细胞穿膜肽TAT与小鼠干细胞转录因子Oct4融合表达及纯化

将TAT-Oct4目的基因插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a-TAT-Oct4,形成大肠杆菌重组表达体系。融合蛋白TAT-Oct4在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达产物经纯化后,纯度可达90%以上。通过尿素梯度透析复性,TAT-Oct4平均复性收率为8.8%。细胞免疫荧光技术分析表明,TAT-Oct4融合蛋白可穿透近100%细胞的细胞膜,其进膜后主要分布于细胞核内。建立了具有活性的TAT-Oct4融合蛋白生物制备方法,为细胞重编程提供了一种有效的研究材料,并可为其他用于细胞重编程的干细胞转录因子设计提供实用的方法学。

干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化EnVision两步法及Western blot法检测60例结直肠癌手术切除组织及癌旁正常组织中OCT4的表达,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,运用Kaplan-Meier法分析OCT4表达与结直肠癌患者总生存率的关系。结果结直肠癌组织中OCT4的阳性率为80.00%,高于癌旁正常组织(16.67%),差异有统计学意义(P<0.05),OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05),与其他临床病理特征尚无相关性(P>0.05)。Western blot实验显示:结直肠癌组织中OCT4蛋白的相对表达量为7.70±0.07,高于癌旁正常组织(0.70±0.07),差异有统计学意义(P<0.05);OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05),与其他临床病理特征无相关性(P>0.05)。生存分析显示:OCT4阳性患者的总生存期低于阴性患者。结论 OCT4在结直肠癌中过表达,可作为预测结直肠癌患者预后的潜在分子标志物。

干细胞转录因子Oct4和CD133蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨干细胞转录因子Oct4(Oct4)和CD133蛋白在肝外胆管癌(EHCC)中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测50例EHCC、30例癌旁胆管组织(TAC)和20例正常胆管组织(NBDT)中Oct4和CD133蛋白表达水平,并结合临床病理特征进行分析。结果:在EHCC中Oct4和CD133蛋白阳性表达率分别为62.0%(31/50)和68.0%(36/50)。EHCC中Oct4和CD133表达阳性率显著高于TAC和NBDT(P<0.05)。Oct4和CD133的表达与EHCC的TNM分期、分化程度和转移相关(P<0.05),且两者表达呈正相关(r=0.33,P<0.05)。结论:检测Oct4和CD133基因蛋白表达可作为评估EHCC生物学行为和预后的参考指标。

干细胞转录因子OCT4、SOX2在食管鳞癌组织中表达及与预后的关系

背景:研究表明,OCT4、SOX2、HIWI等在肿瘤组织中有表达。目的:分析干细胞转录因子SOX2、OCT4在食管鳞癌中的表达变化及与患者临床特征、预后的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测77例手术后经病理学证实为食管鳞癌患者的手术标本(食管癌组)和40例癌旁组织标本(癌旁组织)中SOX2、Oct4蛋白的表达水平,并分析其与患者临床特征、预后的关系。结果与结论:(1)食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白阳性表达率均显著的高于癌旁组织(P<0.05);(2)食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白在低分化、淋巴结转移患者中呈显著的高表达(P<0.05);(3)食管癌组织中的SOX2蛋白阳性表达患者的3年随访中位生存期24个月,显著低于阴性患者的30个月;Oct4蛋白阳性表达患者的中位生存时间21个月显著低于阴性患者33个月;(4)结果提示,SOX2、Oct4蛋白在食管癌组织中高表达,并且与患者的分化程度、转移及预后有关。

肺癌组织中干细胞转录因子Sox2和Oct4表达与微血管密度的相关性

背景:研究已证实干细胞转录因子Sox2和Oct4的高表达与肺癌的发生密切相关。目的:探讨肺癌组织中Sox2和Oct4表达与肿瘤微血管生成、临床病理指标的相关性。方法:应用免疫组织化学染色法检测60例肺癌组织和60例正常组织中Sox2和Oct4的表达,以及CD34标记的微血管密度。分析Sox2,Oct4的表达和微血管密度值与临床病理参数关系。结果与结论:(1)Sox2和Oct4在肺癌组织中阳性表达率为46.67%(28/60)、71.67%(43/60),而在正常肺组织中表达均为阴性,差异有显著性意义(P<0.001);(2)肺癌组织中微血管密度值为16.22±2.18,明显高于正常组织4.36±2.07,差异有显著性意义(P<0.001);(3)Sox2、Oct4和微血管密度均与肿瘤TNM分期、分化程度、脉管浸润、淋巴结转移及肝转移相关(P均<0.05),而与年龄、性别无关(P均>0.05);(4)肺癌组织Sox2和Oct4阳性表达组微血管密度值显著高于阴性组(P<0.001);(5)Spearmen相关分析显示:肺癌组织中Sox2与Oct4无明显相关性(r=2.752,P>0.05);(6)结果表明,Sox2和Oct4表达上调可作为肺癌发生的早期预警事件,并与微血管密度呈正相关,二者可能共同参与了肿瘤微血管的生成、浸润及血行转移。

干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中表达及与肿瘤微淋巴管的关系

目的观察干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中的表达变化,并探讨二者与肿瘤微淋巴管的关系。方法用免疫组化法检测60例肺癌组织及其相应正常肺组织中Sox2、Oct4蛋白表达、D-240标记的微淋巴管密度(LMVD)。结果肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白阳性表达率、LMVD与正常肺组织比较,P均<0.05。Sox2、Oct4蛋白阳性表达及LMVD均与肿瘤分化程度、TNM分期、脉管浸润、淋巴结转移、肝转移有关(P均<0.05),此外Sox2、Oct4蛋白阳性表达还与肿瘤病理类型有关(P均<0.05)。肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白阳性表达者LMVD与阴性者比较,P均<0.05。结论 Sox2、Oct4在肺癌组织中呈现高表达,二者可能共同参与了肺癌组织微淋巴管的生成、浸润及淋巴道转移。

干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织的表达及其对5637细胞生物学特性调节

目的研究干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响,为临床治疗提供依据。方法选取2015年1月至2016年1月74例膀胱癌组织、32例癌旁组织以及24例正常膀胱癌组织病理标本。采用免疫组化法检测标本中的Oct4表达;体外培养膀胱肿瘤细胞,采用MTT法检测siRNA敲除Oct4后对与细胞增殖作用的影响;采用细胞划痕及Transwell试验测定细胞迁移、侵袭能力的影响;分析干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响。结果人膀胱癌组织中12例Oct4蛋白检测阴性,62例Oct4蛋白检测阳性,阳性率为83.78%,显著高于膀胱癌组织的21.87%(P<0.05);正常组织中Oct4蛋白阳性率为16.67%,三种不同细胞组织Oct4蛋白阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同临床分期中无统计学意义(P>0.05);膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同病理分级、淋巴结转移中差异具有统计学意义(P<0.05);病理分级越高、淋巴结转移,Oct4蛋白表达越高;免疫组化结果显示:膀胱癌组织中Oct4蛋白表达阳性率为83.78%,膀胱癌旁组织Oct4蛋白表达阳性率为21.87%;正常组织Oct4蛋白表达阳性率为16.67%。三种不同的细胞进行划痕试验2 h后进行观察:结果显示:Oct4-siRNA转染后细胞迁移显著减弱,而其他细胞大量迁入划痕区域。结论 Oct4的表达与人膀胱癌的分级、淋巴结转移关系密切,但是不同临床分期差异不具有统计学意义;Oct4高表达在膀胱癌的发生、发生中发挥重要作用,能抑制膀胱癌细胞系Oct4基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,细胞细胞凋亡,具有较高的临床应用价值。

转录因子Oct-4、Nanog与胚胎干细胞的自我更新

胚胎干细胞自我更新分子机制是胚胎干细胞研究的前沿及热点课题。除外源性信号如LIF、BMP、Wnt能维持胚胎干细胞的未分化状态外,转录因子Oct-4和Nanog特异性表达于全能胚胎干细胞,并与其它转录因子如Sox2一起构成调控网络,共同调控与胚胎干细胞多能性相关的一系列重要分子,是保持胚胎干细胞自我更新和多潜能性的关键分子。

四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及TFAP4蛋白的作用机制

目的 探讨四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及转录因子激活增强子结合蛋白(TFAP)4蛋白的作用机制。方法 SGC-7901干细胞分为A组(SGC-7901干细胞)、B组(SGC-7901干细胞在75μl 2.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、C组(SGC-7901干细胞在75μl 5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、D组(SGC-7901干细胞在75μl 7.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)及E组(SGC-7901干细胞+含有1 mg/ml的5-氟尿嘧啶培养基中培养)。采用倒置显微镜观察SGC-7901干细胞形态;比较SGC-7901细胞及SGC-7901干细胞及集落形成能力;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;Western印迹检测各组干细胞标志物CD44及CD133蛋白,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2及TFAP4蛋白。结果 SGC-7901干细胞随着生长周期的延长,球体逐渐增大,3 d时体积较小结构松散,4 d时细胞呈现椭圆形生长,5 d时细胞结构更致密,形态更加接近球形,且一个球体所包含细胞数目可达到数十个;SGC-7901及SGC-7901干细胞的细胞集落数组间比较存在显著差异(P<0.001);与A组相比,B、C、D及E组24、48、72及96 h时SGC-7901干细胞活性均显著降低(P均<0.05),与B组相比,C、D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),与C组相比,D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),组间比较存在统计学差异(F=112.900,P<0.001);与A组比较,B组、C组、D组及E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4显著降低(P<0.05)。与B组相比,C、D、E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4降低(P<0.05),与C组相比D、E组有显著意义(P<0.05)。D组与E组上述指标无统计学意义(P>0.05)。结论 四君子汤含药血清可以显著抑制胃癌肿瘤干细胞标志物活性,通过抑制Bcl-2表达激活Bax加快胃癌干细胞凋亡,研究机制可能与抑制TFAP4活性相关。

上调OCT4基因表达对人骨髓间充质干细胞的iPSC相关转录因子表达的影响

目的:探讨OCT4基因过表达对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow derived mesenchymal stem cells,h BMMSC)i PSC相关转录因子(c MYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2)表达的影响,为从骨髓造血微环境的角度探索血液系统疾病如白血病、再生障碍性贫血等的发生机制提供实验依据。方法:首先构建重组质粒pcDNA3.1-OCT4表达载体,通过脂质体转染的方式将上述表达质粒导入第3-4代hBMMSC,分别通过PCR及流式细胞术对OCT4 mRNA和OCT4蛋白的过表达进行验证,然后经G418抗性加压下有限稀释和连续亚克隆的方法筛选出稳定表达OCT4的细胞(hBMMSC-OCT4),分别通过RT-PCR和流式细胞术测定iPSC相关转录因子(cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2)mRNA和蛋白的表达,观察OCT4过表达对iPSC相关转录因子表达的影响。结果:成功构建了携带OCT4的重组表达质粒pcDNA3.1-OCT4;通过有限稀释和连续亚克隆的方法筛选出稳定表达OCT4的细胞(hBMMSC-OCT4);流式细胞术检测结果显示,OCT4的平均表达阳性率从未转染时的(3.03±1.49)%增加至稳定表达时的(95.46±1.40)%;RT-PCR证实了OCT4基因的高表达;Real-time PCR结果显示,与未转染的对照组MSC相比,OCT4 mRNA的相对表达量从瞬时转染时的2.75倍增加至稳定转染时的6.23倍,OCT4蛋白的平均表达阳性率从瞬时转染时的(36.36±0.28)%(d 4)升高至稳定转染时的(96.25±1.38)%(d 96)。hBMMSC-OCT4细胞高水平表达干性转录因子(cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2),其平均表达量分别从未转染时的(1.12±0.47)%、(0.84±0.30)%、(2.14±0.79)%、(0.63±0.37)%和(14.34±2.44)%增加至(80.65±4.75)%、(73.03±4.70)%、(68.08±3.05)%、(39.39±1.85)%和(91.45±4.56)%,与RT-PCR结果一致,且NANOG和SOX2的表达水平与OCT4的平均表达量呈正相关(OCT4 vs NANOG:r=0.7802,OCT4vs SOX2:r=0.4981;NANOG vs SOX2:r=0.7426)。结论:获得了稳定表达OCT4的细胞(hBMMSC-OCT4),过表达OCT4可上调hBMMSC干性转录因子(cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2)的表达。

非小细胞肺癌组织中转录因子Oct4、Sox2的表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌组织中转录因子Sox2和Oct4的表达变化,并探讨其意义。方法选取非小细胞肺癌患者45例和肺部良性病变患者30例,采用免疫组化法和RT-PCR法检测Sox2、Oct4蛋白在两种不同组织中的表达,分析非小细胞肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白表达与临床病理参数的关系。结果 Sox2、Oct4在30例肺部良性病变组织中表达均为阴性。45例非小细胞肺癌组织中Sox2蛋白阳性24例,阳性表达率为51.1%;Oct4蛋白阳性33例,阳性表达率为73.3%。Sox2、Oct4蛋白水平随分化程度的增高而降低,随TNM分期的增高而升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。Sox2与Oct4在肺癌组织中的表达无相关性(P>0.05)。Sox2、Oct4均阳性表达者远处转移发生率明显高于阴性表达者(P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中Sox2与Oct4表达升高,并与肿瘤分期、分化程度密切相关;二者可能参与了非小细胞肺癌的发生发展。

异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞功能的影响

目的:探讨异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞(MSC)在体外对T细胞增殖、活化及分泌功能的影响。方法:分离健康儿童外周血单个核细胞,使用Anti-CD3/CD28单克隆抗体体外激活T淋巴细胞,白介素(IL)2体外刺激培养的T细胞1周。建立异位高表达OCT4的MSC(MSC-OCT4)与活化T细胞的体外共培养体系,收集共培养1周后的上清液,流式细胞仪测定Th1/Th2细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α、γ干扰素)水平。收集共培养1周后的淋巴细胞,通过Countstar软件进行计数,用流式细胞仪测定T细胞及活化T细胞亚群的比例后,计算出绝对值,以均数±标准差表示。结果:与对照单独T细胞培养组相比,MSC及MSC-OCT4均能显著抑制CD3^(+)T细胞、CD3^(+)CD4^(+)T细胞和CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖。与MSC相比,MSC-OCT4能更好地抑制CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖(P=0.049),且主要抑制早期T细胞活化。与对照单独T细胞培养组相比,MSC及MSC-OCT4均能显著下调细胞因子IL-2和γ干扰素水平。与T细胞共培养1周后,MSC与MSC-OCT4组细胞因子IL-6水平显著增加。与对照MSC组相比,MSC-OCT4组在共培养1周后活细胞数更高(P=0.019),且能耐受更高浓度丝裂霉素C的抑制增殖作用。结论:MSC及MSC-OCT4在体外均能抑制IL-2刺激的T细胞增殖及活化,过表达OCT4后MSC能更强地抑制CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖,且具有更好的体外增殖能力,可能具有更好更持久地调节Th1/Th2造血因子平衡的作用。

干细胞中两个关键细胞因子Oct4和Sox2

胚胎干细胞(ESC)在谱系特异性标志被激活前,Oct4和Sox2蛋白水平是细胞向谱系选择发展过程中的连续临时性标志。Oct4和Sox2转录因子在启动细胞重编程、维持ESC多能性和决定其是否走向分化方面具有关键作用。它通过与靶基因调控区结合,选择性地抑制分化基因或者激活多能性基因的表达而达到调控目的。干细胞共激活复合物(SCC)是Oct4和Sox2在Nanog基因协同激活时所需要的,它直接与Oct4和Sox2相互作用并集中在Nanog和Oct4启动子部位以及大部分被Oct4和Sox2占据的基因组区域,在维持ES细胞多能性和保持基因组完整性方面发挥着重要功能。因此,对Oct4、Sox2这两个关键性细胞因子作用机制深入了解,有助于细胞重编程分子机制的进一步阐明,为干细胞的相关研究奠定基础。

T细胞转录因子-4在大鼠脑缺血再灌注海马齿状回神经干细胞中的表达

目的:检测T细胞转录因子-4(Tcf-4)在大鼠脑缺血再灌注海马组织神经干细胞中的表达及其变化。探讨影响神经干细胞早期增殖分化的分子调控机制。方法:采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作大鼠脑缺血再灌注模型。用免疫组织化学SP法及RT-PCR法检测海马神经干细胞BrdU、Tcf-4中的表达。结果:随着脑缺血再灌注第3日齿状回神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7日达高峰,然后逐渐减少。Tcf-4 mRNA反应产物随脑缺血再灌注时间延长逐渐增多,第21日表达最强,以后表达逐渐减少。结论:Tcf-4时间依赖性表达与神经干细胞增殖分化进程相吻合,说明其在神经干细胞晚期分化中起重要调控作用。

骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞模型中活化转录因子4基因的表达

背景:研究发现活化转录因子4为近调控成骨细胞分化和功能的活化因子,在成骨细胞分化过程中起着至关重要的作用。目的:探索SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中活化转录因子4基因的表达变化及其意义。方法:以全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第3代细胞时加入成骨诱导剂,在诱导的第0,1,4,7,10,13,16,19天分别采用PT-PCR,Western blot动态监测活化转录因子4基因及蛋白的表达变化,以未进行成骨诱导细胞做对照。结果与结论:RT-PCR结果显示,活化转录因子4 mRNA的表达随着细胞成骨分化程度加剧而升高,16 d达到峰值。Western blot分析结果显示,活化转录因子4蛋白表达量随着骨髓间充质干细胞骨化程度加剧,表达水平亦呈上升趋势,于16 d达到高峰,19 d维持在高水平状态。实验组各时间点活化转录因子4 mRNA和活化转录因子4蛋白表达与对照组相比差异有均有显著性意义(P<0.05)。结果表明诱导成骨细胞中活化转录因子4表达增强,提示活化转录因子4的增强与骨髓间充质干细胞成骨分化能力呈正相关。

外源性内皮素-1对兔骨髓间质干细胞诱导的心肌样细胞中GATA-4转录因子磷酸化的影响

目的 研究外源性内皮素 - 1(ET - 1)对经 5 -氮胞苷体外诱导兔骨髓间质干细胞分化的心肌样细胞转录因子GATA - 4磷酸化的影响。方法 取幼年兔股骨干骨髓基质细胞经 5 -氮胞苷诱导分化为心肌样细胞 ,分别加入不同浓度 (10、30、5 0nmol/L)的外源性ET - 1,Western -blot分析心肌细胞GATA - 4转录因子的蛋白表达及其磷酸化的改变。结果 分化的心肌样细胞可表达心肌细胞特异性GATA - 4转录因子 ;外源性ET - 1不影响GATA - 4蛋白表达 ,但可快速诱导GATA - 4转录因子的磷酸化 ;其中 ,30nmol/LET - 1时GATA - 4转录因子磷酸化的程度最高。结论 ET - 1可介导 5 -氮胞苷诱导兔骨髓间质干细胞分化的心肌样细胞GATA - 4转录因子的磷酸化而影响其活性。

转录辅助因子PC4参与大鼠骨髓间充质干细胞体外衰老过程的调控

目的研究转录辅助因子PC4(transcriptional positive coactivator 4)在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)体外传代衰老过程中的表达变化特点,初步探讨其在MSCs增殖和衰老中的可能作用。方法通过CCK-8法检测并绘制MSCs生长曲线,流式细胞术检测MSCs免疫表型,通过RT-PCR和Western blot检测PC4在MSCs长期体外培养中的表达特点,并检测细胞衰老标志物β-半乳糖苷酶活性的变化,进一步通过RNA干扰抑制PC4表达,检测其对MSCs增殖和衰老的影响。结果本实验分离培养的MSCs早期具有成体干细胞特性,长期体外连续传代后出现细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色呈阳性,PC4在衰老细胞中的表达明显降低,RNA干扰抑制PC4表达后,MSCs增殖受到抑制,β-半乳糖苷酶染色阳性率增加[转染后48 h阴性对照组(8.8±2.5)%,空白对照组(5.7±1.8)%,siRNA组(56.3±4.9)%,P<0.05]。结论转录辅助因子PC4可能参与了体外连续传代培养过程中MSCs增殖活性降低和衰老过程的调控。

干细胞标记物OCT4在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的探讨干细胞关键转录因子OCT4在膀胱癌患者组织中的表达与临床病理因素及预后的相关性。方法选取河北大学附属医院病理科收集的73例经泌尿外科手术切除的膀胱癌组织(膀胱癌组)及30例癌旁组织(癌旁组)作为标本进行免疫组化染色观察,对比两种OCT4蛋白的表达程度,并分析其与患者的临床病理特征及远期预后的关系。结果膀胱癌组织中OCT4蛋白的阳性表达率(71.23%)显著高于癌旁组织(10.00%)(P<0.05);膀胱癌组织中OCT4蛋白的阳性表达与膀胱癌分化程度、发生血管淋巴结转移、浸润深度有关(P<0.05),与年龄、性别、病理分期无关(P>0.05);膀胱癌组织中OCT4蛋白的阳性表达3年生存率显著低于阴性表达(P<0.05),3年生存中位时间显著短于阴性表达(P<0.05)。结论 OCT4表达与膀胱癌转移有关,对远期预后具有不良影响。

转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义

目的探讨转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义。方法以Ficoll密度梯度离心法从SD大鼠骨髓分离单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色和FITC标记的CD133、CD34进行鉴定。细胞免疫化学法检测原代培养7d内皮祖细胞KLF4的表达,RT-PCR法检测原代培养5、10、15d后细胞内KLF4及一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果经DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色鉴定证实获得的细胞为内皮祖细胞。细胞免疫化学检测发现KLF4表达于细胞核内;RT-PCR检测结果显示,5、10、15d大鼠内皮祖细胞的KLF4mRNA表达(分别为0.830±0.017,0.980±0.014,1.090±0.014)逐渐增强(P<0.01),eNOSmRNA表达(分别为0.310±0.008,0.500±0.011,0.650±0.010)也逐渐增强(P<0.01)。结论在内皮祖细胞分化为内皮细胞的过程中,KLF4的表达逐渐增强,并与成熟内皮功能相关。

诱导多能干细胞建系过程中关键转录因子的作用

通过添加OCT4、SOX2等转录因子,体外诱导细胞重编程获得诱导多能干细胞是近年干细胞领域的一大突破。OCT4、SOX2和NANOG等转录因子在启动细胞重编程、维持诱导多能干细胞多能性和决定其是否走向分化方面起了关键作用。对这些转录因子作用机制的了解,有助于细胞重编程分子机制的进一步阐明。