人溶菌酶活性两种检测方法的比较研究

为了比较琼脂平板扩散法和RBB-R染料标记比色法测定溶菌酶活性的灵敏度和可重复性,分别以人溶菌酶标准品建立标准曲线,用两种方法对不同稀释倍数的人溶菌酶进行5次重复测定,并分析测定结果的标准差、变异系数和误差率。结果表明:两种方法测定溶菌酶的灵敏度分别为1.5和0.5μg·mL-1,RBB-R染料法标准差、变异系数、误差率均小于琼脂平板扩散法。用RBB-R染料标记比色法测定的正常鸡蛋清中溶菌酶含量为2.84-4.19mg·mL-1,与报道的相符,说明RBB-R染料标记比色法具有操作简便、定量准确和重复性好等优点,适合大批样品及微量样品的检测。

5株芽孢杆菌的分离鉴定、拮抗性试验与抑菌效价测定

通过对采集样品中细菌的分离与纯化,获得5株芽孢杆菌,经纯化培养后观察其个体和群体形态特征,并进行了16项生理生化特征鉴定。结果表明,L1为地衣芽孢杆菌、L2为蜡样芽孢杆菌、L3为短小芽孢杆菌、L4为蜡样芽孢杆菌、L5为蜡样芽孢杆菌;通过对5株指示菌的拮抗试验,确定了它们的抑菌图谱;从中挑选出拮抗性最强的两株菌,采用平板琼脂扩散法,测定了其发酵液的抑菌效价。在30℃,pH7.0,150r/min的条件下,恒温振荡培养24h,测其发酵液的抑菌效价:L1、L2菌株的发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌效价分别2000IU/ml、1000IU/ml;对枯草芽孢杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、1000IU/ml;对大肠杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、500IU/ml。

转基因小鼠乳汁中重组人溶菌酶活性的检测

目的:摸索精确检测本室制备的人溶菌酶(hLYZ)转基因小鼠乳汁中重组酶表达量的方法。方法:对溶菌酶检测的两种常规方法—琼脂平板扩散法和光学比浊法进行了改进,并以hLYZ标准品为检测对象,比较了改进后两种方法的优缺点。采用改进后的琼脂平板扩散法对转基因小鼠乳汁中表达的重组hLYZ进行检测。结果:在敏感性和可重复性方面,此两种方法无明显差别,但琼脂平板扩散法无特殊要求且简便易行。结论:改进的琼脂平板扩散法是一种更适宜于检测大批量微量样品中LYZ活性的良好方法。

香茶菜甲素体外抗菌活性研究

香茶菜是近几年国内外药物研究者极为重视的有开发价值的植物。目前国外对香茶菜的研究,以日本学者E.Fujita为首,已开发研究了药物专利达7～9种(有抗癌、抗菌、抗真菌、抗溃疡等)。国内自1975年从河南医学科学研究所研究冬凌草素开始,到目前成为商品药上市的有2～3种。 1985年,我所从湖南香茶菜提取了多种有效成分。本文报道香茶菜甲素对常见的革兰氏阳性、阴性菌、特别是痢疾杆菌体外抗菌作用。

蟹源拟态弧菌外毒素酶活性的分析

采用琼脂平板扩散法和指示凝胶技术对蟹源拟态弧菌HX-4菌株外毒素的酶活性及稳定性等特性进行了系统研究。结果显示:该菌外毒素具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素、卵磷脂酶和几丁质酶活性,不具有血浆凝固酶、脂酶和DNase酶活性。外毒素具有相对的稳定性,除热外,其它环境因素改变对其酶活性影响不大。指示凝胶技术试验结果表明:外毒素含有3种蛋白成份,相对分子量分别为154 KD、143 KD和117 KD,同时具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素活性。

花辛散的抑菌实验研究

目的探讨花辛散的抑菌效果,为临床治疗提供实验依据。方法采用琼脂平板扩散法对化脓性细菌进行药物敏感试验,并与外用西药利凡诺、呋哺西林等作比较。结果花辛散对三种细菌均有抑菌作用,且随浓度增加抑菌作用增强。其中对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌为中度敏感,与利凡诺、庆大霉素比较无显著差异;对铜绿假单胞菌抑菌作用明显,与利凡诺、庆大霉素比较有显著差异。结论花辛散对化脓性细菌尤其对铜绿假单胞菌有较强的抑菌杀菌效果,临床上治疗疔毒疮疡等化脓性感染时值得推广。

C端带Myc和多聚组氨酸双标记的重组人β-防御素-2在COS-7细胞的转染表达

本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素 - 2 (h BD- 2 ) ,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线。将 h BD- 2的全长 c DNA片段插入编码双重报告基因 Myc和 6个多聚组氨酸 (His)的真核表达质粒 pc DNA3.1/Myc- His(+) ,构建出 C端带 Myc和 6× His的 rpc DNA3.1/Myc-His(+) /h BD- 2。用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入 COS- 7细胞 ,分别从 m RNA和蛋白质水平分析 h BD-2的表达情况并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。采用 RT- PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约 2 4 0 bp的片段 ,其大小与预测相符。采用 Western blot法 ,用抗 His抗体检测到细胞可溶性蛋白在约 10 Kd处有强反应条带显示 ,其大小与该重组质粒结构中由 p CMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量 (10 .1)相符。双层肉汤琼脂平板扩散法结果显示 :分别与正常细胞可溶性蛋白和培养上清比较 ,转染重组质粒的 COS- 7细胞的可溶性蛋白及培养上清在金黄色葡萄球菌的平板上均形成明显抑菌环。这些结果提示 :所建立的 h BD- 2哺乳类动物细胞表达系统能有效表达和分泌活性 h BD- 2。

中蜂蜂毒和意蜂蜂毒抑菌作用分析

为开发无耐药性的传统抗生素的补充抗菌剂,试验以中蜂和意蜂蜂毒为研究对象,通过琼脂平板扩散法和最小抑菌浓度法(MIC)检测二者对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、伤寒杆菌、无乳链球菌、沙门氏菌和尖孢镰刀菌等8种病原细菌和1种真菌的抑制作用,同时比较2种蜂毒的抑菌活性差异;采用酶标仪和荧光显微镜试验验证蜂毒对无乳链球菌的抑制功效。结果表明,中蜂蜂毒、意蜂蜂毒对供试革兰氏阳性菌、真菌和部分革兰氏阴性菌都有抑制作用,随着蜂毒质量浓度的升高,抑菌圈直径逐渐增大,抑菌效果愈加明显;中蜂蜂毒和意蜂蜂毒对革兰氏阳性菌和真菌的最小抑菌质量浓度(MIC)均为5 mg/mL。酶标仪检测数据显示,阴性对照组在培养无乳链球菌12 h后OD值达到0.531,而质量浓度为0.5、2.5、5.0 mg/mL的意蜂蜂毒OD值仅为0.153、0.185、0.196。通过正置荧光显微镜观察发现,空白对照组有大量细菌繁殖,而青霉素组和蜂毒组中无细菌存在。研究进一步丰富和明确了蜂毒的抑菌特性,且证实了中蜂蜂毒和意蜂蜂毒二者的抑菌效果相当。

中草药蒲公英的体外抑菌试验

研究了中草药蒲公英的体外抑菌作用。对蒲公英水提物采用琼脂平板扩散法、试管二倍稀释法进行试验。实验得出,蒲公英对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)均为54.19mg/mL,最低杀菌浓度(MBC)均为216.75mg/mL;对绿脓杆菌的MIC为54.19mg/mL,MBC为108.38mg/mL;对粪肠球菌的MIC为108.38mg/mL,MBC 433.50mg/mL。结果表明,中草药蒲公英的水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、粪肠球菌均具有体外抑菌作用。

门诊妇科患者阴道念珠菌感染快速药敏方法的研究

目的缩短门诊妇科阴道念珠菌感染患者的药敏报告时间,突破门诊妇科阴道念珠菌感染患者多、而做药敏实验少的瓶颈。方法用鉴定药敏反应板显色法和沙保乐琼脂平板扩散法分别对门诊妇科阴道念珠菌感染患者的白带标本进行直接快速药敏实验,观察两种方法的优缺点,并进行比对和确定。结果改良沙保乐琼脂平板95%的标本能在24 h内长出均匀肉眼可见的菌落,3%的在48 h内长出均匀肉眼可见的菌落;2%的5 d后仍无菌生长;24~48 h后反应板显色法干扰很大,显色不清,结果很难判断。结论采用改良沙保乐琼脂平板扩散法进行念珠菌直接快速药敏,经济适用,可操作性强,能够在24 h内发出药敏报告;鉴定药敏反应板显色法干扰很大,显色不清,结果很难判断,不宜采用。

2种阿奇霉素分散片生物等效性研究

目的:研究2种阿奇霉素分散片的生物等效性。方法:20名男性健康志愿者随机交叉口服阿奇霉素分散片受试制剂或参比制剂500mg,用微生物琼脂平板扩散法测定血药浓度。采用3p97程序计算主要药动学参数及相对生物利用度,以评价生物等效性。结果:受试制剂与参比制剂的药-时曲线基本一致,Cmax分别为(407.672±36.025)、(413.903±36.945)ng.mL-1,tmax分别为(1.950±0.510)、(1.850±0.366)h,t1/2分别为(50.757±18.919)、(48.926±16.402)h,AUC0～120分别为(4998.110±721.271)、(4853.564±539.555)ng.h.mL-1,AUC0～∞分别为(5793.932±700.138)、(5570.704±614.011)ng.h.mL-1。阿奇霉素受试制剂的相对生物利用度为(99.0±17.6)%。结论:2种制剂具有生物等效性。

中药复方宫炎净注射液的体外抑菌试验

为了研究中药复方宫炎净注射液对奶牛子宫内膜炎的抗炎治疗作用,试验选用针对导致奶牛子宫内膜炎的主要病原菌(大肠杆菌、沙门杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌),采用琼脂平板扩散法研究中药复方宫炎净注射液的抑菌效果。结果表明:中药复方宫炎净注射液对大肠杆菌、沙门杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌高度敏感,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.160 9 mg/mL,而对链球菌的MIC为0.321 8 mg/mL。说明中药复方宫炎净注射液具有较强的抑菌作用,可用于临床治疗奶牛子宫内膜炎。

两个不同品牌洗衣粉抑菌效果的测定与研究

为了比较汰渍、碧浪两种不同品牌洗衣粉的抑菌效果,本试验采用滤纸片琼脂平板扩散法,将待测样品溶液转移至接种有大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)敏感菌株的培养基上,经培养后测定其抑菌圈的大小,以判断其抑菌能力的强弱。通过对抑菌圈直径的比较和两个均数的差异显著性分析,发现汰渍、碧浪两种洗衣粉的抑菌效果差异不显著。