钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用

目的 :探讨钙信号在尾加压素 Ⅱ (urotensin Ⅱ ,UⅡ )促血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖中的作用。方法 :在离体培养的VSMC上 ,用流式细胞仪和3 H TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应 ;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2 + 摄入的影响 ;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变。结果 :UⅡ (10 -9～ 10 -7mol·L-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成 ,并诱导细胞由静止向增殖状态转化。与对照组相比 10 -8mol·L-1UⅡ使细胞的增殖指数 [(G2 M +S) % ]增加 192 % (P <0 .0 1)。钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2 + 螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应 ,其中UⅡ (10 -8mol·L-1)与尼卡地平 (10 -5mol·L-1)共同孵育的VSMCDNA合成量仅为单纯UⅡ (10 -8mol·L-1)组的 5 9.0 %。UⅡ (10 -10 ～ 10 -8mol·L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2 + 的摄入增加 ,尼卡地平 (10 -5mol·L-1)也可显著对抗UⅡ (10 -8mol·L-1)对45Ca2 + 摄入的诱导作用 (P值均小于 0 .0 1)。用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2 + 浓度迅速升高 ,持续约 3min ,形成钙波。结论 :UⅡ可通过促进细胞Ca2 + 摄取和增加细胞内Ca2 + 浓度 。

雌孕激素负荷大鼠子宫平滑肌增殖及肌瘤内消制剂的干预作用

目的:研究雌、孕激素负荷大鼠子宫平滑肌增殖及肌瘤内消制剂的干预机制。方法:雌、孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型,观察子宫大体情况、病理改变,免疫组化法检测PCNA阳性表达(增殖指数),并用流式细胞仪测定细胞周期DNA含量。结果:模型大鼠较正常大鼠子宫显著增大;子宫平滑肌层局灶性增生,结构较紊乱;增殖指数显著升高,S期细胞数量升高。肌瘤内消制剂可抑制子宫平滑肌细胞增殖,使子宫重量减轻,直径缩小,降低增殖指数和S期细胞数量,改善子宫结构,与阳性对照组(米非司酮)无显著性差异。结论:雌、孕激素负荷可引起大鼠子宫平滑肌细胞的异常增殖,而肌瘤内消制剂可有效抑制这种增殖,改善子宫平滑肌结构,恢复正常细胞周期。

滨蒿内酯对大鼠哮喘模型气道平滑肌增殖及PKC-α蛋白表达的影响

目的观察滨蒿内酯对哮喘大鼠气道壁平滑肌增殖及PKC-α(protein kinase C-α,蛋白激酶C-α)表达的影响,探讨滨蒿内酯治疗哮喘的作用机制。方法40只雄性大鼠随机分成4组:正常对照组(N组)、哮喘组(A组)、地塞米松治疗组(D组)及滨蒿内酯治疗组(S组),以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘大鼠动物模型并给予相应治疗。测定各组肺功能,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)计数;用免疫组化法检测PKC-α蛋白表达水平、光镜下测定平滑肌层厚度及内外径。结果大鼠致敏2周及诱发哮喘4周后,肺功能测定表现为呼气时间延长,呼气峰压明显增大;A组BALF中的白细胞总数及Eos计数均较N组明显升高。哮喘模型组气道壁PKC-α蛋白含量和平滑肌层厚度较正常组均显著增加(均为P<0.001),气道内外径比值较正常组减小(P<0.001)。气道壁平滑肌层厚度与PKC-α蛋白表达呈正相关(rs=0.771,P<0.01)。结论滨蒿内酯能减轻哮喘大鼠气道壁平滑肌层的增厚并抑制PKC-α的表达。

针刺对再狭窄血管平滑肌增殖及P53基因表达

目的:探讨针刺对家兔实验性动脉血管平滑肌细胞增殖及P53基因表达的影响。方法:家兔随机分为正常对照组(8只),再狭窄组(24只)。再狭窄组应用PTCA球囊导管对实验兔行双侧髂动脉内膜剥脱以建立动脉粥样硬化模型,术后1个月髂动脉造影示50%以上狭窄者再行PTCA球囊扩张术,建立再狭窄模型成功后,将造模动物随机分成模型组、针刺组、普罗布考组,每组8只。自术前2 d至术后14 d为1疗程,针刺内关(双)、厥阴俞(双)、心俞(双)、膻中、足三里(双)等穴。标本石蜡切片,免疫组化,DAB显色,苏木素复染。观察各组血管平滑肌细胞增殖及P53基因表达。结果:模型组平滑肌细胞增殖明显高于正常对照组(P<0.01);针刺组P53基因表达高于模型组(P<0.01)。结论:针刺能抑制再狭窄兔血管平滑肌细胞增殖,促进P53基因表达,调节平滑肌凋亡,可能是针刺预防动脉再狭窄的作用机制之一。

中药抑制血管平滑肌增殖和迁移的作用机制研究概况

综述中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移作用机制的相关文献。VSMC主要存在于血管壁中膜,参与血管的收缩/舒张反应,进而维持正常的血压水平。在众多血管重构因子、炎症、机械损伤、高血压等影响下,中膜VSMC增殖、肥大并向内皮下迁移是导致内膜增厚、血管重构的重要病理基础,在动脉粥样硬化(AS)、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄的发生发展过程中起着十分关键的作用。如何有效维持VSMC收缩表型,抑制其异常增殖和迁移已成为AS、高血压、PCI术后再狭窄等心血管病的重要防治策略。

L-精氨酸及牛磺酸对溶血性磷脂酸诱导的血管平滑肌增殖的作用

目的 :观察牛黄酸 (TAU)及L -精氨酸 (L -Arg)对溶血性磷脂酸 (LPA)诱导的血管平滑肌 (VSMC)增殖的影响并探讨其可能的机制。方法 :贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC ;3H -胸腺嘧啶 (3H -TdR)掺入测定VSMCDNA合成 ;γ - 32 P -ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性。结果 :与对照组相比 ,LPA(10 - 8mol L)可分别使VSMC3H -TdR掺入和MAPK活性增高 5 8%和 16 4 % (P <0 .0 1)。L -Arg及TAU均能浓度依赖性地抑制LPA诱导的VSMC3H -TdR掺入和MAPK激活。混合应用牛磺酸和L -精氨酸对LPA诱导的VSMC增殖及MAPK活性的抑制作用显著大于单用L -Arg和TAU(P <0 .0 1)。结论 :L -Arg及TAU均能抑制LPA诱导的VSMC增殖和MAPK激活 ,而合用L

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖的研究

目的观察去乙酰化酶(Histone deacetylase, HDAC)抑制剂曲古菌素A (Trichostatin A,TSA)对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法以MTT法和BrdU掺入法测量血清诱导的VSMC,以10％FBS诱导VSMC进入S期,测量各期细胞比值。结果30-1 000 ng／ml TSA能显著抑制血清诱导的VSMC增殖,此效应呈时间和剂量依赖性,30-1 000 ng／mL TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖而影响细胞的活力,浓度在300 ng／mL以上的TSA干预48 h后光密度值(OD)小于实验初始值。10％FBS诱导VSMC进入S期比例显著增加(P<0．05),G1期细胞数减少(P<0．05)。而预先给予100 ng／mL TSA显著增加G0／G1期比例(P<0．05),进入S期细胞显著降低(P<0．05)。TSA呈时间依赖的抑制血清诱导VSMC表达cyclin D1和cycln A。TSA可以诱导多种肿瘤细胞发生凋亡。结论低剂量TSA并不显著增加VSMC凋亡,说明此浓度的TSA抑制VSMC增殖的作用不依赖与凋亡发生。大剂量TSA则显著增加VSMC凋亡的比率,caspase3激活参与了此过程。由此可见,TSA对于治疗血管增殖性疾病具有潜在的价值,尚需体内实验进一步证实。

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。

大鼠血管平滑肌增殖器官模型的建立及其机制探讨

为更好地研究血管平滑肌细胞增生性疾病的机理及防治,建立一种体外VSMC增殖器官模型,并对其机制作初步探讨。HE染色和免疫组化染色显示,大鼠主动脉段在体外拉伤内皮并经20%血清培养后,会出现中膜VSMCs的增殖。体外培养5 d后血管壁VSMC就出现不同程度增生,其中13 d的血管有明显斑块形成;免疫组织化学染色见有标记的增生VSMCs;RT-PCR检测显示,Hrg-1和SM22αmRNA的表达随培养天数增多而减少,至13 d检测不出。而在同样体外培养10 d情况下,与对照组相比,内皮损伤组培养上清中ET-1明显增多,Hrg-1、SM22a mRNA表达下调,Brdu标记增殖细胞增多,当加入内皮素受体阻断剂BQ123后标记细胞明显减少,其中血清培养组与无血清培养组相比,以上检测变化有显著性差异。结果表明,大鼠主动脉经体外培养能诱导平滑肌细胞异常增生并且表型从收缩型向合成型转化,ET-1和血清作用是该模型平滑肌增殖的主要因素。本模型为研究血管平滑肌增殖性疾病的机理和防治提供了一个较好的实验平台。

实验性动脉内膜增厚过程中平滑肌增殖的动态研究

对大鼠颈总动脉壁施机械性损伤刺激，制成各时间段的动脉内膜增厚模型，用５－澳脱氧尿嘧啶（Ｂｒ－ｄｕ）标记增殖的平滑肌细胞，观察血管壁平滑肌的增殖动态。结果显示中、内膜平滑肌均呈双峰曲线型增殖。

维甲酸对原发性高血压大鼠心肌血管平滑肌增殖的作用及其机制

目的:探讨维甲酸对自发性高血压大鼠(SHR)心肌、血管平滑肌增殖的影响和肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)所起的作用。方法:18只SHR大鼠随机分为全反式维甲酸治疗组、对照组、卡托普利治疗组,每组6只。分别予治疗组和对照组皮下注射全反式维甲酸(ATRA)10mg/Kg体重或溶媒,高血压药物治疗组予卡托普利0.25mg/Kg体重管饲,每天一次,均疗程4周。疗程结束后观察各组SHR大鼠心肌、血管平滑肌(VSMC)增殖细胞核抗原(PCNA)的变化以及心肌ACE-mRNA、ACE2-mRNA的表达。结果:维甲酸治疗组心肌、血管平滑肌增殖细胞核抗原(PCNA)表达显著低于对照组(P<0.01),卡托普利治疗组的PCNA表达也显著低于对照组(P<0.01),但维甲酸治疗组与卡托普利组比较也有显著差异(P<0.01);维甲酸治疗组ACE-mRNA的表达低于卡托普利组及对照组(P<0.01),卡托普利组ACE-mRNA的表达也低于对照组(P<0.01);而维甲酸组ACE2-mRNA的表达则高于对照组及卡托普利组(P<0.01),后两组之间则无显著差异(P>0.05)。结论:维甲酸能抑制SHR模型心肌、血管平滑肌PCNA的表达,并在增加ACE2-mRNA表达的同时减少ACE-mRNA的表达,从而有可能干预增殖性血管疾病的病程。

含β射线的软性血管外模型对移植血管内膜增生及平滑肌增殖的抑制作用

目的观察含β射线３２磷（３２Ｐ）的软性血管外模型（ＳＥＭ）对移植血管内膜增生（ＩＨ）及平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的抑制作用。方法作者在２４只家兔股静脉———股动脉移植模型上，应用内皮素Ⅰ受体基因（ＥＴＡｃＤＮＡ）原位分子杂交及计算机图像分析技术，在不同条件下（分对照组、阿斯匹林（ＡＳＰ）组和３２Ｐ组），术后（１、２、４、１２周）不同时间内定量观察ＥＴＡｃＤＮＡ表达情况及内膜相对厚度。结果（１）含β射线的ＳＥＭ具有显著抑制移植血管ＳＭＣ增殖的作用，其作用可延续至移植术后１２周。（２）含β射线的ＳＥＭ对于早、中期（１～４周）移植血管内膜增生具有显著的抑制作用。（３）ＡＳＰ在本实验条件下并无明显的抑制ＳＭＣ增殖及ＩＨ的作用。结论含β射线３２Ｐ的ＳＥＭ对移植血管内膜增生及ＳＭＣ增殖有显著抑制作用。

罗红霉素对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增殖及P27^kip-1表达的影响

近年研究发现气道平滑肌细胞（ASM）在支气管哮喘（简称哮喘）气道重塑的发生、发展中发挥着重要的作用。罗红霉素除抗感染作用外，还有抗哮喘作用。我们通过建立慢性哮喘模型并给予罗红霉素干预，探讨罗红霉素对ASM P27^kip-1。表达以及ASM增殖的影响。

血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路的交互调节

目的探讨血管平滑肌细胞增殖过程中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路之间是否存在交互调节作用。方法植块法原代培养Wistar大鼠血管平滑肌细胞。Western blot测定钙调磷酸酶和蛋白激酶G Iα蛋白的表达。定磷法测定钙调磷酸酶活性,MTT法测定血管平滑肌细胞的增殖。结果苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞钙调磷酸酶的表达和活性可被一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMP增强。应用环孢素A干预增殖细胞后蛋白激酶G Iα蛋白表达量较对照组明显提高(P<0.01),而加入苯肾上腺素刺激后蛋白激酶G Iα蛋白的表达较对照组也有明显提高(P<0.05),但较5 mg/L环孢素A干预组减少了36.7%,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。经0.5 mg/L环孢素A预处理后,苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞吸光度降低36.67%,S-亚硝基-N-乙酰青霉胺、Sp-8-pCPT-cGMP或Rp-8-pCPT-cGMP并不能进一步抑制或升高已升高的吸光度。结论蛋白激酶G介导钙调磷酸酶信号抑制血管平滑肌细胞增殖,并且蛋白激酶G与钙调磷酸酶能够交互调节影响血管平滑肌细胞增殖进程。

经典瞬时感受器电位通道对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响

目的:探讨经典瞬时感受器电位通道(TRPC)对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响。方法:选取人体尸检标本的颈动脉中明显有动脉粥样硬化的组织进行处理后经染色检测其TRPC6蛋白表达情况。取小鼠饲养高脂饲料12周后建模对比常规喂养组的TRPC6斑块表达情况。基因敲除后,动脉动脉粥样硬化斑块中的平滑肌细胞及胶原纤维含量情况、血管壁增厚及血流阻力情况。结果:TRPC6在人体动脉粥样硬化斑块中的表达显著更高,经免疫组织化学(IHC)染色其平均光密度显著更高。小鼠模型组(0.004±0.010)高于对照组(0.063±0.012),差异有统计学意义(P<0.05)。基因敲除后,模型小鼠的动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞含量(16.55±1.12)显著少于之前的(28.21±2.23),差异有统计学意义(P<0.05);平滑肌细胞(27.26±2.51)显著高于之前的(20.92±1.61),差异有统计学意义(P<0.05);而胶原纤维差异不明显。基因敲除后,能明显改善小鼠的血管壁增厚及血流阻力情况。结论:TRPC6在动脉粥样硬化斑块中的表达显著调高,提示其参与了动脉粥样硬化斑块的发生及发展过程。

滨蒿内酯对大鼠哮喘模型α—SMA的表达及平滑肌增殖的影响

目的 观察滨蒿内酯对哮喘大鼠气道壁平滑肌增殖及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响，探讨滨蒿内酯治疗哮喘的作用机制。方法40只雄性大鼠随机分成4组：正常对照组（N组）、哮喘组（A组）、地塞米松治疗组（D组）及滨蒿内酯治疗组（S组），以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘大鼠动物模型并给予相应治疗，光镜下测定平滑肌层厚度及内外径，免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织的表达。结果哮喘模型组大鼠表现为呼气时间延长，呼气峰压明显增大，模型复制成功；A组气道壁α-SMA蛋白表达阳性率和平滑肌层厚度较N组均显著增加（均为P〈0．01），气道内外径比值较正常组减小（P〈0．01），S组α-SMA蛋白表达及平滑肌层厚度较A组减少，两两比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论滨蒿内酯能够抑制α-SMA的表达，减轻气道炎症反应、减轻平滑肌增殖，延缓气道重构进程。

安立生坦对低氧性肺动脉高压大鼠肺血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨安立生坦对低氧性肺动脉高压大鼠模型肺血管重塑的作用及其内在的分子机制。方法 40只健康SD大鼠采用区组随机化分组方法分为模型组、药物治疗组、安慰剂组及对照组各10只。其中模型组、药物治疗组、安慰剂组大鼠置于低氧舱中饲养。第3周起药物治疗组大鼠进舱前给予安立生坦5 mg/kg灌胃,安慰剂组大鼠于给予生理盐水2 ml灌胃;对照组则置于正常环境中饲养4周。4周后测定各组平均肺动脉压力(m PAP)、右心室收缩压(RVSP);观察肺血管形态学变化,检测右心肥厚指数RV/(LV+S)、管壁厚度占外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%);检测肺血管中Bcl-2、Caspase-3的表达。结果 1.模型组大鼠m PAP和RVSP明显高于对照组(P <0. 05);而药物治疗组组较模型组及安慰剂组显著降低(P <0. 05),与对照组相比无统计学差异(P> 0. 05)。2.与对照组相比,模型组和安慰剂组肺动脉中Bcl-2表达显著升高(P <0. 05);而与模型组、安慰剂组相比,药物治疗组Bcl-2蛋白表达均降低(P <0. 05)。相反,与对照组相比,模型组、安慰剂组Caspase-3表达明显降低(P <0. 05);与模型组、安慰剂组相比,药物治疗组升高(P <0. 05)。结论安立生坦可能通过抑制对动物模型肺动脉平滑肌细胞中Bcl-2的表达,促进Caspase-3的表达,有效降低低氧性肺高压大鼠模型肺动脉压力,有效逆转肺血管重塑。

用血清药理学方法观察芎芍胶囊对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的 :采用血清药理学方法观察芎芍胶囊对内皮素 (ET)致兔胸主动脉平滑肌细胞 (SMC)增殖凋亡的影响。方法 :分离正常兔胸主动脉SMC ,并传代培养 ,用ET造成胸主动脉SMC增殖模型。给正常兔灌胃芎芍胶囊混悬液 10天 ,制备含药血清 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法观察其对SMC增殖凋亡的影响。结果 :ET能明显促进SMC增殖 ,芎芍胶囊含药血清可减少S +G2 期SMC所占比例 ,对ET所致SMC增殖有明显抑制作用 ,并呈剂量依赖性 ,大剂量时尚可诱导SMC凋亡。结论 :芎芍胶囊可明显抑制ET所致SMC增殖 ,并有一定的诱导SMC凋亡的作用。