沉默FOXM1对糖尿病肾病小鼠炎症反应、足细胞凋亡及干细胞蛋白的影响研究

目的:观察沉默FOXM1对糖尿病肾病(DN)小鼠炎症反应、足细胞凋亡及干细胞蛋白的影响。方法:30只小鼠随机等分为空白对照组、DN模型组和沉默FOXM1组。空白对照组正常喂养。DN模型组和沉默FOXM1组高脂肪饮食构建DN模型后,DN模型组正常喂养,沉默FOXM1组给予Fox M1-shRNA慢病毒静脉注射。比较三组小鼠一般反应情况、光镜肾皮质病理、肾功能指标、炎症指标、足细胞凋亡及干细胞蛋白等观察指标的差异。结果:沉默FOXM1组的体重、进食量、饮水量与空白对照组比较(P>0.05),但均重(或多)于DN模型组(P<0.05)。与DN模型组相比,沉默FOXM1组的肾小管底膜增厚、肾小球体积增大、系膜基质增生、炎性反应均改善。与空白对照组相比,DN模型组和沉默FOXM1组的足细胞凋亡数增加,但沉默FOXM1组的足细胞凋亡数低于DN模型组(P<0.05)。与空白对照组相比,DN模型组和沉默FOXM1组的肾功能指标(Alb、KIM-1)、炎性因子(TNF-α、CRP、IL-2)、干细胞蛋白(Oct4、Sox2)均提升,但沉默FOXM1组的肾功能指标(Alb、KIM-1)、炎性因子(TNF-α、CRP、IL-2)、干细胞蛋白(Oct4、Sox2)低于DA模型组(P<0.05)。结论:沉默FOXM1能减少DN小鼠24 h尿白蛋白排泄,减轻肾脏损伤,降低炎性反应,抑制足细胞凋亡,改善干细胞蛋白表达,可能为DN治疗的一个靶向基因。

神经上皮干细胞蛋白

1 概述 神经上皮干细胞蛋白(neuroepithelial stem cell protein )又名Nestin 蛋白,属于中间丝( intermediate filament, IF )的一种, 为第Ⅵ族,其相对分子质量是240 000,与神经丝密切相关,是胚胎中枢神经系统(CNS)主要的中间丝蛋白,主要表达于发育中的CNS 和骨骼肌,已经被广泛用作CNS中增殖前体细胞的标记物1～3,它对于神经干细胞的研究具有重要的意义.

鸡蛋白提取液诱导细胞后干细胞蛋白芯片分析

目的:分析鸡蛋白提取液与细胞共培养是否能升高干细胞蛋白的表达,使细胞向干细胞转化。方法:用四种细胞,做一个普通培养,一个50%鸡蛋白提取液共培养,培养3 d后,收集细胞,冻于-80℃,送公司做干细胞蛋白芯片检测。结果:C57-BMSC有3个蛋白发生了统计学意义的改变,TS-UC-MSC有1个蛋白发生了统计学意义的改变,293T有1个蛋白发生了统计学意义的改变,293T-GFP有1个蛋白发生了统计学意义的改变。结论:50%鸡蛋白提取液共培养细胞后,细胞发生了向干细胞转变的现象。

当归多糖对小鼠骨骼肌卫星细胞增殖及干细胞因子受体蛋白表达的影响

目的观察在体外造血微环境中,当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖及干细胞因子受体蛋白(c-kit)表达的影响。方法原代培养MSC,5天后采用结蛋白(desmin)免疫细胞化学鉴定;细胞随机分为8组,即空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含100、200、300μg/mLAPS的DMEM/F12培养基实验组及经100、200、300μg/mLAPS干预后骨髓基质细胞条件培养基组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性及对细胞进行c-kit免疫细胞化学染色。结果分离培养的MSCs呈desmin染色阳性;MTT法检测发现各条件培养基实验组MSCs增殖显著;c-kit免疫强阳性反应存在于条件培养基培养的各组MSCs中,c-kit主要表达于细胞质。结论经APS干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变MSCs的生长特性,明显促进MSCs增殖及c-kit的表达,c-kit在MSCs增殖过程中可能起某种调节作用。

关节镜下骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白封闭剂治疗膝关节软骨缺损

目的：比较关节镜下关节清理术联合注射骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白封闭剂与关节清理灌洗术治疗膝关节软骨全层缺损的临床疗效。方法：对2002年1月-2005年5月膝关节全层软骨缺损患者，分别行膝关节镜下关节清理术联合注射骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白封闭剂（实验组24例）与关节清理灌洗术（对照组21例），根据临床症状及Tenner运动评级判定疗效，随访观察6～24个月。结果：关节镜下关节清理术联合注射骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白封闭剂总有效率91．7％，关节清理灌洗术总有效率66．7％，组间比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：关节镜下关节清理术联合注射骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白封闭剂治疗膝关节软骨全层缺损优于关节清理灌洗术。

绿色荧光蛋白滑膜间充质干细胞抑制大鼠骨关节炎的实验研究

目的探讨关节腔内注射绿色荧光蛋白(GFP)滑膜间充质干细胞防治骨关节炎的有效性。方法增殖培养GFP滑膜间充质干细胞至第3代,收集并调整细胞浓度至1.0×108/m L后行关节腔内细胞移植。15只SD大鼠经改良Hulth手术造骨关节炎模型,同一大鼠左腿为对照组,右腿为治疗组。于1周、2周时麻醉状态下CT扫描后处死大鼠,取全膝关节置于4%多聚甲醛液固定、制片,番红-O染色后进行病理图像系统分析,经Mankin′s评分,分析评价骨关节炎中2组关节软骨破坏进展。结果 CT显示治疗组较对照组骨赘和软骨下硬化减少,关节软骨破坏轻。第2周时胫骨关节软骨Mankin′s评分对照组为10.07±0.63,治疗组为3.56±0.21,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论关节腔内注射GFP滑膜间充质干细胞能有效抑制关节软骨的破坏进展。

重组人干细胞因子/血小板生成素融合蛋白的纯化及复性研究

目的 探讨重组人干细胞因子/血小板生成素(SCF TPO)融合蛋白纯化及复性的最佳方法。方法 裂解 法提取包涵体,在变性条件下利用金属螯和层析获得融合蛋白,经透析及谷胱甘肽氧化还原法对纯化的融合蛋白进 行复性。结果 获得具有初步生物学活性的SCF TPO融合蛋白,其纯度高达90%。结论 该纯化方法操作简捷, 特异性高,纯化效果好,获得率高。

端粒酶对人骨髓间充质干细胞组蛋白甲基化转移酶的影响

目的:观察端粒酶对人骨髓间充质干细胞组蛋白甲基化转移酶活性的作用。方法:利用逆转录病毒将端粒酶催化亚基转染到人骨髓间充质干细胞建立稳定转染细胞系,以转染空白质粒作对照组。采用Realtime-PCR检测端粒酶过表达后对人骨髓间充质干细胞组蛋白甲基化转移酶基因族的主要相关基因的表达。结果:人骨髓间充质干细胞转染端粒酶催化亚基后,与对照组相比,大部分组蛋白甲基转移酶主要相关基因的表达显著下降,组蛋白甲基化水平降低。结论:端粒酶具有抑制组蛋白的甲基化,使组蛋白甲基化水平降低的作用。

慢病毒转染绿色荧光蛋白对乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群的影响

背景:研究发现通过流式分选的SP肿瘤干细胞具有干细胞功能,提示可用于检测表面标志未知的肿瘤干细胞。目的:观察慢病毒转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)对乳腺癌细胞系MCF-7中SP肿瘤干细胞生物学特性及亚群分布的影响。设计、时间及地点:细胞学基因检测水平体外观察,于2007-06/2008-07在南京医科大学第一附属医院普外科实验室完成。材料:MCF-7细胞株由上海细胞生物学研究所馈赠,GFP-MCF-7细胞株由江苏省人民医院普外实验室保存。方法:取MCF-7与GFP-MCF-7细胞株,加入含10%小牛血清的高糖DMEM培养液,在37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度恒温箱中培养,生长至80%～90%融合时消化传代,取处于对数生长期的两种细胞进行实验。主要观察指标:利用流式细胞技术检测转染前后细胞中SP肿瘤干细胞的比例,运用Percoll不连续密度梯度法分离转染前后富集SP肿瘤干细胞的亚群,平板克隆实验测定各亚群的克隆形成率,观察比较转染前后细胞生长曲线、骨桥蛋白的表达水平。结果:MCF-7与GFP-MCF-7细胞中SP肿瘤干细胞比例分别为2.79%和2.73%,转染前后差异无显著性意义(t=2.184,P>0.05)。经Percoll分选,MCF-7与GFP-MCF-7细胞均分为5层,其中GFP-MCF-7第4亚群中明显富集SP肿瘤干细胞,且克隆形成率最高(t=3.415,P<0.01)。转染前后细胞生长曲线无明显变化,且骨桥蛋白的表达水平基本相似(t=2.562,P>0.05)。结论:慢病毒转染绿色荧光蛋白对MCF-7中的SP肿瘤干细胞比例、亚群分布、细胞生物学特性无明显影响,且Percoll不连续密度梯度法富集效果显著。GFP-MCF-7细胞株可用于乳腺癌肿瘤干细胞转移动物模型的构建等实验。

鞘内注射黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞的影响研究

目的探讨鞘内注射黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞的影响。方法将80只健康SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、黄芪注射液鞘内注射组以及黄芪注射液腹腔注射组,每组20只。除假手术组外,其余组均建立大脑中动脉永久梗死性模型;黄芪注射液鞘内注射组和黄芪注射液腹腔注射组分别给予黄芪注射液鞘内注射和腹腔注射,假手术组和缺血再灌注组鞘内注射生理盐水,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织神经上皮干细胞蛋白(Nestin)表达情况。结果假手术组术后1 h、2 h、8 h、24 h神经功能评分均为0分,而缺血再灌注组、黄芪注射液鞘内注射组、黄芪注射液腹腔注射组随着术后时间的延长神经功能评分呈现降低的趋势,其中黄芪注射液鞘内注射组术后2 h、8 h、24 h神经功能评分均明显低于其他2组(P均<0.05),黄芪注射液腹腔注射组术后8 h、24 h神经功能评分均明显低于缺血再灌注组(P均<0.05);假手术组术后1 d、3 d、7 d脑组织Nestin阳性细胞数比较差异均无统计学意义(P均>0.05);缺血再灌注组术后3 d、7 d脑组织Nestin阳性细胞数明显少于假手术组(P均<0.05),黄芪注射液鞘内注射组、黄芪注射液腹腔注射组术后1 d、3 d、7 d脑组织Nestin阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组(P均<0.05),且黄芪注射液鞘内注射组明显多于黄芪注射液腹腔注射组(P均<0.05)。结论鞘内注射黄芪注射液能够有效减轻局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损程度,促进神经干细胞增殖。

应用纤维蛋白胶自体角膜缘干细胞移植术与羊膜移植术治疗翼状胬肉的疗效分析

探讨分析应用纤维蛋白胶自体角膜缘干细胞移植术与羊膜移植术治疗翼状胬肉的临床疗效。方法：选取2010年1月至2012年12月间我院眼科门诊及住院部收治的静止期原发性翼状胬肉患者62例（83只病眼）作为研究对象，将其随机分为观察组（35只病眼）和对照组（48只病眼），应用翼状胬肉切除术联合纤维蛋白胶自体角膜缘干细胞移植术为观察组患者进行治疗，应用翼状胬肉切除术联合羊膜移植术为对照组患者进行治疗。术后，对两组患者进行为期2年的随访，观察对比两组患者的临床疗效及复发情况，并将对比的结果及两组患者的临床资料进行回顾性的分析。结果：在观察组患者中，术后1～2周内发生结膜水肿增厚的病眼有10只(占病眼总数的28%)，病情在12个月内复发的病眼有3只（占病眼总数的8%）。在对照组患者中，术后1～2周内发生结膜充血水肿的病眼有15只(占病眼总数的31%)，病情在12个月内复发的病眼有5只（占病眼总数的10%）。所有患者均未发生睑球粘连的现象。结论：翼状胬肉切除术联合纤维蛋白胶自体角膜缘干细胞移植术和翼状胬肉切除术联合羊膜移植术均可有效地治疗翼状胬肉。相比之下，翼状胬肉切除术联合纤维蛋白胶自体角膜缘干细胞移植术的手术操作方法更简单，取材更方便，具有安全有效、经济实惠、复发率低、术后并发症少等优点，值得在临床上进一步推广应用。

前列腺干细胞抗原特异性分子探针的构建及其在体MR成像的实验研究

目的应用纳米金磁微粒标记抗人前列腺干细胞抗原(PSCA)单抗7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag,检测其与前列腺癌细胞结合的特异性,并探讨其用于前列腺癌体外及体内MR成像的可行性。方法应用非共价键耦联方法将纳米金磁微粒标记7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag,检测其与前列腺癌细胞结合的特异性;应用3.0T磁共振扫描仪,观察不同浓度金磁微粒MR成像情况,探讨MRI可分辨的最低浓度;培养人前列腺癌细胞PC-3和肝癌细胞SMMC-7721,将这两种细胞分别与7F5@Gold Mag、无关抗体@Gold Mag交叉配对,对各组细胞行T2 WI并分别测量其信号强度。建立PC-3和SMMC-7721荷瘤裸鼠模型,对两组荷瘤裸鼠经尾静脉注射7F5@Gold Mag和无关抗体@Gold Mag,分别在注射前、注射后6、12和24 h行MR扫描,观察其对肿瘤T2 WI信号的影响,分别测量其信号强度,探讨其用于MR体内成像的可行性,分析比较其信号强度的差异。结果成功构建PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag;流式细胞术检测其与PC-3细胞结合率为92.11%;激光共聚焦显微镜及透射电镜观察见PC-3细胞与7F5@Gold Mag有特异性结合。纳米金磁微粒稀释至1∶640,与1%琼脂糖凝胶相比,T2 WI信号强度差异有统计学意义;7F5@Gold Mag可显著特异性降低PC-3细胞T2 WI信号。PC-3荷瘤裸鼠注射7F5@Gold Mag 6、12和24 h后肿瘤组织T2 WI信号强度较平扫显著降低(F=43.675,P<0.05)。而SMMC-7721荷瘤裸鼠在平扫和注射对比剂后6、12和24 h肿瘤信号强度差异无统计学意义。结论 PSCA特异性MR分子探针7F5@Gold Mag具有良好的理化性质和免疫活性,可特异性降低PC-3细胞的T2 WI信号,对活体前列腺癌组织具有靶向性的增强效果。

阶段性胚胎抗原-1,OCT-4,颗粒酶B在脂肪成体干细胞中的表达

目的:探索脂肪成体干细胞中是否表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB.方法:先将C57小鼠脂肪用I型胶原酶消化,然后采用直接贴壁法,培养获得的细胞.取第3代生长状态稳定、形态均一的细胞进行成脂、成骨诱导分化,同时观察所培养的第3代细胞表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB的情况.结果:通过该培养方法,可以获得稳定的细胞群体,并能成功进行成骨、成脂诱导分化;免疫荧光化学检测显示三种胚胎时期出现的特殊蛋白均有不同程度的表达.结论:脂肪来源的成体干细胞中表达胚胎时期的产物,这种特性可能与干细胞的多向分化特性有关系.

脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究

目的探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞(NSCs)标志物mRNA的表达。方法使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs),观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达,使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后NSCs标志物巢蛋白(nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达。结果脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞。流式细胞仪检测该细胞不表达CD34、CD11a、CD11b和强表达CD29,符合MSCs特征。诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强,48h达高峰,然后逐渐减弱。结论脐血中存在间质干细胞,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志。脐血能够成为NSCs的新来源。

神经胶质瘤干细胞样细胞的分离鉴定及其生物学特性初探

目的探讨神经胶质瘤干细胞样细胞的分离鉴定及其生物学特性。方法采取流式细胞仪分选神经胶质瘤C6细胞中的侧群细胞作为观察组,非侧群细胞作为对照组,经3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2(MTT)法对细胞生长曲线进行绘制,对细胞克隆形成能力、球囊形成能力、细胞成瘤能力以及细胞CD133的表达进行检测分析。结果神经胶质瘤C6细胞中侧群细胞所占比例为(4.32±1.41)%;侧群细胞生长速度较非侧群细胞快(P<0.05);在无血清条件下培养,侧群细胞具有形成球囊的特性,非侧群细胞无此特性;侧群细胞克隆形成率高于非侧群细胞(P<0.05);侧群细胞CD133表达水平高于非侧群细胞(P<0.05)。结论在神经胶质瘤中存在有典型的侧群细胞,且侧群细胞中干细胞标志蛋白CD133呈现为高表达,可以在侧群细胞中分选富集神经胶质瘤干细胞样细胞,值得关注。

核干细胞因子在肝癌组织中的表达及临床意义

目的研究核干细胞因子蛋白（nucleostemin）在肝癌组织中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组织化学（SABC法）检测50例肝癌组织，10例正常肝组织，10例肝血管瘤组织中核干细胞因子蛋白的表达；在光镜下观察核干细胞因子蛋白表达情况。结果核干细胞因子蛋白在肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织及肝血管瘤组织（P〈0．05），同肝癌的病理分级及有无转移有关，在中低分化肝癌组织和有门静脉癌栓的肝癌组织中高表达（P〈0．05），与病人的年龄、性别无相关性（P〉O．05）。结论核干细胞因子蛋白在肝癌组织中高表达且同肝癌的病理分级及有无转移有关，提示其可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要促进作用。

hUMSCs外分泌蛋白治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎模型大鼠的机制初探

目的:探讨腹腔注射人脐带间充质干细胞外分泌蛋白(hUMSCs-S)治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)模型大鼠的可能性及其相关作用机制。方法:6~8周龄Lewis大鼠72只,用随机数字表分方法均分为3组,分别为正常对照(CTRL)组、EAU模型组及hUMSCs-S治疗组,每组24只。EAU组与hUMSCs-S组大鼠采用光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)联合弗氏完全佐剂建立EAU模型,hUMSCs-S组大鼠在建模的同时予以腹腔注射hUMSCs-S,EAU组及CTRL组大鼠均腹腔注射等量PBS。裂隙灯显微镜拍摄记录各组大鼠眼前段情况,根据Caspi评分标准评价眼前段炎症程度;于免疫后第7天(初发期)、14天(高峰期)、21天(恢复期)取眼球组织制成石蜡切片进行HE染色、免疫组化及免疫荧光染色,分别用于眼球组织病理学评分、前房浸润细胞情况评估,观察眼球组织中CD3^(+)T细胞及紧密连接蛋白ZO-1的表达。无菌操作下采腹主动脉血,制备血清,行ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素10(IL-10)和IL-17的浓度。结果:(1)通过裂隙灯显微镜观察和比较,EAU组大鼠出现明显眼前段炎症反应,在建模后第11~17天,hUMSCs-S治疗有降低眼前段Caspi评分的作用(P<0.05);(2)眼球组织切片HE染色结果显示,建模后第14天,hUMSCs-S组大鼠虹膜睫状体和视网膜结构破坏及前房炎细胞浸润数量均低于EAU组(P<0.05);(3)眼球组织切片免疫组化及免疫荧光染色结果显示,hUMSCs-S组大鼠虹膜睫状体、前房和视网膜中CD3^(+)T细胞浸润较EAU组减少,视网膜及视网膜色素上皮(RPE)层ZO-1表达量较EAU组增加;(4)ELISA法检测大鼠外周血血清IL-17及IL-10浓度结果显示,与EAU组相比,hUMSCs-S组大鼠外周血IL-17表达下降、IL-10表达增加(P<0.05)。结论:hUMSCs外分泌蛋白对EAU模型大鼠治疗有效;腹腔注射hUMSCs外分泌蛋白可影响EAU大鼠外周血中炎症因子表达,减少眼内炎症细胞浸润,减轻RPE层紧密连接蛋白的破坏程度。

神经干细胞增殖与分化过程中Bmi1与NSPc1的作用

多梳蛋白(PcG)家族是非常保守的表观遗传调节因子。近年来对其成员的功能研究发现,PcG家族对干细胞的自我更新及增殖与分化都有很重要的作用。哺乳动物PRC1成员Bmi1和NSPc1在神经系统发育早期高表达。最近的研究提示它们不仅在细胞增殖分化相关基因转录调控中发挥重要作用,而且在神经干细胞自我更新及分化过程中同样有重要作用。

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca^(2+)浓度的变化

背景: 单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。目的: 探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。方法: 分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和RealtimePCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果与结论: ①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P<0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20min时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P<0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。

左归丸对视神经夹伤大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的:观察左归丸对视神经夹伤大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法:建立大鼠单侧视神经部分损伤模型。模型大鼠分别给予左归丸液4.0g/(kg·d)(治疗组)和等量生理盐水(损伤对照组)灌胃,采用免疫组织荧光技术于损伤后第1、2、4、8和16周检测受损眼视网膜神经节细胞数目及神经上皮干细胞蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达情况。结果:视神经夹伤后,大鼠视网膜节细胞数目减少,细胞排列疏松紊乱,在内、外网层和内核层可见裂隙形成,视网膜厚度较正常组变薄,以伤后第4周最为严重,神经节细胞减少约50%,至第8周后神经节细胞减少缓慢。视神经夹伤第2周时,nestin和GFAP表达明显升高,持续至损伤后第8周。Nestin和GFAP在视网膜全层均有表达,但在神经节细胞层、内网层和内核层表达最强,呈条带状弯曲或蛇样匍行;伤后第4周时表达最强,此后二者表达下降,至伤后第16周时,GFAP先于nestin蛋白降至正常水平。各时间点左归丸组神经节细胞存活数比损伤对照组增加,且细胞排列相对整齐;nestin和GFAP表达强度较损伤对照组增加(P<0.05)。结论:左归丸可能通过促进大鼠视网膜Mller细胞nestin和GFAP的表达,维持损伤后视网膜结构的完整性,从而间接减少节细胞凋亡,有效保护受损视网膜节细胞。