微生物源生防杀菌剂的筛选方法研究

以胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)作为模式靶标,使用半固体培养基法(PDB培养基加入适量琼脂)及平板对峙法(PDA培养基),对真菌及放线菌杀菌剂标准菌株的发酵液、上清液和菌丝进行了杀菌活性比较。结果表明,样品的活性与筛选方法和培养时间有直接关联。半固体培养基法中发酵液及菌丝的活性分辨度差,而对真菌及放线菌标准菌株的上清液的活性反应清晰;平板对峙法中,随着培养时间的增加,发酵液及菌丝的活性增强,而真菌及放线菌杀菌剂标准菌株的上清液的活性减弱。半固体培养基法适用于针对不含活菌的上清液的筛选,平板对峙法适用于针对含有活菌的发酵液、菌丝和上清液的筛选,根据样品的类型选择适当的筛选方法和培养时间可以减少假阴性结果。

花椒根腐病拮抗菌W-5的鉴定及发酵条件的优化

腐皮镰刀菌(Fusarium solani)是引起花椒根腐病的主要致病菌,该病严重威胁着花椒产业的发展。为筛选出花椒根腐病的生防菌株,本研究采用土壤平板梯度稀释法和平板对峙法从花椒根系土壤中筛选出对腐皮镰刀菌具有拮抗作用的菌株,通过形态特征观察结合16S rDNA基因序列分析对菌株进行分类地位确定,并在单因素试验基础上结合Box-Behnken中心组合设计的响应面法优化拮抗菌株的发酵条件。结果表明,分离获得的菌株W-5为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),且该菌对腐皮镰刀菌的抑制率达到82.7%,对其他植物病原菌(禾谷镰刀菌、梅毒镰刀菌、藤仓赤霉菌、松针刺盘孢菌和层生镰刀菌)均有较高的抑菌活性,说明其抑菌谱的广泛性;能够分泌蛋白酶和纤维素酶且产嗜铁素能力极强,能够减轻离体培养下花椒根片的发病症状;响应面法优化后的菌株W-5的最佳发酵条件为:温度31.3℃、pH值7.5、接种量3.1%、转速180.5 r/min,此条件下OD_(600)值达到1.832。综之,拮抗菌W-5对花椒根腐病防效优良,具有生防潜力,建立并优化的拮抗菌W-5的发酵条件体系可为花椒根腐病生物药剂的研制提供技术参考。

红芸豆根腐病拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为获得对红芸豆根腐病菌具有良好拮抗效果的菌株,研究采用组织分离法,从苍耳中分离内生细菌,以红芸豆根腐病菌尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)为靶标菌,通过平板对峙法、形态特征观察和分子生物学方法进行拮抗细菌的筛选和鉴定,采用共培养法研究拮抗细菌对尖镰孢菌的抑制作用,并测定拮抗细菌抑菌谱及其对红芸豆种子萌发的影响。结果表明,从苍耳根、茎、叶中共分离得到36株内生细菌,从中筛选到对尖镰孢菌具有明显抑制作用的菌株xj-1-2。结合形态学和gyrB基因序列分析,结果将菌株xj-1-2鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis);xj-1-2能导致尖镰孢菌菌丝分枝增多,产孢量减少;在4、6、8 h时对孢子萌发抑制率分别为100%、79.45%、73.54%。该菌株具有广谱抑菌活性,对厚垣镰孢菌、三线镰孢菌、芬芳镰孢菌等8种病原真菌均具有不同程度的拮抗作用。分别用浓度为1×10^(7)、1×10^(8)、1×10^(9)cfu/mL的xj-1-2菌悬液和发酵液处理红芸豆种子后,发芽率和芽长与对照相比均无显著差异,说明xj-1-2对红芸豆生长具有安全性。从苍耳中分离筛选到具有广谱抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌xj-1-2菌株,为红芸豆根腐病的生物防治提供了菌种资源。

人参根际土壤细菌对人参土传病害防治效果比较

为筛选对人参土传病害有防治效果的人参根际细菌,以通化县阔叶林下人参基地不同种植年限的人参根际土壤为材料,用梯度稀释法分离细菌,平板对峙法筛选拮抗细菌。结果表明,从人参根际土壤中分离出了37株细菌,8株对人参枯萎病有抑制作,其中代号为5-2、11-6、11-7的菌株抑菌效果最显著。9株对人参立枯病有抑制效果,与CK比,在0.01水平15-6、11-1两个细菌菌株的抑菌直径存在极显著差异,在0.05水平,有11-1、15-6、15-5三个细菌菌株的存在极显著差异。9株对人参根腐病有一定的抑制作用,但均不显著,11-7菌株的抑菌直径最大。细菌5-2、11-1、11-7、15-5、15-6号菌株可进一步鉴定与深入研究。

植物内生细菌MY1的分离、鉴定及其防治效果

为了对植物内生细菌MY1进行分离鉴定,并对其防治效果进行研究,采用组织分离法从多种植株中分离内生细菌,通过平板对峙法筛选具有抑菌效果的菌株MY1,采用生长速率法对MY1菌株代谢物的抑菌活性进行测定,通过菌株形态特征观察、生理生化鉴定以及16S r DNA序列分析,对菌株进行鉴定,利用室内盆栽对其防效进行测定。结果表明,从多株植物中分离到67株内生细菌,其中,从曼陀罗叶片中分离得到内生细菌MY1(为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus));菌株MY1对供试的14种植物病原真菌均具有良好的抑菌活性,抑菌率均高于76.65%,其中,对谷瘟病菌(Pyricularia grisea)和桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)的抑制作用较强,抑菌率分别达到92.65%和98.95%;发酵液经高温处理后抑菌作用明显减弱;MY1发酵液对番茄灰霉病和早疫病均有良好的防治效果,发酵液稀释5~50倍预防和治疗效果均高于60%,其中,发酵液稀释5倍对番茄灰霉病和早疫病的预防和治疗效果较高,防效分别达到86.4%、80.2%和88.9%、82.6%,且与对照试剂腐霉利防效间没有显著差异。试验结果可为生防菌剂的开发奠定基础。

利用二级模型筛选源自恒山黄芪的活性内生真菌

目的:利用二级模型对源自恒山黄芪中的20株内生真菌进行筛选。方法:采用平板对峙法对其进行初筛,采用生长速率法对初筛出的恒山黄芪活性内生真菌进行复筛。结果:筛选出2株恒山黄芪内生真菌对指示菌有很强的抑菌活性,分别是头孢霉属AR09、青霉属AS05。结论:2株内生真菌可作为生物农药源进行下一步研究。

生防菌GHt-q6对黄瓜枯萎病菌的抑制作用

设施黄瓜连作现象造成枯萎病的严重发生,影响黄瓜的产量和品质。试验采用平板对峙法、菌落直径生长抑制法和孢子萌发法等测定了生防菌株GHt-q6对黄瓜枯萎病菌的抑制作用。结果表明,生防菌GHt-q6对黄瓜专化型尖孢镰刀菌、辣椒专化型尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌和半裸镰刀菌4种病原菌均有良好的抑制作用;对峙培养中,生防菌GHt-q6会破坏黄瓜枯萎病菌丝生长,菌丝发生畸形、膨大、断裂;黄瓜枯萎病菌丝在含浓度为5%、10%和25%生防菌GHt-q6发酵液平板上的抑制率分别为43.36%、63.87%和78.38%;黄瓜枯萎病菌孢子悬浮液与生防菌GHt-q6发酵液体积比分别为1∶1、2∶1、3∶1时,培养6 h孢子萌发抑制率均为100%,12 h后分别为58.45%、38.38%、24.27%,萌发孢子产生的芽管膨大,随着发酵液浓度越高,芽管越短,24 h后孢子变形成泡囊状,芽管畸形。生防菌GHt-q6对致病镰刀菌有较好的抑制作用,具有开发为生物农药的潜力。

苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)拮抗细菌的筛选与鉴定

苹果轮纹病是苹果的主要病害之一。为了获得防治苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)的生防细菌,该研究采用平板对峙法对供试的70株细菌进行筛选,初筛结果表明:共有18株供试菌株对苹果轮纹病有不同程度的抑制作用。通过计算抑菌率发现,4株细菌BS-1、B16、B169和1301的抑菌率在50.00%以上,其中B16的抑菌率最高,达到59.30%。经鉴定,BS-1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、B16、B169为莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)、1301为多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。该研究表明,BS-1、B16、B169和1301对苹果轮纹病的防治具有一定的应用前景。

常见植物真菌性病害拮抗酵母菌的筛选与鉴定

针对黄瓜枯萎病病原菌(黄瓜尖孢镰刀菌)、烟草赤星病病原菌(赤星霉菌)和紫云英根腐病病原菌(紫云英根腐病菌)3种常见植物真菌性病害,采用平板对峙法,从已分离保存的81株酵母菌中筛选出具有较强拮抗作用的10株酵母菌,通过形态学特征、生理生化特征、基因测序分析以确定其分类学地位.结果表明:酵母菌WYCCW10371对黄瓜尖孢镰刀菌拮抗效果最好,其抑菌率为46.2%,该菌株被鉴定为Hanseniaspora vineae;酵母菌WYCCW10196对赤星霉菌拮抗效果最好,其抑菌率为30.6%,该菌株被鉴定为Starmerella bacillaris;酵母菌WYCCW11142对紫云英根腐病菌拮抗效果最好,其抑菌率为20.7%,该菌株被鉴定为Pichia terricola.

Botryosphaeria dothidea营养体亲和性 (VCG_s)的研究(英文)

Botryosphaeriadothidea是重要的树木溃疡病菌。为揭示该菌种内群体遗传分化 ,本研究采用平板对峙培养法和非配对加权算术平均法 ,将我国北方Botryosphaeriadothidea分为 5个VCGs。经Shannon指数计算和T检验 ,表明Botryosphareiadothidea种群为一渐变种群 ,VCGs,VCGs 多样性指数由北向南递减。

不同培养条件对哈茨木霉菌抑制串珠镰刀菌能力的影响

目的:探究不同培养条件对哈茨木霉菌抑制串珠镰刀菌能力的影响。方法:采用平板对峙培养法,以抑菌率为指标,研究不同培养时间、碳源、培养基、pH值对哈茨木霉菌抑制串珠镰刀菌能力的影响。结果:不同培养时间、碳源、培养基、pH值对哈茨木霉菌抑制串珠镰刀菌的能力均有影响。培养到第4天时抑菌效果达到最佳,抑菌率为69.12%;不同碳源中,最优为葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和乳糖;PDA培养基培养对哈茨木霉菌抑制串珠镰刀菌的生长效果最佳;p H值为5~9时,哈茨木霉菌对串珠镰刀菌抑制率无差异。结论:PDA培养基培养到第4天达到最佳抑制效果,多种碳源及广泛的pH值范围均适合哈茨木霉菌对串珠镰刀菌的生长形成抑制。

百合枯萎病拮抗细菌的筛选、鉴定及其抑菌物质研究

【目的】筛选对百合枯萎病具有抑菌活性的拮抗细菌,对其抑菌活性物质进行初步分离纯化分析。【方法】以强致病力的百合尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为靶菌,采用系列稀释法和平板对峙法初筛拮抗细菌,并通过产铁载体能力、水解酶活性、土壤定殖力等多种生防特性指标进行复筛,结合形态学特征、生理生化指标和16S r RNA基因序列比对鉴定其分类地位;利用百合尖孢镰刀菌作为靶菌进行活性追踪,结合酸沉淀、快速柱色谱、HPLC等分离纯化手段,对菌发酵液中的抑菌活性物质进行纯化分析。【结果】在64株百合根际细菌和386株海洋细菌中进行初筛,得到9株对百合镰刀菌具有较强拮抗活性的菌株,最后筛选了1株拮抗活性较强且产铁载体能力和水解酶活性、土壤定殖能力较高的菌株11B91,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其抑菌活性物质初步推测可能为Iturin和Fengycin脂肽类化合物。【结论】菌株11B91在百合枯萎病的生物防治中具有潜在的应用价值,证实海洋来源的微生物也具有防治陆地植物病原菌的潜力,为植物病害的防治拓宽了思路。