蚯蚓中平喘蛋白组分的提取分离及其作用机制的初探

目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP2)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP2)。采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评价EP2对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP2拮抗白三烯D4引起豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应;同时应用双向凝胶电泳-质谱技术对蛋白组分EP2进行了初步分析鉴定。结果在整体试验中,EP216.8mg.kg-1口含吞服预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和Cdyn下降,作用稍弱于阳性对照药孟鲁司特;在离体试验中,EP2能明显拮抗白三烯D4收缩气管平滑肌的作用,作用强度与孟鲁司特接近;双向凝胶电泳-质谱技术分析证明蛋白组分EP2中含有蚯蚓种属中的蛋白F-I-0、F-I-1以及纤溶酶组分A,均为丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族成员。结论EP2具有平喘作用,作用靶点可能通过拮抗白三烯受体,提示EP2的有效成分可能是白三烯拮抗剂。

鲜地龙平喘活性蛋白提取工艺研究

目的:确定鲜地龙平喘活性蛋白的最佳提取工艺条件。方法:以哮喘潜伏期为评价指标,通过平喘活性考察影响蛋白活性的因素;以蛋白得率为指标,通过正交试验法考察影响活性蛋白得率的因素,综合以上两个实验结果确定最佳工艺条件。结果:最佳工艺条件是:鲜地龙加2倍体积pH6.8的磷酸盐缓冲液,在低温(4°C)下匀浆并静置抽提3h,4°C离心取上清液,80硫酸铵固体盐析取沉淀。沉淀用20mmol/L、pH值为6.8的磷酸盐缓冲液悬浮,透析除盐,所得蛋白液4°C离心,上清液冷冻干燥得到地龙平喘活性蛋白(Eisenia foetida protein,EP)。结论:该工艺操作简单,稳定,得到的地龙蛋白能保持原有平喘活性。

鲜地龙平喘活性蛋白可能致敏性的研究

目的确定鲜地龙平喘活性蛋白对人体是否具有致敏性。方法以豚鼠过敏反应症状为评价指标,观察豚鼠给药后的反应。结果大剂量口服给药后并没有出现明显的过敏反应症状。结论口含服鲜地龙平喘活性蛋白不会引起过敏反应,可以用于临床。

鲜地龙平喘活性蛋白的质量标准研究

为了探讨鲜地龙平喘活性蛋白的质量标准研究方法,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术建立鲜地龙平喘活性蛋白的指纹图谱,以此为基础对平喘活性蛋白进行定性鉴别;采用BCA蛋白含量测定法制订鲜地龙平喘活性蛋白的含量标准。结果,完成了对鲜地龙平喘活性蛋白电泳指纹图谱的初步构建,以此对活性蛋白进行定性鉴别;对BCA蛋白定量法进行了考察,该方法精密度高,稳定性好,可以对平喘活性蛋白的含量进行测定。说明该方法简单,稳定,灵敏度高,可以作为鲜地龙平喘活性蛋白质量评价依据。