平滑肌特异性肌动蛋白在慢性丙型肝炎肝组织中的表达

为探讨平滑肌特异性肌动蛋白(SMAI)在慢性丙型肝炎肝组织中的表达情况及其与疾病程度和干扰素(IFN)治疗疗效之圆的关系，我们用免疫组化技术对11例慢性丙型肝炎患者肝活检标本作了观察，现报告如下。

肌动蛋白基因在豌豆幼苗的发育阶段和器官特异性表达

从豌豆幼苗及开花植株各器官提取总RNA，以豌豆肌动蛋白基因（PEAC1）为探针，鉴定肌动蛋白基因在不同器官的表达。Northern和Dotblot结果表明，肌动蛋白基因在豌豆中的表达具有发育阶段特异性，它倾向于在豌豆5天苗的芽和2天苗的报中特异表达。

豌豆肌动蛋白异型体基因的特异性表达

将分属三类豌豆 (Pisumsativum)卷须肌动蛋白异型体 (PEAc)的基因 3’端进行了亚克隆 ,并利用限制性内切酶从中切取了完整的 3’非翻译区片段 ,将之做为特异性探针进行DIG标记 ,并对不同发育时间豌豆根、茎、叶及花粉中提取的总RNA进行点杂交分析。发现其中I类 (PEAcI)和II类 (PEAcII)在根、茎、叶中都有表达 ,但存在发育时间上的表达特异性 ,尤其在叶中的差异较明显。而III类 (PEAcIII)与前二者的差别更大 ,仅发现其在 2d及 2 8d的根、7d的茎及 1 8d的叶中有表达。在花粉中 ,只有PEAcII有少量的表达 ,说明三类异型体基因的表达还存在组织特异性。

Nexilin在平滑肌特异性YAP1敲除小鼠膀胱中的表达及其调控机制研究

目的探索在膀胱平滑肌细胞中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein1,YAP1)对Nexilin表达的调控机制。方法构建平滑肌特异性YAP1敲除小鼠(SMMHC-Cre^(ERT2)/YAP^(F/F));选取其中12只,随机分为YAP1敲除组及野生型组,每组6只,分别以他莫昔芬或乙醇溶剂腹腔注射;2周后以免疫印迹试验(Western blot)检测膀胱组织总YAP(tYAP)及Nexilin的蛋白表达水平。体外培养人膀胱平滑肌细胞,以溶解于含4%BSA无菌超纯水的鞘氨醇-1-磷酸(S1P)处理2 h及4 h;或通过重组腺病毒过表达YAP1,或通过siRNA敲低YAP/TAZ(YAP1/WWTR1)后再以S1P处理,同时设置相应的阴性对照(NC)及溶剂(BSA)对照,逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NEXN的表达水平。采用t检验、单因素方差分析。结果YAP1敲除组小鼠膀胱平滑肌组织中tYAP和Nexilin表达水平分别为野生型组的(0.19±0.05)倍和(0.34±0.04)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);在人膀胱平滑肌细胞中,S1P组NEXN的mRNA表达水平于2 h和4 h时分别为BSA组的(1.32±0.13)倍和(2.11±0.44)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);YAP1过表达组的NEXN表达水平为空载体组的(1.78±0.15)倍(P<0.05);siYAP/TAZ+BSA组的NEXN表达水平为NC+BSA组的(0.75±0.05)倍(P<0.05);siYAP/TAZ+S1P组的NEXN表达水平与NC+S1P组比较显著下调(P<0.05),且与siYAP/TAZ+BSA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在膀胱平滑肌细胞中,转录共激活因子YAP1对Nexilin的表达具有调控作用;YAP1可能通过对Nexilin的表达调控影响膀胱平滑肌的收缩特性。

IGF-1基因转染促进胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的表达

目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中,采用免疫组织化学方法对心肌细胞内上述4种蛋白的表达进行检测。利用HPIAS-2000图像分析系统测定4种蛋白在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率。结果IGF-1基因转染后的心肌细胞内上述4种蛋白的表达明显高于未转染的对照组(P<0.05)。结论IGF-1基因转染的心肌细胞较未转染的心肌细胞合成IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的能力增强,为IGF-1基因治疗心肌梗死提供了实验依据。

泛素特异性蛋白酶22通过调控雌激素受体α的转录活性抑制磷诱导的人动脉平滑肌细胞钙化

目的探讨泛素特异性蛋白酶22(USP22)与雌激素/雌激素受体(ER)之间的关系,并明确USP22在血管钙化过程中的作用及机制。方法用高磷培养基处理人动脉平滑肌细胞(HASMCs),建立血管钙化的细胞模型,并通过钙含量比色检测试剂盒及茜素红染色对该模型进行评价;Western blotting观察钙化过程中USP22蛋白水平的变化情况;双荧光素酶报告试验检测USP22对于ERα的转录调控作用;免疫共沉淀试验(co-IP)检测USP22与ERα之间的相互作用;对HASMCs进行过表达/沉默USP22之后再通过钙含量比色检测试剂盒检测钙化的改变。结果成功建立HASMCs钙化模型,钙含量比色检测试剂盒测定结果显示,细胞钙含量明显升高(P<0.05),茜素红染色也提示平滑肌细胞钙化阳性。随着钙化培养基处理时间的延长,Western blotting检测发现HASMCs的Runt相关转录因子(Runx2)与USP22蛋白表达量均有所升高。双荧光素酶报告试验结果显示,USP22可以抑制ERα的转录活性(P<0.05)。co-IP证实USP22与ERα之间可以结合。过表达USP22时,细胞钙化加重,Runx2表达也升高;沉默USP22时,细胞钙化减轻,Runx2表达也下降(P<0.05)。结论高磷条件可以诱导HASMCs钙化,HASMCs钙化时USP22表达水平升高,USP22可以通过与ERα直接结合的方式抑制其转录活性,USP22通过ERα促进钙化。

Smoothelin是一种胃肠道平滑肌肿瘤的特异性标志物

Smoothelin是一种新的细胞骨架平滑肌特异性蛋白，几乎特异性地表达于终末分化（收缩的）的平滑肌细胞。与其他平滑肌蛋白标志物如calponin、desmin、α-平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白和h-钙调素结合蛋白相反，smoothelin很少表达于增殖的（缺少分化的）平滑肌细胞中。作者首先分析了整个胃肠道中smoothelin表达，结果发现整个胃肠道肌层平滑肌细胞强的胞质和核smoothelin表达，

P16、KI-67、P53在子宫平滑肌肿瘤诊断中应用价值分析

目的:研究P16、KI-67、P53诊断子宫平滑肌肿瘤(USMT)患者的价值。方法:于我院2020年1月至2022年12月收治的USMT患者中随机抽取80例作为观察组,并随机抽取80例健康体检者为对照组,对比两组P16、KI-67、P53检出阳性率。并对比观察组患者最终确诊结果,研究P16、KI-67、P53的诊断价值。结果:观察组P16诊断阳性率为47.50%,Ki67诊断阳性率为62.50%,P53诊断阳性率为58.75%,显著高于对照组(P16、KI-67、P53诊断阳性率为均为0.00%),P<0.05。在观察组中P16诊断检出率为75.00%(60/80),敏感度为100.00%(18/18),特异度为67.74%(42/62);Ki67诊断检出率为60.00%(48/80),敏感度为100.00%(18/18),特异度为48.39%(30/62);P53诊断检出率为63.75%(51/80),敏感度为100.00%(18/18),特异度为53.23%(33/62);观察组中P16诊断符合率(75.00%)显著高于Ki67诊断符合率(60.00%),P<0.05;P16诊断特异度(67.74%)显著高于Ki67诊断特异度(48.39%),P<0.05。P16诊断符合率和特异性略高于P53,但两者未见显著差异,P>0.05。结论:USMT患者体内P16、Ki67及P53表现出异常表达,在鉴别良恶性肿瘤中P16具有更高准确率、特异性和敏感度,优于其他两种蛋白,具有较高诊断价值,可对诊疗工作提供一定支持作用。

肝脏恶性上皮样血管平滑肌脂肪瘤2例CT特征分析

肝脏上皮样血管平滑肌脂肪瘤(EAML)是一种罕见的肝脏间叶性肿瘤,主要由上皮样细胞组成。EAML临床无特异性表现,因此误诊率非常高。现将笔者遇到的2例经手术及病理证实为肝脏低度恶性EAML的CT特征加以总结,旨在提高对该病的认识。患者女,56岁,因“反复腹胀1周”于2006年8月9日入院,体格检查各项均为阴性,实验室检查:乙肝、丙肝、肿瘤标志物CA19-9、甲胎蛋白及癌胚抗原均为阴性。超声提示左肝内实质性占位,建议进一步检查。

用尿肌动蛋白能动因子和肿瘤细胞胶元酶刺激因子对各种尿道癌标记物评估的新方法(摘要)

近几年来,很多肿瘤标记物,包括细胞表面抗原,T—抗原,Rasp55和Rasp55蛋白都作为膀胱癌的潜在的肿瘤标记物进行了研究。由于这些标记物缺乏特异性和不一致,促使我们制定了一种研究24小时尿和首次清晨排泄尿样中肌动蛋白能动因子(uAMF)和肿瘤细胞成胶元刺激因子(TCSF)分泌的新方法。AMF是一种由恶性细胞分泌引起细胞移动的糖蛋白’是恶性细胞侵入和转移的关键因素。

C/EBP同源蛋白促进动脉移植片和动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞的增殖

C/EBP同源蛋白（CHOP）是介导内质网应激（ER stress）引起的未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）的主要效应分子,它促进动脉粥样硬化斑块局部的巨噬细胞凋亡,从而加速动脉粥样硬化进程,但CHOP不依赖于髓系细胞而促动脉粥样硬化的作用机制尚不明确。最近美国哥伦比亚大学Ira Tabas的研究小组利用血管平滑肌细胞特异性CHOP敲除的APOE^-/-小鼠揭开了上述谜底。

鼠结肠平滑肌细胞的分离、培养与鉴定

目的建立体外培养鼠结肠平滑肌细胞的方法。方法应用酶解法分离大鼠的结肠平滑肌细胞,用含10%胎牛血清的DMEM液进行鼠结肠平滑肌细胞的原代培养及传代,并以免疫细胞化学对其进行鉴定。结果新鲜分离的结肠平滑肌细胞呈梭形,核居中。培养24h后细胞开始贴壁,3～5d后开始增殖,14d后细胞密集,呈峰谷样生长。细胞经平滑肌特异性肌动蛋白αactin鉴定,确定为平滑肌细胞。结论应用酶解法可得到急性分离的鼠结肠平滑肌细胞,用含10%胎牛血清的DMEM液重悬分离得到的结肠平滑肌细胞,经过10d左右的培养可以获得结肠平滑肌细胞。该方法重复性好,效果稳定。

miR-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:采用real-time PCR法检测大鼠BASMCs在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下miR-130a的表达水平。转染miR-130a inhibitor下调BASMCs中miR-130a的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测BASMCs活力、细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、p21、p-Rb、Bcl-2和cleaved caspase-3/caspase-3的蛋白水平。Real-time PCR及Western blot检测检测生长阻滞特异性同源盒蛋白(Gax)的表达情况。结果:AngⅡ可促进BASMCs中miR-130a的表达,而抑制Gax的表达。miR-130a inhibitor可部分抑制AngⅡ增加BASMCs细胞活力的效应,并上调Gax的表达。此外,下调miR-130a后细胞早期凋亡率显著增加(P<0.05);同时细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb的蛋白水平均显著降低,p21及cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默miR-130a可上调BASMCs中Gax的表达,进而影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,从而抑制细胞活力,并促进其凋亡,提示miR-130a可作为高血压脑血管重构的一个潜在诊疗靶点。

CCK-8调节LPS诱导大鼠血管平滑肌细胞iNOS表达的分子机制

目的观察硫酸化八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs) iNOS表达的影响,探讨CCK的受体介导效应,以揭示CCK-8抗休克作用的分子机制。方法采用贴块法培养大鼠TASMCs,经LPs、CCK-8、CR-1409、CR-2945、CCK+LPS、CCK+LPs+CR-1409、CCK+LPS+CR-2945及溶剂孵育细胞16 h,RT-PCR技术检测细胞浆iNOs mRNA的表达；Western blot技术检测胞浆iNOS蛋白表达,以光密度值表示其相对含量。结果LPS(0．1mg/L)可诱导TASMCs iNOS mRNA及蛋白的表达上调(P＜0．01)；而CCK-8(10^(-8)mol/L)可抑制LPS的诱导作用(P＜0．01)；预先给子CCK-AR特异性拮抗药CR-1409(10^(-5)mol/L)、CCK-BR特异性拮抗药CR-2945(10^(-5) mol/L),均可部分拮抗CCK-8的这种抑制作用,其中CR-1409的拮抗作用略高于CR-2945：CCK-8、CR-1409、CR- 2945单独作用与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)。结论CCK-8受体介导了其对LPS诱导的胸主动脉平滑肌细胞iNOs的表达的抑制,且CCK-AR的作用略高于CCK-BR,此为CCK-8抗内毒素休克作用的受体机制。

足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞舒缩活动的影响

目的:探讨足阳明经穴针刺血清对家兔离体胃窦平滑肌细胞舒缩活动的影响,从离体细胞水平研究足阳明经与胃相关的特异性。方法:将45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、针刺足阳明经穴组、针刺足少阳经穴组、针刺足太阳经穴组,每组9只。分组处理后,颈动脉采血制备针刺血清。另取正常家兔10只,取胃窦平滑肌,经Ⅱ型胶原酶消化后制成正常兔胃窦平滑肌细胞悬液。取1:2稀释的针刺血清与同体积的正常兔平滑肌细胞悬液作用,用戊二醛固定后在显微镜下以测微尺测定细胞长度。结果:阿托品模型组的血清能使正常兔胃窦平滑肌细胞舒张,细胞长度增加;针刺足阳明经穴组的血清可以促进正常兔胃窦平滑肌细胞收缩,细胞长度缩短,而针刺足少阳经穴组和针刺足太阳经穴组的血清对正常兔胃窦平滑肌细胞的长度影响不明显。结论:足阳明经穴针刺血清能使离体胃窦平滑肌细胞产生明显的收缩效应,从离体细胞水平进一步证实了足阳明经与胃相关的特异性。

肌细胞特异性microRNAs对收缩舒张生物学效应调控机制的研究进展

肌细胞特异性microRNAs(muscle-specific microRNAs,myomiRs)是一类特异性表达在肌组织中的内源性非编码小分子RNA,通过转录后水平负调控相关基因的表达,广泛参与到一系列生物学过程中,影响疾病的发生发展。肌细胞相关疾病(如慢性阻塞性肺炎、肥厚型心肌病等)的发生、发展可引起myomiRs及其下游靶基因表达改变,从而进一步影响疾病的发展、预后及转归。本文将综述miR-1、miR-133、miR-206、miR-208和miR-499等常见myomiRs在横纹肌和非横纹肌收缩舒张机制中的作用,重点关注myomiRs对肌细胞收缩舒张生物学效应的影响,以期为肌细胞相关疾病治疗提供新思路。

大鼠输精管平滑肌细胞的体外培养

目的 建立从SD大鼠的输精管中提取、培养获得平滑肌细胞的方法。方法 取SD大鼠的输精管,用酶消化法分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增。倒置相差显微镜下观察体外培养的平滑肌细胞的生长情况,用平滑肌特异性的抗αSMA做免疫组化染色,鉴定培养的细胞。结果 平滑肌细胞体外培养呈长梭形,并出现“峰 谷”样生长特征。用抗αSMA免疫组化染色的方法鉴定所培养为平滑肌细胞,其纯度为(91 3±5 2 ) %。结论 成功地建立了从SD大鼠输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的稳定模型。

针刺足阳明经穴对家兔胃窦平滑肌细胞舒缩长度及胞内钙离子浓度的影响

目的 :从细胞水平探讨足阳明经与胃相关的特异性及针刺足阳明经穴对胃平滑肌细胞胞内钙离子浓度的影响。方法 :将 4 5只家兔随机分为生理盐水组 (A)、阿托品模型组 (B)、针刺足阳明经穴组 (C)、针刺足少阳经穴组 (D)、针刺足太阳经穴组 (E)。阿托品造模处理后 ,分离胃窦平滑肌细胞 ,制成活的单个平滑肌细胞悬液 ,在显微镜下以测微尺测定细胞长度 ,以荧光分光光度计测定胞内钙离子浓度。结果 :针刺足阳明经组 (C)的细胞舒缩长度明显短于其他各组 (P <0 . 0 1) ,且胃窦平滑肌细胞胞内钙离子浓度明显高于其他各组 (P <0 . 0 1)。结论 :针刺足阳明经穴能使阿托品阻断的胃窦平滑肌细胞产生明显的收缩效应 ,进一步证实足阳明经与胃之间存在特异性的联系 ,其效应的产生与引起胃窦平滑肌细胞内钙离子释放有关。