125、0.25、0.5、1.0 mg/mL)作用CCSCs 72 h,Annexin-V/PI双染色结合流式细胞术检测各浓度消痰散结方对CCSCs的影响。Western blot检测药物干预后Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果 HCT116细胞在无血清培养下成球生长,CCSCs中CD44+细胞占(49.69±1.89)%。消痰散结方可诱导CCSCs,其凋亡率与对照组(0 mg/mL)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其凋亡效应呈浓度依赖性。消痰散结方作用后,Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,以0.5、1.0 mg/mL两组浓度效应更为显著。结论从HCT116结肠癌细胞成功诱导富集CCSCs,消痰散结方能剂量依赖性地诱导CCSCs,其机制可能与促凋亡蛋白Bax表达增强、抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱相关。

人上皮性卵巢癌细胞系侧群细胞的肿瘤干细胞样细胞生物学特性及膜蛋白差异表达的鉴定

目的鉴定上皮性卵巢癌细胞侧群细胞(SP细胞)肿瘤干细胞样细胞生物学特性,并检测侧群细胞内差异蛋白质的表达。方法流式分选上皮性卵巢癌细胞系SKOV3和A2780具有外泌Hochest33342染料生物学特性的侧群细胞,鉴定其肿瘤干细胞样细胞相关生物学特性。运用细胞培养稳定同位素标记(SILAC)的定量蛋白质组学技术,检测SP细胞中差异表达膜蛋白。结果运用流式分选技术,成功分选出上皮性卵巢癌细胞系SKOV3和A2780细胞占比0.5%的SP细胞,经过多次分选,SP细胞比例逐步升高,并能够逐步分化成非SP细胞,说明SP细胞具有一定的增殖与分化能力。体外实验证实SP细胞具有更强的细胞克隆形成能力,且对紫杉醇、顺铂等化疗药物敏感性差;反转录PCR实验显示SP细胞内干细胞相关基因(如Oct-4、β-catenin、ABCG2)表达水平升高。此外,SP细胞具有较强的小鼠体内成瘤能力。运用SILAC技术,以非SP(NSP)细胞作为对照,检测出SKVO3和A2780细胞SP细胞内差异表达膜蛋白分别1561和1989个,以SKOV3为基准,两种SP细胞共同差异表达上调蛋白12种,共同差异表达下调蛋白13种。结论上皮性卵巢癌细胞系SP细胞具有肿瘤干细胞样细胞生物学特性,并检测出SP细胞差异表达膜蛋白,为后续深入探索上皮性卵巢癌肿瘤干细胞样细胞表面标记蛋白提供基础。

敲减免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌细胞恶性增殖、侵袭和干细胞样特性的影响

目的·探讨干扰免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌J82细胞的恶性增殖和干细胞样特性的影响。方法·shRNA干扰效率的检测采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。J82细胞增殖采用克隆形成实验检测。细胞凋亡采用流式细胞术检测。细胞侵袭采用Transwell检测。肿瘤克隆能力采用肿瘤成球实验观察。细胞凋亡、侵袭和干细胞样相关蛋白表达采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测。结果·B7-H3在膀胱癌组织及膀胱癌细胞系中高表达(P=0.000)。确定shRNA2为设计的3组shRNAs中干扰B7-H3基因效率最高(P=0.000)。B7-H3干扰抑制了J82细胞的增殖、侵袭、肿瘤克隆能力及干细胞样特性(P=0.000)。并且,B7-H3干扰促进了J82细胞的凋亡(P=0.000)。结论·免疫调节蛋白B7-H3基因干扰可对膀胱癌J82细胞的恶性增殖、侵袭及干细胞样特性产生抑制作用。

干细胞样肝原始细胞的体外分化

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中的形态学变化并用显微摄影记录结果,最后利用免疫细胞化学分析鉴定分化后细胞的性质。结果:干细胞样肝原始细胞集落在体外培养时可形成类似肝小叶的形状,集落中央大部分细胞分化成双核细胞,集落周边细胞仍为单核细胞,但体积明显增大,整个集落中的细胞呈放射状排布。分化后,细胞群中的部分细胞表达成熟肝细胞标志白蛋白(albumin),少部分细胞表达胆管上皮细胞标志细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19),但所有细胞均不表达低分化肝细胞标志α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)。结论:干细胞样肝原始细胞在体外具有多向分化能力,可分化为表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞标志的细胞。

不同氧环境下川芎和丹参对肺癌干细胞样细胞血管生成拟态的作用

目的观察川芎和丹参以及两药配伍后对不同氧环境下肺癌干细胞样细胞(CSLCs)血管生成拟态(VM)的影响。方法采用无血清成球培养法分离A549CSLCs亚群,建立A549 CSLCs荷瘤小鼠模型,分为常氧组和乏氧组,每组进一步分为对照组、川芎组、丹参组、川芎和丹参(川丹)组以及恩度组,通过CD31/PAS双染法检测各组VM形成。结果(1)单细胞克隆形成实验显示A549球细胞形成的单个克隆灶的细胞数目明显多于其亲代细胞,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,分别在6 h、12 h和24 h A549球细胞均比其原代细胞有更强的细胞迁移能力(P<0.01)。(2)CD31/PAS双染法结果显示,常氧环境和乏氧环境下,川芎组、丹参组、川丹组和恩度组较对照组VM的数量均明显减少(P<0.01),不同氧环境比较,各组之间差异无统计学意义。结论(1)无血清培养法分离富集的球细胞具有干细胞样细胞的干性。(2)常氧和乏氧环境下川芎、丹参以及两者配伍均能抑制VM的形成,然而,无论常氧还是乏氧环境,川芎和丹参配伍对抑制VM的形成协同作用不明显。

鼻咽癌细胞株CNE-2Z中肿瘤干细胞样细胞的悬浮培养与鉴定

目的探讨鼻咽癌细胞株CNE 2Z中肿瘤干细胞样细胞的富集与鉴定方法。方法鼻咽癌细胞株CNE 2Z细胞普通培养至对数生长期,不同密度细胞分别加入无血清培养液中继续培养,制备第9天无血清培养细胞爬片,CD133和CD44克隆抗体免疫组化染色,电镜观察超微结构。结果无血清悬浮培养至第9天时,以1×10~5/m1细胞密度组活细胞比率最高;普通培养细胞爬片的CD133和CD44细胞强阳性率分别是2.71%和3.00%,而无血清培养细胞爬片的CD133和CD44强阳性率分别为66.7%和67.00%(P<0.01),表现正相关(P<0.01);扫描电镜和透射电镜观察显示,阳性细胞表现特殊的超微结构特点。结论无血清悬浮培养法可富集鼻咽癌细胞中的肿瘤干细胞样细胞,CD133和CD44可作为其特异性表面标志物。

整合素连接激酶对脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化的作用

目的研究整合素连接激酶(ILK)对脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化的影响。方法分离人脐带间充质干细胞,用表达对照绿色荧光蛋白(GFP)和GFP融合野生型ILK、突变型ILK的质粒转染后,用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27的无血清培养基培养。检测间充质干细胞的增殖速度及向神经干细胞样细胞分化的效率。结果转染ILK的间充质干细胞中,ILK稳定表达,增殖速度加快,神经干细胞样细胞分化的效率提高;野生型ILK优于突变型ILK。结论 ILK促进间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化。其作用机制与激酶活性有关。