红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白和骨桥蛋白表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)α-肌动蛋白、骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组(21%O2浓度)、低氧组(1%O2浓度)、低氧+红景天苷1 mg/L组、低氧+红景天苷3 mg/L组、低氧+红景天苷5 mg/L组、低氧+前列腺素E1(PGE1)0.4μg/L组,分别培养48 h;RT-PCR法分别测定各组α-肌动蛋白、OPN的相对表达量。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;与正常对照组比较,低氧组细胞的α-肌动蛋白表达量下降、OPN表达量升高(P<0.01);与低氧组比较,红景天苷5 mg/L组α-肌动蛋白表达量升高、OPN表达量降低(P<0.01),与PGE1作用相当(P﹥0.05)。结论:低氧可引起SD大鼠CCSMC收缩型标志物α-肌动蛋白表达降低,合成型标志物OPN表达升高,推测低氧可能引起CCSMC由收缩型向合成型转化。红景天苷能抑制低氧引起的CCSMCα-肌动蛋白表达降低、OPN表达升高,浓度为5 mg/L时与PGE1作用几乎相当。

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞α-肌动蛋白表达的影响

目的研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞表型转换的影响。方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞施加10%应变,频率分别为0.5 Hz1、Hz和2 Hz,加载时间12 h和24 h后,采用Real time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学等技术检测不同频率张应变下血管平滑肌细胞的αlpha-肌动蛋白(-αactin)的表达变化。以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组。结果血管平滑肌细胞的-αactin的蛋白和RNA表达量在1 Hz条件下比相同时相点的其他频率组均高。结论不同频率的张应变可以影响血管平滑肌细胞-αactin的表达量,提示应变频率的改变可能参与血管平滑肌细胞表型转换的调节。

低切应力对动脉粥样硬化形成及血管平滑肌细胞α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的影响

目的 为探讨低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞增殖的影响 ,建立了低切应力颈总动脉粥样硬化模型 ;并观察了血管平滑肌细胞的α 肌动蛋白和c Myc蛋白表达的变化。 方法 手术结扎家兔左颈外动脉 ,术后高脂饲料喂养。组织学和免疫组织化学方法观察粥样斑块的形成和α 肌动蛋白及c Myc蛋白表达的变化。 结果 在低切应力颈总动脉粥样硬化模型中 ,颈总动脉较早出现明显粥样斑块 ,管壁增厚 ,管腔内径变小 ;颈总动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的α actin含量减少、c Myc表达增高。 结论 低切应力促进了动脉粥样硬化斑块的形成 ,促使粥样硬化动脉VSMC增殖能力增强。

人脑桥静脉平滑肌细胞α-肌动蛋白的表达

目的：探明人脑桥静脉管壁中平滑肌细胞（SMC）的存在及其分布规律。方法：人脑标本12例，共计62支桥静脉。应用H—E染色、丽春红-维多利亚蓝组合染色观察桥静脉SMC的组织学特点，运用免疫组织化学显色、免疫荧光化学显色和免疫印迹法检测平滑肌特异标记物旷平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果：桥静脉管壁中膜可见散在、孤立的SMC，大多呈纵切面，α-SMA在桥静脉中免疫反应阳性；桥静脉流出端硬脑膜侧α-SMA表达高于蛛网膜侧。结论：桥静脉管壁中有SMC的存在，且分布不对称。

α-肌动蛋白1在皮肤鳞状细胞癌中的表达及与临床-病理特征、预后的相关性

目的 探讨α-肌动蛋白1(ACTN1)在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的表达及与临床-病理特征、预后的相关性。方法 纳入150例CSCC患者(CSCC组)和100例正常体检者(对照组)作为研究对象。血清中ACTN1表达水平采用ELISA法检测。对CSCC患者术后进行随访并分为预后不良组(n=69)和预后良好组(n=81),预后不良组中69例CSCC患者根据ACTN1中位表达水平分为ACTN1低表达组(n=35)和ACTN1高表达组(n=34)。logistic回归分析CSCC患者发生预后不良的危险因素,血清中ACTN1表达水平预测CSCC患者发生预后不良的临床效能采用ROC曲线分析,K-M曲线分析血清中ACTN1表达水平与CSCC患者发生预后不良中位时间的关系。纳入40例CSCC患者作为独立验证样本,采用免疫组化法比较ACTN1在CSCC组织及癌旁组织中的表达差异。结果 对照组和CSCC组血清中ACTN1表达水平分别为(4.56±1.02)和(12.12±2.26)ng/mL,与对照组相比,CSCC组血清中ACTN1表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=31.37,P <0.001)。预后不良组肿瘤直径≥5 cm、肿瘤细胞分化程度为低分化、肿瘤浸润深度为脂肪下层、有淋巴结转移占比及血清ACTN1表达水平显著高于预后良好组,差异均有统计学意义(P <0.05)。logistic回归分析显示,淋巴结转移(OR=3.253)、ACTN1(OR=2.894)是CSCC患者术后出现预后不良的独立危险因素。血清中ACTN1表达水平预测CSCC患者术后发生预后不良的曲线下面积为0.911,当截断值为13.19 ng/mL,诊断敏感度和特异度分别为89.78%和92.12%。ACTN1低表达组和高表达组发生预后不良的中位时间分别为25个月和18.5个月,相对于ACTN1低表达组,ACTN1高表达组发生预后不良的中位时间显著缩短(HR=6.627,P <0.001)。40例CSCC组织中ACTN1高表达32例,ACTN1低表达8例;CSCC癌旁组织中ACTN1高表达11例,ACTN1低表达29例,与癌旁组织相比,ACTN1高表达率在CSCC组织中显著升高(χ~2=22.175,P <0.001)。结论 CSCC患者血清中ACTN1表达水平显著升高,可作为CSCC患者术后评估预后的一项生物学标志物。

血小板内皮细胞黏附分子1和平滑肌肌动蛋白对瘢痕疙瘩综合治疗预后的影响

目的:探究瘢痕疙瘩血管内血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)与平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)的表达水平对瘢痕疙瘩综合治疗预后的影响。方法:回顾性分析2020年8月至2022年6月江苏大学附属医院皮肤科门诊收治的瘢痕疙瘩患者61例,共计69处瘢痕疙瘩,均接受手术切除与^(90)Sr同位素敷贴综合治疗,免疫组织化学染色检测手术切除瘢痕疙瘩标本血管内PECAM-1及SMA表达水平,电话及门诊随访6个月。结果:19处(27.5%)瘢痕疙瘩6个月内复发,11处(15.9%)在^(90)Sr同位素敷贴治疗后发生不良反应,复发组PECAM-1与SMA的高表达率均高于未复发组(χ^(2)=7.496,P=0.006;χ^(2)=5.197,P=0.023);治疗后不良反应发生率与PECAM-1及SMA的表达水平无明显关系(χ^(2)=0.172,P=0.935;χ^(2)=1.110,P=0.484)。结论:瘢痕疙瘩血管内PECAM-1及SMA的表达水平与综合治疗预后呈负相关,二者可能是判断瘢痕疙瘩预后的潜在指标。

白介素-1β通过JNK/p38信号转导通路调控肾系膜细胞表达α-平滑肌肌动蛋白

为探讨细胞内丝裂素原活化蛋白激酶 (MAPK)家族各亚类信号转导通路在炎症性细胞因子白介素 1β(IL 1β)对大鼠肾系膜细胞 (rMC)表型标志物α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)表达及其分布中的调控作用 ,以IL 1β(10ng/ml)刺激体外培养的rMC ,用电穿孔基因转染及免疫杂交法观察IL 1β对α SMA基因启动子活性及蛋白表达的作用 ,并用共聚焦荧光显微镜及透射电镜观察IL 1β刺激前后细胞内α SMA及微丝的分布变化。通过应用PD980 5 9和SB2 0 35 80特异阻断ERK和 p38通路、共转染显性失活JNKK基因特异阻断JNK通路 ,观察阻断对IL 1β刺激所致α SMA表达或启动子活性的影响。结果显示 ,IL 1β刺激 6h可明显上调α SMA启动子活性 ,在 1～ 2d内显著促进其蛋白合成 ;IL 1β刺激 2 4h后 ,细胞内α SMA及微丝在细胞核周的分布增加。阻断ERK通路对IL 1β诱导的α SMA表达无明显影响 ;阻断JNK及 p38通路均可使IL 1β诱导的α SMA表达明显受抑 ;阻断 p38通路的作用比阻断JNK通路更强 ,而且对基础状态的α SMA表达也有抑制作用。上述结果提示 ,IL 1β可刺激rMC发生表型转化 ,其表型标志物α SMA可通过基因转录增强而增加蛋白表达 ,在细胞内的分布向核周转位积聚。JNK及p38通路是介导IL 1β刺激rMCα

转化生长因子-β(TGF-β)影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的研究

目的本研究探讨转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。方法原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,MTT法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入20 ng·m L-1TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,分别于12 h、24 h、48 h、72 h,Real-time PCR检测α-SMA mRNA,Western-blotting和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.05),其中TGF-β1促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强(P<0.05);TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3均增加α-SMA的表达(均为P<0.001),TGF-β3促进α-SMA表达作用最强(P<0.001)。结论 TGF-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。

糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白的表达及意义

目的了解糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白(actin)的表达及意义。方法利用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病及糖尿病性勃起功能障碍模型,40只 SPF 级SD 雄性大鼠,先按时间随机分为两组(每组20只),分别是注射 STZ 后7周组和4周组,再按处理因素即给予大鼠腹腔注射 STZ(60 mg/kg)是否成模,分为对照组(未注射 STZ,5只)、成糖尿病性勃起功能障碍模型组、成糖尿病性非勃起功能障碍组、未成模组。利用免疫组化 SP 染色法对不同处理组的标本进行α-肌动蛋白的研究,利用免疫组化 SABC 染色法对不同处理组的标本进行肌间线蛋白的研究,利用原位杂交技术检测不同组别骨桥蛋白(OPN)mRNA 含量的改变。图像分析利用彩色图文分析系统,第三人进行图像分析及数据采集,测量随机每高倍镜视野下累积光密度(IOD),以 IOD 的值反映组织切片中相应阳性物质的表达程度。结果糖尿病性勃起功能障碍组 IOD 均小于对照组、糖尿病非勃起功能障碍组及未成模组(均 P<0.05),糖尿病非勃起功能障碍组的 IOD 小于对照组和未成模组(P<0.05),不同时间点间的 IOD 不存在显著性差异(F=3.801,P=0.62),交互效应不显著(F=1.549,P=0.225)。免疫组化染色不同时间点间的 IOD 不存在显著性差异(F=0.052,P=0.821),各处理组间的 IOD 不存在显著性差异(F=0.045,P=0.987),交互效应不显著(F=0.572,P=0.639)。OPN mRNA 原位杂交染色不同时间点间的 IOD 不存在显著性差异(F=1.288,P=0.266),交互效应不显著(F=1.819,P=0.168),糖尿病性勃起功能障碍组的 IOD 均大于其余三组(P 均<0.001)。糖尿病非勃起功能障碍组的 IOD 大于对照组和未成模组(P 均<0.001)。对照组的 IOD 与未成模组未见显著差异(P=0.873)。结论糖尿病可以引起阴茎海绵体平滑肌的表型转化;阴茎海绵体平滑肌表型转化可以导致勃起功能障碍。

瘢痕组织中α-平滑肌肌动蛋白的表达与细胞凋亡的关系

目的 :观察α -平滑肌肌动蛋白在瘢痕组织中的表达 ,了解病理性瘢痕形成过程中凋亡所扮演的角色及其与肌成纤维细胞在真皮中变化的关系。方法 :瘢痕标本来自烧伤后来我院进行整形手术的病人 ,同时取病人手术供皮区的正常皮肤作为对照。 8例瘢痕组织标本 (含 2例愈合较为平坦的瘢痕和 6例增生性瘢痕组织 )被分成增殖期和成熟期两组。运用caspase- 3mRNA及其蛋白的表达及TUNEL方法检测瘢痕及正常组织中的凋亡细胞 ,并以免疫组化法检测瘢痕及正常皮肤真皮内α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体的表达。结果 :瘢痕组织中细胞凋亡的数目与正常组织明显不同。瘢痕内的TUNEL标记阳性细胞数多于正常组织 ;增殖期瘢痕内的细胞凋亡的数目多于成熟期。增殖期TUNEL标记阳性的细胞多于平坦瘢痕 ,而成熟期两者无显著差别 ,Caspase - 3mRNA及其蛋白的表达与TUNEL标记结果具有一致性。随着瘢痕组织的成熟 ,α -平滑肌肌动蛋白单克隆抗体的表达逐渐降低 ,平坦的瘢痕组织中的表现尤为明显 ;增生性瘢痕中 ,增殖期与成熟期之间无显著差别。结论 :正常伤口愈合过程中 ,肌成纤维细胞暂时性的表达 ,可引起伤口的收缩 ,随着真皮再塑形 ,含有α -平滑肌肌动蛋白的肌成纤维细胞因凋亡而消失 ,而病理性的愈合结局可能是它持续表达的结果。

复方861对人肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达的调节作用

目的 研究复方861对人肝星状细胞(LX-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的调节作用。方法应用基于SYBR-Green I的实时定量荧光PCR方法,研究复方861分别作用24、48、72 h后,LX-2细胞中α-SMA mRNA含量的变化情况。结果 复方861在48和72 h可以显著降低LX-2细胞中α-SMA mRNA含量。结论 复方861可抑制LX-2细胞中α-SMA基因的表达,提示其抗肝纤维化作用可能与其抑制LX-2细胞的活化有关。

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞F-肌动蛋白构筑的影响

目的 探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞抗应力和粘附能力的影响 ,为改进血管内皮细胞种植的组织工程学技术提供生物力学基础。 方法 应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术 ,以静态条件下单独培养的内皮细胞、联合培养的内皮细胞以及切应力作用下单独培养的内皮细胞为对照组 ,研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞骨架F 肌动蛋白构筑的变化。 结果 静态条件下单独培养的内皮细胞的F 肌动蛋白排列松散 ,不规则 ,微丝较细 ;联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白微丝明显增多增粗。切应力作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白发生重排 ,并形成大量沿切应力方向排列的应力纤维 ,且发生重排的时间明显早于单独培养的内皮细胞。 结论 在切应力作用和血管平滑肌细胞的影响下 ,内皮细胞F

实验性慢性肾缺血模型肾小管-间质细胞a-平滑肌肌动蛋白的表达和意义

目的:观察单侧肾动脉狭窄(RAS)大鼠模型慢性肾缺血组织中肾小管-间质a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达和意义。 方法:建立Goldblatt单侧RAS大鼠模型,观察大鼠慢性缺血肾脏在90天内不同阶段的病理改变;应用免疫组化法检测肾小管-间质a-SMA及波形蛋白(vimentin)在不同时间点的表达;应用免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察细胞角蛋白(cytokeratin,CK)与a-SMA在肾小管上皮细胞中的共定位情况。 结果:RAS术后第5天首先出现肾小管vimentin阳性,术后第7天肾间质可见少量的a-SMA阳性细胞并随时间递增。通过连续切片观察到,vimentin阳性的肾小管周围肾间质细胞a-SMA表达增强,并与肾小管间质纤维化程度基本一致。当慢性缺血状态持续存在时,后期(术后第45天至90天)少数损伤的肾小管上皮细胞表达a-SMA。应用免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察发现,部分a-SMA阳性的肾小管上皮细胞同时表达CK,并且个别细胞还有向间质游走的趋势。 结论:在慢性肾缺血早期Vimentin阳性的肾小管上皮细胞本身可能诱导了肾间质固有细胞发生肌成纤维细胞转分化,参与肾间质纤维化的发生和发展;在慢性肾缺血后期,肾小管上皮细胞转分化可能是导致肾纤维化进行性发展的关键环节。

α-平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )对瘢痕成纤维细胞中 α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)表达的诱导作用。方法 以 5例增生性瘢痕为实验组 ,3例正常瘢痕为对照组 ,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及 L SAB免疫组织化学染色技术 ,观察在不同 TGF- β1 浓度作用下 ,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α- SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞 ,三维培养体系中 α- SMA含量明显低于二维培养体系。不同浓度 TGF-β1 诱导瘢痕成纤维细胞表达 α- SMA的作用不同 ,以 5 ng/m l的 TGF- β1 作用最有效 ;与对照组的成纤维细胞相比 ,实验组的成纤维细胞在表达 α- SMA方面 ,对 TGF- β1 的反应更为敏感。结论 在体外 ,TGF- β1 诱导 α- SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异 ;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异 ,对 TGF- β1敏感性不同 ;细胞外基质成分可能会降低 TGF- β1 的诱导作用 ,使 α- SMA的表达减少。

博莱霉素诱导α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠肺纤维化上皮细胞-间质转分化的研究

目的探讨在博莱霉素诱导的肺纤维化中是否发生了上皮细胞-间质转分化(EMT)现象,支气管上皮细胞是否参与了这一过程。方法采用α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠(α-SMA-Cre/R26R双转基因鼠)为实验动物,构建博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,进行组织X-gal染色和α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测。结果气管内灌注博莱霉素的转基因小鼠支气管上皮下部分X-gal蓝染明显增多,终末小气道周围和肺血管壁蓝染细胞出现或增多,部分地区出现了支气管周围肺泡上皮细胞(ACE)阳性蓝染和浸润。结论在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中可以观察到EMT现象,气道上皮细胞和肺泡上皮细胞能向间充质细胞转化,参与肺纤维化病理过程。

骨髓间充质干细胞移植急性放射性肝损伤大鼠α-平滑肌肌动蛋白的表达

背景:放射性肝损伤极大限制了放射治疗的临床应用。研究发现,肝损伤环境是骨髓间充质干细胞适宜的分化环境,提示通过骨髓间充质干细胞移植治疗放射性肝损伤成为可能。目的:验证骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性放射性肝损伤中α-平滑肌肌动蛋白表达水平的影响。方法:分离培养雄性大鼠的骨髓间充质干细胞,取P3代细胞作为移植细胞。建立雌性SD大鼠急性放射性肝损伤模型。随机分成两组,在放疗结束后4h内,干预组经尾静脉输注骨髓间充质干细胞悬液,对照组输注等量生理盐水。采用免疫组织化学技术检测肝脏组织中的α-平滑肌肌动蛋白的阳性表达水平;采用原位杂交技术检测肝脏组织中性别决定基因Y(SrY)的存在;光镜观察肝脏组织的病理形态学变化。结果与结论:干预组大鼠肝右叶中α-SMA的平均阳性表达率低于对照组(P<0.05)。干预组大鼠肝右叶检测到携带SrY的阳性细胞多于肝脏左叶(P<0.05),对照组中未检测到携带SrY的阳性细胞。干预组大鼠肝右叶的损伤程度比对照组轻。结果证实,急性放射性肝损伤可以诱导雄性大鼠的骨髓间充质干细胞的"归巢",骨髓间充质干细胞对大鼠急性放射性肝损伤中ɑ-平滑肌肌动蛋白表达水平有下调作用。

α-SM-肌动蛋白在血管平滑肌细胞重塑过程中的变化及其调控

细胞重塑是细胞在生理、病理情况下发生的形态、结构与功能改变，又称为表型转化。血管平滑肌细胞具有增殖型和收缩型两种表型，在细胞发育和疾病状态下发生相互转化。αＳＭ肌动蛋白作为血管平滑肌细胞的表型标志，其转化受到细胞因子、细胞外基质等多种因素的调节。

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞E-钙黏素和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

背景:有研究表明,人晶状体上皮细胞的间质转分化是后发性白内障的主要病理改变,转化生长因子β2可以诱导间质转分化的发生。目的:体外培养人晶状体上皮细胞,观察转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞转分化相关蛋白E-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法:利用组织块法体外培养人晶状体上皮细胞并传代,选择传5代的细胞进行实验,采用100ng/L转化生长因子β2诱导48h,反转录-聚合酶链反应方法检测E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达,应用蛋白质印迹法Westernblot检测其蛋白表达。结果与结论:转化生长因子β2处理人晶状体上皮细胞48h后,细胞E-钙黏蛋白表达明显减弱,α-平滑肌肌动蛋白的表达明显增强。提示转化生长因子β2可以成功诱导晶状体上皮细胞间质转分化,转化生长因子β2处理的晶状体上皮细胞可以作为间质转分化的细胞模型。

白蛋白超载诱导近端肾小管上皮细胞表达α-平滑肌肌动蛋白

目的:探讨白蛋白超载是否可以诱导近端肾小管上皮细胞(PTCs)向成肌纤维细胞转化(EMT)。方法:大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E培养至70%融合或完全融合时,用不同浓度(0-30g/L)去脂牛血清白蛋白(dBSA)超载144h。NRK52E形态和结构改变用光镜和电镜观测。上皮细胞标记抗原E-钙黏蛋白和β-连环蛋白,以及成肌纤维细胞标记抗原α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达用免疫荧光和Western印迹法检测。结果:dBSA超载可诱导未完全融合NRK52E表达α-SMA,少数细胞变为长梭形,但α-SMA的表达不呈剂量依赖性。dBSA超载处理不能诱导完全融合的NRK52E表达α-SMA,细胞形态也无改变。dBSA超载完全或未完全融合NRK52E均不能抑制E-钙黏蛋白和β-连环蛋白表达,电镜显示这些细胞仍保持上皮细胞结构,包括微绒毛和紧密连接。结论:白蛋白超载可以诱导PTCs表达α-SMA,促进EMT,但不能诱导PTCs完全转化为成肌纤维细胞,细胞完全融合可抑制白蛋白超载诱导PTCs表达α-SMA。

α-平滑肌肌动蛋白对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法培养人肾小管上皮细胞,分为低糖组、高糖组和干扰组。干扰组将α-SMA siRNA转染至肾小管上皮细胞中,高糖组、低糖组细胞均不进行α-SMA转染。转染完成后,高糖组、干扰组细胞用高糖DMEM细胞培养液培养,低糖组细胞用低糖DMEM细胞培养液培养,均培养48 h。采用MTT法检测细胞增殖情况。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率。采用Western blotting法检测细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达,采用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中ROS水平,采用ELISA法检测上清液TNF-α、IL-8水平。结果高糖组、干扰组细胞增殖能力均低于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞增殖能力高于高糖组(P<0.01)。高糖组、干扰组细胞凋亡率均高于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞凋亡率低于高糖组(P<0.01)。高糖组、干扰组细胞Caspase-3、Bax、TLR4、NF-κB蛋白表达均高于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞Caspase-3、Bax、TLR4、NF-κB蛋白表达均低于高糖组(P均<0.01)。高糖组、干扰组细胞中ROS水平及上清液TNF-α、IL-8水平均高于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞中ROS水平及上清液TNF-α、IL-8水平均低于高糖组(P均<0.01)。结论干扰α-SMA后能够逆转高糖对肾小管上皮细胞的增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与降低细胞内ROS水平及抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。