TGF-β_1在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记)纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧(含21%O2、5%CO2、74%N2)和低氧(含1%O2、5%CO2、94%N2)条件下培养1、4、7 d,用核酸干扰法(RNAi)阻断TGF-β1的表达,用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)和Western blot分别检测各组细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达,并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达(P<0.05),RNAi沉默TGF-β1基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量(P<0.05),随着低氧培养时间的延长,肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加(P<0.05);阻断TGFβ-1表达后,平滑肌样细胞的转化率明显降低(P<0.05)。结论肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;低氧可明显促进转分化,TGF-β1在此转分化过程中起重要作用。

犬骨髓多能成体祖细胞的体外培养、鉴定及向平滑肌样细胞的诱导分化

目的:探讨犬骨髓多能成体祖细胞(MAPC)的体外培养条件、生物学特性及其向平滑肌样细胞分化的可能性。方法:观察体外培养犬骨髓多能成体祖细胞的形态、生长情况,检测其表面标志,利用流式细胞技术检测MAPC的生长周期及特异表面标志表达率;并以分化培养基诱导培养,采用RT-PCR方法检测骨髓多能成体祖细胞OCT-4及分化细胞SM-MHC (smooth muscle cells-myosin heavy chain)表达;检测分化细胞有无平滑肌细胞表面标志的表达。结果:光镜下观察犬骨髓多能成体祖细胞体积偏大,长多角型,数个细长伪足,细胞核大,胞质丰富,细胞增殖能力旺盛;表达表面标志CD13和SSEA-1.不表达CD44、CD45、CD133和MHCⅡ;RT-PCR结果显示表达OCT-4。诱导分化后,分化细胞表达平滑肌细胞表面标志——α^- SMA、calponin、SM-MHC;RT-PCR结果显示表达SM-MHC。结论:体外成功培养犬骨髓多能成体祖细胞,具有与文献报道类似的生物学特征;MAPC在一定诱导条件下具有向平滑肌样细胞分化的潜能。

bFGF和PDGF-BB对内皮祖细胞分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞增殖和迁移的影响

目的探讨内皮祖细胞分化的内皮样和平滑肌样细胞在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下的增殖和迁移能力。方法将分离、培养及纯化的内皮祖细胞培养5天后进行分组:对照组、碱性成纤维生长因子组和血小板源长因子BB组。对照组使用20%胎牛血清的DMEM培养基;碱性成纤维生长因子组和血小板源生因子BB组在20%胎牛血清的DMEM培养基中分别添加碱性成纤维生长因子(30μg/L)和血小板源生长因子BB(40μg/L)。免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞以及检测内皮祖细胞内皮方向分化标记物CD31和vWF,及平滑肌方向分化标记物α-SMA和Calponin。将分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞用MTT法和Transwell小室分别检测其增殖活性和迁移能力。结果与对照组比较,内皮祖细胞经碱性成纤维生长因子或血小板源生长因子BB诱导后呈现较强的内皮细胞(CD31,vWF)或平滑肌细胞(α-SMA,Calponin)的荧光染色,被诱导细胞分别称为内皮样细胞和平滑肌样细胞;碱性成纤维生长因子促进内皮样细胞和血小板源生长因子BB促进平滑肌样细胞增殖的作用在一定范围内具有时间(0～48 h)和浓度(碱性成纤维生长因子:0～16μg/L;血小板源生长因子BB:0～18μg/L)依赖效应。结论碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB分别可以促进内皮祖细胞分化成内皮样细胞和平滑肌样细胞,并且在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下具有明显的增殖和迁移能力。

骨髓间充质干细胞向血管平滑肌样细胞的诱导

背景：已经证实应用维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷作为诱导剂,可以在体外建立胚胎干细胞分化为平滑肌细胞的模型。目的：尝试应用维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷诱导犬骨髓间充质干细胞向血管平滑肌样细胞分化,评价其作为血管壁种子细胞的可行性。设计、时间及地点：随机对照,体外诱导细胞学实验,于2006-05/2007-12在北京协和医院胸心外科实验室和桂林医学院附属医院中心实验室完成。材料：成年杂种犬10只,雌雄不拘,用于取骨髓。方法：骨髓穿刺法获取犬骨髓,密度梯度离心和贴壁生长的方式提取单个核细胞;取第2-4代细胞,用含维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷的培养液诱导、分化为血管平滑肌样细胞。主要观察指标：相差倒置显微镜观察细胞形态学;免疫荧光显微镜观察β肌动蛋白的表达;电镜观察细胞超微结构的改变。结果：骨髓间充质干细胞经苷诱导2周后细胞融合成片形成峰谷样外观,β肌动蛋白呈阳性表达。透射电镜显示胞浆内可见肌丝形成,表现出比较原始的血管平滑肌细胞的特点。结论：维甲酸和双丁酰环磷酸腺苷可诱导骨髓间充质干细胞在体外定向分化为具有平滑肌细胞特性的细胞,将其作为构建组织工程化血管的种子细胞是可行的。

西地那非抑制低氧肺血管内皮向平滑肌样细胞的转分化及其机制

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)向平滑肌样细胞的转分化及西地那非(sildenafil)对其的作用和可能机制。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,分为常氧组(含21%O2,5%CO2和74%N2)、低氧组(含1%O2,5%CO2,94%N2)、常氧+sildenafil组和低氧+sildenafil组。分别培养1d和7d。免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化;用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达。结果(1)免疫荧光结果显示低氧7d组PAECs中α-SM-actin阳性率(2.07‰±0.06)(P<0.05)明显增高,阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1d组均未见α-SM-actin的阳性表达;(2)RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧7d组(0.23±0.03)(P<0.05)明显增高,常氧各组和低氧1d组均未检测出其表达。(3)用sildenafil后,平滑肌样细胞的转分化率明显低于对应低氧7d组(1.02‰±0.05;P<0.05);Myocardin mRNA水平也明显降低(0.09±0.02)(P<0.05)。结论低氧可促进PAECs向平滑肌样细胞的转分化,sildenafil在一定程度上可抑制其转分化,其可能机制是通过抑制myocardin基因的表达而实现的。

犬骨髓单个核细胞诱导分化为平滑肌样细胞

目的:探讨体外诱导骨髓单个核细胞分化为平滑肌样细胞的可行性,为构建组织工程器官提供种子细胞。方法:实验于2005-10/2006-12在教育部重点实验室,实验室等级1级的首都医科大学宣武医院外科实验室完成。实验材料:体质量20～30kg成年雌性杂种犬6只,由北京市科宇实验动物养殖中心提供(许可证号为SCXK(京)2000-0015),动物饲养级别1级。实验方法:①骨髓单个核细胞的分离培养:穿刺健康成年实验犬髂前上棘,抽取骨髓10mL,加入肝素抗凝,以等体积PBS充分混匀,4℃条件下转入离心管中,取20mL淋巴细胞分离液,将稀释骨髓按1∶1小心加在分离液的界面上,用水平离心机以1500r/min离心10min后,单个核细胞位于血浆和离心液界面层。吸取界面层单个核细胞层,以含体积分数为0.1胎牛血清的PBS冲洗3次,备用。②骨髓单个核细胞诱导分化为平滑肌样细胞:将收获的犬骨髓单个核细胞以由含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM/F12混合培养液、0.5μg/L内皮细胞生长因子、2μg/L碱性成纤维生长因子、10μg/L血小板源性生长因子BB、100μg/L胰岛素样生长因子、1mmol/L磷酸维生素C、0.04mmol/L脯氨酸组成的诱导培养基重悬,以1×109L-1种植于胶原铺底的培养瓶中,置37℃、含50mL/LCO2饱和湿度培养箱中,进行诱导培养。倒置相差显微镜下观察细胞形态特征。在诱导培养后第1,3,5,7,9,11天绘制细胞生长曲线。采用免疫组织化学方法进行细胞表型鉴定,并评价细胞生长增殖情况。结果:①骨髓单个核细胞向平滑肌样细胞诱导的细胞生长曲线:接种第1,3,5,7,9,11天计数每孔细胞数分别为(2.73±0.18)×108,(3.17±0.36)×108,(7.35±1.28)×108,(23.61±1.56)×108,(53.48±3.47)×108,(48.51±5.36)×108L-1。②免疫组织化学方法鉴定细胞表型:原代细胞仅少数α-平滑肌肌动蛋白染色明显阳性,明显阳性细胞约占总数的(60.5±5.9)%,细胞内肌丝样结构不明显,而平滑肌肌球蛋白重链、碱性钙调宁蛋白染色阴性;P3代细胞生长5d,细胞生长汇合后,绝大部分诱导后细胞α-平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链、碱性钙调宁蛋白染色阳性,可见胞浆内清晰的肌丝样结构,明显阳性细胞分别占细胞总数的(86.2±13.5)%,(78.7±10.2)%,(76.63±13.8)%,明显高于原代细胞(P<0.05)。③平滑肌样细胞的亚型分析:原代细胞爬片标本Flk-1染色多数呈阳性,第3代细胞Flk-1染色几乎阴性,阳性细胞胞膜、胞浆着色呈棕黄色。原代及传代细胞Vimentin染色均呈阳性,阳性细胞胞浆着棕黄色。本组细胞Desmin染色阴性。结论:骨髓单个核细胞可以被定向诱导成为平滑肌样细胞,能够满足组织工程种子细胞的要求。

犬平滑肌样细胞和胶原包埋PGA支架组织的相容性

目的研究骨髓间充质干细胞所诱导的犬平滑肌样细胞和胶原包埋聚羟基乙酸(PGA)支架的组织相容性。方法胶原包埋PGA构建复合支架,犬骨髓间充质干细胞诱导血管平滑肌样细胞,评价组织相容性。结果HE染色见胶原包埋PGA组有平滑肌样细胞生长;甲苯胺蓝染色见平滑肌样细胞被染成浅蓝色,胶原包埋PGA组较单纯PGA组明显增多;电镜观察,胶原包埋PGA组可见到细胞在支架上贴附和生长良好。结论细胞和胶原包埋PGA的支架组织相容性良好。

不同质量浓度时转化生长因子β1将如何诱导大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞的分化

背景:在内膜损伤后炎症反应的过程中,间充质干细胞可以从骨髓释放到病灶处,参与损伤修复。但目前尚缺乏在细胞水平对转化生长因子β1如何促进骨髓间充质干细胞转化为平滑肌样细胞的分子机制研究。目的:揭示体外实验条件下,血管急性损伤时不同质量浓度转化生长因子β1如何诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,体外诱导细胞观察,于2008-01/2009-05在上海交通大学医学院附属第九人民医院SPF级实验动物中心和上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成。材料:雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组、模型组,12只/组。另取4周龄雄性SD大鼠6只,用于分离制备骨髓间充质干细胞。方法:①模型组大鼠建立颈总动脉急性损伤模型。取正常对照组及模型组大鼠损伤后1,3,7d的血清,运用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清中转化生长因子β1的水平。②第1次传代后的大鼠骨髓间充质干细胞以(1.0～3.0)×105个/100mm培养皿的密度接种,设立2组:常规培养组仅加入含体积分数为20%的胎牛血清高糖DMEM基础培养液;转化生长因子β1诱导组在常规培养组基础上,分别给予1,3,5,10μg/L转化生长因子β1诱导1周。主要观察指标:损伤后血清中转化生长因子β1的表达;相差倒置显微镜观察诱导后细胞形态学变化;平滑肌细胞标志物α-肌动蛋白的表达。结果:①正常对照组大鼠血清中转化生长因子β1的质量浓度较低;模型组大鼠损伤后1d血清中转化生长因子β1的质量浓度即已升高,损伤后3d达高峰,损伤后7d明显下降,但仍未完全恢复到基础水平。②骨髓间充质干细胞经转化生长因子β1诱导1周后,细胞融合成片,形成峰谷样外观。③免疫细胞化学检测结果显示,与常规培养组比较,1,3,5,10μg/L转化生长因子β1诱导组平滑肌细胞分化率均明显增加,尤其是5,10μg/L转化生长因子β1诱导组差异有显著性意义(P<0.01)。实时定量PCR结果与免疫细胞化学检测结果相似。结论:急性血管损伤后大鼠血清中转化生长因子β1呈高表达,并在损伤后3d达高峰。在体外,经类似此高峰浓度的转化生长因子β1诱导后,对骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化有较好的促进效应。

低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用

目的探讨低密度脂蛋白诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化及myocardin在其分化过程中的作用。方法不同浓度血清培养骨髓间充质干细胞条件下加以低密度脂蛋白刺激。细胞分为常规培养组,常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组。免疫细胞化学检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达、RT-PCR法检测myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA的表达。结果免疫细胞化学结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链的表达增强(P<0.05);20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组与20%胎牛血清组比较上述三种蛋白表达增强(P<0.05);平滑肌肌动蛋白及平滑肌肌球蛋白重链蛋白的表达与myocardin表达呈正相关(r=0.9018,P<0.05;r=0.7969,P<0.05)。RT-PCR结果显示常规培养+低密度脂蛋白刺激组(25 mg/L),20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组分别与常规培养组比较myocardin、平滑肌肌动蛋白及平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达明显增强(P<0.05);20%胎牛血清培养组,20%胎牛血清+低密度脂蛋白刺激组比较上述三个指标的表达也增强(P<0.05)。平滑肌肌动蛋白、平滑肌钙结合相关蛋白mRNA表达与myocardin正相关(r=0.9295,P<0.05;r=0.8940,P<0.05)。结论高浓度血清,低密度脂蛋白均可诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化,低密度脂蛋白联合20%胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化的作用最强。myocardin可能在此过程中起重要作用。

外周血单个核细胞向平滑肌样细胞分化的体外实验研究

目的旨在完善外周血单个核细胞向平滑肌细胞培养分化的方法。方法密度离心分离外周血单个核细胞,悬浮于M-199培养基中培养,不同时间予以血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)促进外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化,并根据细胞形态以及逆转录-聚合酶链反应、Western印迹法和流式细胞技术检测细胞表型对培养细胞予以鉴定。结果于第8天、第30天予以PDGF-BB刺激15 d后能较好地使培养细胞表达平滑肌细胞的表型,同时表达CD34;而第1天、第5天及第60天予以PDGF-BB刺激15 d后则不能使细胞表达平滑肌细胞表型。结论体外PDGF-BB促进外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化具有时间效应,适当时间PDGF-BB刺激方能使外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化可能说明外周血单个核细胞为更原始的前体细胞,向平滑肌细胞分化是其多向性分化功能的一部分。

TGF-β1诱导SUVEC向平滑肌样细胞转分化的初步研究

用不同浓度TGF-1β对猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)进行诱导,研究体外诱导SUVEC向平滑肌细胞分化的可能性。倒置显微镜下观察诱导前后细胞形态的变化,并采用免疫细胞化学SP法对细胞表面特异性标志物进行染色。结果表明,诱导后细胞失去内皮细胞典型的铺路石样形态,而呈现出肌成纤维样细胞;对诱导后的细胞进行免疫组化检测,发现5～10ng.mL-1 TGF-1β诱导后,平滑肌特异性蛋白-αSMA的相对表达量均显著升高;而浓度升高为20 ng.mL-1时,升高不显著;内皮细胞特异性标志(F-ⅧRAg)的表达均显著下降。该研究表明TGF-1β可诱导猪脐静脉血管内皮细胞向肌样细胞分化,但诱导分化的能力与TGF-1β的浓度有关。

反义Smad3阻断TGF-β1信号转导对大鼠BMSC分化成平滑肌样细胞的影响

目的研究信号蛋白Smad3在TGF-β1促大鼠骨髓间充质干细胞分化成平滑肌样细胞中的作用。方法运用免疫细胞化学、RT—PCR证实BMSC中存在TGF-β1／smad3信号传导通路的基础上，运用反义Smad3进行干预。实验分三组：反义Smad3组（反义Smad3腺病毒转染大鼠BMSC），空载对照组（空载腺病毒转染大鼠BMSC）及未转染组；一组均予10ng／mL浓度的TGF-β1诱导1W。通过免疫细胞化学和实时定量PCR比较反义Smad3干预后各组SMut=actin的表达变化。结果经免疫细胞化学法、RT-PCR检测证明BMSC中存在TGF-β1／smad3表达。运用针对靶基因Smad3的反义技术干预后，经10ng／mLTGF-β1诱导，相比未转染组及空载组，反义smad3腺病毒转染组SMα-actin阳性细胞表达数明显减少。实时定量PCR也显示反义smad3组SMα-actinmRNA的相对含量明显低于未转染组（O．460±0．259VS2．932±0．375，P〈0．01），而空载组与未转染组相比无明显统计学差异。结论TGF-β1促BMSC成平滑肌样细胞分化的过程中受Smad3选择性调节，Smad3可能是TGF-β1促BMSC分化成平滑肌样细胞的细胞内信号途径。

微创性损伤诱发晶状体上皮向平滑肌样细胞分化的探讨

目的建立微创性白内障动物模型,探讨晶状体上皮向平滑肌样细胞的分化。方法4～6周C57BL/6j小鼠24只,随机分为实验组和对照组。实验组采用微创穿破晶状体后囊膜,注入10μLPBS;对照组仅玻璃体腔内注射等量的PBS,术后行眼部检查及裂隙灯照相。术后第3、7、14、28d取眼球,行组织病理学观察及平滑肌肌动蛋白(SMA)、波形纤维蛋白(Vim)免疫组织化学染色。结果术后1～3d,实验组11只眼晶状体相继发生不同程度的白色混浊。混浊眼球术后3d,组织病理学观察示晶状体赤道区上皮开始沿创口处爬行;7d后囊下梭形细胞层增多3～6层,细胞体积增大。14～28d梭形细胞层数基本保持不变。免疫组织化学染色显示增生的梭形细胞SMA强阳性,Vim阴性。对照组均无上述变化。结论微创性损伤晶状体出现白内障,能诱发晶状体上皮向平滑肌样细胞分化。

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向平滑肌样细胞分化过程中myocardin的表达

目地探讨血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化为平滑肌细胞的可行性及myocardin在此过程中的表达变化。方法采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞,血小板源性生长因子BB(50μg/L)联合高浓度胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞,分别于诱导前,及诱导4d和8d后用免疫细胞化学法检测细胞平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin的表达。结果免疫组织化学显示,诱导前及诱导4d和8d时,平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin三种蛋白的表达逐渐增强,平均灰度值逐渐降低,不同时间点之间比较差异有显著性(P<0.05)。结论血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清可有效诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化。Myocardin在此分化过程中可能起了重要作用。

肺泡巨噬细胞在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用

研究低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及肺泡巨噬细胞(PAM)在此转分化过程中的作用。将经免疫磁珠法(用血小板—内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记)纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧(含21%O2、5%CO2和74%N2)和低氧(含1%O2、5%CO2,94%N2)条件下培养1、4、7 d,并在低氧条件下用肺泡巨噬细胞条件培养基与肺动脉内皮细胞共培养,用免疫组化法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(-αSM-actin)的表达,结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果显示:随着低氧培养时间的延长,肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加(P<0.05);与肺泡巨噬细胞条件培养基共培养后,平滑肌样细胞的转化率明显升高(P<0.05)。肺动脉内皮细胞中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;低氧可明显促进转分化,肺泡巨噬细胞在此转分化过程中起重要作用。

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为血管平滑肌样细胞的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为构建小口径血管种子细胞的可行性及其诱导机制。方法取体重100 g左右雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠后肢股骨和胫骨骨髓,采用原代全骨髓培养法,多次传代纯化,体外扩增后,观察细胞形态,并用免疫荧光及流式细胞仪检测CD34、CD90、CD105细胞因子,鉴定是否为BMSCs。将BMSCs分为实验组和对照组:实验组使用含全反式维甲酸及二丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP)的低糖基本培养基(DMEM-LG)培养;对照组采用普通的DMEM-LG培养。观察诱导后细胞形态,检测诱导后第5代细胞平滑肌α-肌动蛋白(SM--αactin)、钙结合蛋白(calponin)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达情况。结果原代培养所获取的细胞经过多次传代培养后呈长梭形,呈现特征性的漩涡状生长,检测CD34阴性,CD90、CD105阳性。实验组经诱导后的BMSCs生长较缓慢,略呈椭圆形,检测SM--αactin、calponin、SMMHC显著表达;对照组的细胞形态及生长速度和实验组BMSCs相似,但不表达SM--αactin、calponin和SMMHC。结论 BMSCs在全反式维甲酸的诱导下可向血管平滑肌样细胞表型分化,可为组织工程构建小口径血管提供平滑肌种子细胞。

肺淋巴管平滑肌瘤病临床及病理特征分析

肺淋巴管平滑肌瘤病(pulmonay lymphangiolei-omyomatosls,PLAM)罕见,主要发生于育龄期女性,是一种类似平滑肌细胞的不成熟的短梭形细胞在间质中的广泛浸润,通常伴随肺实质囊性变,一般为独立性疾病,有时与遗传性结节性硬化症相伴随[1],现认为是血管周上皮样细胞肿瘤(PEComa)的一种。PLAM的发病机制目前仍未明确阐明,对其认识以及治疗仍然有限。

大鼠主动脉内皮细胞和平滑肌细胞的原代培养及生物学特性比较

目的培养大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞,细胞纯化与鉴定,比较生物学特性的差异。方法采用血管环贴壁法培养动脉内皮细胞,组织块贴壁法培养动脉平滑肌细胞,并采用有限稀释法挑选内皮细胞单克隆,免疫细胞荧光鉴定二者的特异性标志,相差显微镜观察二者单个细胞及细胞群体在形态上的差异性,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,比较二者对胰酶消化,粘附,冻存后复苏的情况。结果血管环贴壁法成功培养血管内皮细胞,组织块培养法成功培养出血管平滑肌细胞,内皮细胞能够形成单克隆集落,培养的细胞均表达相应的特异性标志,内皮细胞增殖速度和平滑肌细胞有差异,内皮细胞对胰酶的耐受性较差,内皮细胞粘附所需时间短,对冻存后的耐受性较好。结论组织块贴壁法适合内皮细胞和平滑肌细胞的培养,有限稀释法能够纯化原代培养的内皮细胞,大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞在细胞形态、增殖、粘附、对胰酶的反应、冻存后复苏均存在差异。