MicroRNA-21与平滑肌蛋白22α在哈萨克族食管癌组织中的表达及其临床病理学意义

目的探讨microRNA21与SM22a基因在哈萨克族食管癌发生发展中的作用及临床意义。方法免疫组织化学法检测162例石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织及RT-PCR方法检测47例哈萨克族食管癌标本中microRNA21、SM22a表达水平,分析这些基因与临床病理特征的关系。结果SM22a在162例食管鳞癌组织中的阳性表达率(87.0%)显著高于食管正常黏膜组织(36.0%);在47例哈萨克族食管癌组织中,SM22a表达水平较远端无癌组织增高。与远端无癌组织相比,microRNA21在哈萨克族食管癌组织中表达水平增高。MicroRNA21高表达与分化程度、淋巴结转移、临床分期相关,SM22a高表达与临床分期相关、淋巴结转移相关;microRNA21与SM22a的表达呈正相关。结论MicroRNA21、SM22a协同高表达共同参与哈萨克族食管癌的侵袭发展过程。

27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响

目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后分别转染大鼠原代VSMCs,加入血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs表型转换。MTT实验检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测细胞中SM22α的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组相比,PDGF-BB组的细胞活力上升(P <0.05)、迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05);与阴性对照慢病毒组相比,27nt-miRNA高表达组的细胞活力下降(P <0.05),迁移能力下降(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量明显升高(P <0.05);而anti-27nt-miRNA组细胞的细胞活力上升(P <0.05),迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05)。结论:27nt-miRNA促进SM22α表达,同时抑制VSMCs的活力及迁移,并有可能抑制VSMCs从收缩型转变为合成型。

人高迁移率族蛋白B1对大鼠气道平滑肌细胞表型改变的影响

目的:探讨人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)表型转化的影响。方法:以浓度为0 ng/mL、500 ng/mL、5000 ng/mL、10000 ng/mL的人HMGB1分别刺激原代大鼠ASMC 24 h,为空白对照组、HMGB1500 ng/mL组、HMGB15000 ng/mL组和HMGB110000 ng/mL组;以浓度为50 ng/L、100 ng/L的血小板源性生长因子(PDGF)分别刺激原代大鼠ASMC 24 h,为阳性对照组。免疫荧光法观察大鼠ASMC形态,蛋白质印迹法(Western blotting)检测大鼠ASMC中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌(SM)22α蛋白表达水平。结果:大鼠ASMC经人HMGB1刺激后出现了长度缩短、外形收缩变钝的形态改变,且其细胞收缩程度随HMGB1刺激浓度增加而增大。大鼠ASMC中α-SMA、SM22α表达水平随HMGB1刺激浓度增加而降低;HMGB110000 ng/mL组大鼠ASMC的α-SMA、SM22α表达水平显著均低于空白对照组(0.203±0.040 vs0.865±0.096,P<0.05;0.235±0.129 vs 0.990±0.197,P<0.05)。结论:人HMGB1可能通过使大鼠ASMC形态收缩,收缩蛋白标志物表达降低,从而参与气道平滑肌的表型转换。

miRNA-21通过TPM1参与高糖诱导的人主动脉平滑肌细胞表型转化与增殖

目的探讨miRNA-21在高糖诱导的人主动脉平滑肌细胞表型转化与增殖中的作用,以及对靶基因原肌球蛋白1(tropomyosin 1,TPM1)表达的影响。方法体外培养人主动脉平滑肌原代细胞,利用脂质体转染miRNA-21mimic和inhibitor至细胞中,BrdU法检测高糖刺激miRNA-21过表达和缺失情况下人主动脉平滑肌细胞的增殖情况,荧光定量PCR检测转染前后高糖刺激时细胞miRNA-21和TPM1的表达情况,Western blot检测人主动脉平滑肌细胞中TPM1、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、平滑肌蛋白22α(smooth muscle 22alpha,SM22α)的表达情况。结果 10、20、25mmol/L D-葡萄糖刺激时人主动脉平滑肌细胞较正常对照组(0.613±0.022)显著增殖(0.725±0.026、0.913±0.024、1.513±0.082),差异有统计学意义(P<0.01);10、20、25mmol/L D-葡萄糖刺激时miRNA-21表达较对照组升高1.1、2.0、3.1倍(P<0.01);正常组细胞转染miRNA-21mimic后细胞增殖能力增强1.6倍,转染miRNA-21inhibitor后高糖组细胞增殖能力减弱(P<0.01);转染miRNA-21mimic后TPM1表达减弱,SM22α表达下调,OPN表达增加(P<0.01),转染miRNA-21inhibitor后TPM1表达上调,SM22α表达上调,OPN表达减少(P<0.01)。结论 miRNA-21可下调细胞TPM1的表达,从而促进人主动脉平滑肌细胞表型转化与增殖。

金属硫蛋白和瑞舒伐他汀对小鼠动脉粥样硬化和SM22α表达的影响

目的 探讨金属硫蛋白（MT）和HMG-CoA还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化以及血管平滑肌22α蛋白（SM22α）表达的影响.方法 30只6周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组、瑞舒伐他汀组、金属硫蛋白组,高脂饮食喂养13周;10只背景品系雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周.13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的水平,处死小鼠后取主动脉,剪取主动脉弓部位5 mm长主动脉用10％甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色及SM22α免疫组织化学染色;其余标本-80℃保存,取100 mg主动脉组织两份,分别提取总蛋白和RNA,并做WesternBlot和RT-PCR检测,观察主动脉血管壁形态学变化,定性和定量分析主动脉组织SM22α表达强度变化.结果 与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀组血清中TCH、TG、LDL-C水平显著降低（P＜0.05）;金属硫蛋白组与高脂高脂模型组比较,TCH、TG、LDL-C水平无统计学差异（P＞0.05）;和正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法分析主动脉SM22α蛋白和mRNA的表达均明显减少;金属硫蛋白和瑞舒伐他汀组主动脉粥样硬化病变程度减轻,SM22α蛋白和mRNA的表达均增加.结论 金属硫蛋白对血脂无明显影响,瑞舒伐他汀降低血脂作用明显;ApoE基因缺陷小鼠主动脉组织动脉粥样硬化明显且SM22α表达减少,金属硫蛋白和瑞舒伐他汀可减轻主动脉粥样硬化病变程度并可增加主动脉SM22α的表达.

微创食管癌根治术对老年食管癌患者的治疗效果及对SM22α、MMP-2水平的影响

目的研究微创食管癌根治术对老年食管癌患者的治疗效果及对平滑肌蛋白22α(SM22α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平的影响。方法选取诊治的老年食管癌患者110例,按照完全随机法将患者分为常规组、微创组,各55例。常规组采用常规开胸手术治疗;微创组采用微创食管癌根治术。记录两组患者手术切开长度、术中出血量、手术时间以及术后引流量;检查MMP-2、血管内皮生成因子(VEGF)、SM22α、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平;并进行疗效观察与评价。结果微创组手术切开长度、术中出血量、手术时间以及术后引流量低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。微创组手术后MMP-2、VEGF水平低于常规组手术后,差异有统计学意义(P<0.05)。微创组手术后SM22α、HIF-1α表达量低于常规组手术后,差异有统计学意义(P<0.05)。微创组总有效率高于常规组总有效率,差异有统计学意义(P<0.05)。微创组6个月无瘤生存率、6个月总生存率高于常规组,肺部感染率低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论微创食管癌根治术对老年食管癌患者治疗效果明显,降低SM22α、MMP-2水平,术后感染率低,安全性较高,对患者造成的损伤小,无瘤生存率较高,值得推广。

血清平滑肌蛋白22诊断急性缺血性肠病的实验研究

目的探讨血清平滑肌蛋白22(SM22)在急性缺血性肠病诊断中的意义。方法选取健康成年SD大鼠96只,分为实验组和对照组,每组48只,两组内再分成6小组,每组8只。实验组结扎肠系膜上动脉,对照组仅行腹腔开关术。分别在手术后0.5、1、2、4、8、12h从右心室中抽取静脉血,用ELISA法检测SM22浓度。处死大鼠,在回盲部近端切取长约10cm小肠组织,行HE染色和直接免疫荧光染色法标记肠组织中SM22。结果肠组织缺血4h时血清SM22浓度开始升高,并且达到峰值(265±15)ng/L。随着缺血时间的延长SM22浓度逐渐下降,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。肠组织缺血4h内,光镜下SM22阳性颗粒数无明显变化;缺血4h后,光镜下SM22阳性颗粒数逐渐下降,各实验组与对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SM22主要表达在肠平滑肌层,当肠组织受缺血损伤致肠肌层坏死时,SM22从肠肌层漏出并入血使血清中SM22浓度升高。血清SM22可用于判断肠组织缺血坏死。

平滑肌22α蛋白在血管稳态和血管重构中的作用

有关血管稳态和重构的分子机制一直是近年来的研究热点,也被视为治疗血管损伤性疾病的突破点。大量研究证实,血管损伤修复及病理性重构过程与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的表型转化、异常增殖与迁移、细胞衰老关系密切。平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM22α)蛋白是一种在收缩型VSMCs中大量表达的细胞骨架相关蛋白,可通过与F-actin相互作用促进应力纤维形成,维持VSMCs收缩性,还可作为信号调节分子参与血管稳态和重构。本文综述了近年SM22α在血管稳态和血管重构中作用的研究进展。

SM22α抑制大鼠基质重构相关分子的表达及其在血管肥厚中的意义

目的:探讨平滑肌蛋白22α(smooth muscle protein 22 alpha,SM22α)对大鼠血管肥厚及基质重构相关分子表达的影响。方法:采用SM22α及其突变体的腺病毒表达载体感染大鼠颈总动脉;利用血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)微渗泵植入大鼠皮下复制高血压模型;用HE及免疫组化方法分别观察大鼠颈总动脉肥厚及基质重构相关分子在血管壁的表达情况。结果:Ang II显著升高大鼠的血压;颈总动脉过表达SM22α及其非磷酸化突变体S181A后,显著抑制Ang II诱导的血管肥厚,同时伴有MMP-2、MMP-9、ICAM-1和VCAM-1的表达减少。结论:SM22α及其非磷酸化突变体显著抑制血管肥厚,该过程可能与其抑制基质重构相关的MMP及黏附分子的表达有关。

SM22α对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探究平滑肌22α蛋白(SM22α)对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法:通过慢病毒转染人结直肠癌细胞HCTL16构建SM22α过表达细胞,应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的变化;使用RT-qPCR检测细胞SM22αmRNA表达的改变;通过Western blot法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和SM22α蛋白水平。结果:成功构建HCT116过表达SM22α细胞;SM22α过表达细胞的侵袭和迁移能力减弱(P<0.05);SM22α过表达抑制p-ERK和MMP-9的蛋白水平(P<0.05)。结论:SM22α通过抑制ERK/MMP-9信号通路调节结直肠癌细胞侵袭和迁移能力。

结直肠癌组织中SM22α、TGF-β_(1)的表达水平及其与肿瘤侵袭转移的关系

目的分析平滑肌22 alpha蛋白(SM22α)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))在结直肠癌组织中的表达水平,并探讨其与肿瘤侵袭转移的关系。方法回顾性选取咸阳市中心医院2018年4月至2019年5月期间收治的104例结直肠癌患者为研究组,按照肿瘤侵袭转移情况分为侵袭转移组(n=31)和非侵袭转移组(n=73),并选取同期于我院接受治疗的87例良性结直肠肿瘤患者作为对照组。采用免疫组化S-P法检测并比较各组患者结直肠病变组织中SM22α、TGF-β_(1)表达水平,采用Spearman秩相关分析SM22α、TGF-β_(1)表达水平与肿瘤侵袭转移的关系,并采用受试者特征曲线(ROC)评估SM22α和TGF-β_(1)表达水平对结直肠癌患者肿瘤侵袭转移的评估效能。结果研究组患者的SM22α阳性表达率为48.08%,明显低于对照组的64.37%,TGF-β_(1)阳性表达率为69.23%,明显高于对照组的36.78%,差异均有统计学意义(P<0.05);C期/D期患者SM22α阳性表达率为32.61%,明显低于A期/B期的60.34%,TGF-β_(1)阳性表达率为80.43%,明显高于A期/B期的60.34%,差异均有统计学意义(P<0.05);侵袭转移组患者的SM22α阳性表达率为32.26%,明显低于非侵袭转移组的54.79%,TGF-β_(1)阳性表达率为87.10%,明显高于非侵袭转移组的64.38%,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman秩相关分析结果显示,SM22α与肿瘤侵袭转移呈负相关(r=-0.471,P<0.05),TGF-β_(1)与肿瘤侵袭转移呈正相关(r=0.543,P<0.05);ROC分析结果显示,SM22α、TGF-β_(1)及联合检测肿瘤侵袭转移的ROC曲线下面积分别为0.663、0.690、0.731,检测灵敏度分别为80.3%、78.6%、84.5%,特异性分别为60.8%、60.0%、61.8%,并且联合检测的ROC曲线下面积高于单项检测,检测灵敏度和特异性高于单项检测。结论结直肠癌组织中SM22α表达减少,TGF-β_(1)表达增加,且与肿瘤侵袭转移密切相关,可用于初步诊断肿瘤侵袭转移,且两者联合检测诊断效能更好。

SM-22α、α-SMA的表达与下肢静脉曲张具有相关性

探讨SM-22α、α-SMA水平变化与下肢静脉曲张的相关性及其意义。采用间苯二酚品红染色法观察血管平滑肌细胞（VSMCs）结构,通过免疫组织化学染色观察正常大隐静脉及曲张大隐静脉切片SM-22α和α-SMA表达情况;利用RT-PCR检测正常大隐静脉及曲张大隐静脉中SM-22α和α-SMA m RNA表达水平,并用Western blotting检测正常大隐静脉及曲张大隐静脉SM-22α和α-SMA蛋白表达水平。结果显示,曲张静脉管壁血管平滑肌细胞SM-22α和α-SMA阳性表达率较正常大隐静脉均明显降低,与正常组比较,静脉曲张患者血清中SM-22α和α-SMA m RNA表达水平均明显降低,血管管壁平滑肌细胞SM-22α和α-SMA蛋白表达水平均明显降低（p〈0.05或p〈0.01）。曲张静脉VSMCs有明显向内膜增殖“迁移”现象,且收缩型VSMCs中SM-22α和α-SMA m RNA及蛋白表达水平均随VSMCs去分化程度增加而减少,这可能是静脉曲张发生、发展的机制之一。

人参皂甙Rh2对大鼠主动脉STAT3、PCNA及SM22α表达的影响

目的:探讨人参皂甙Rh2(GS-Rh2)对大鼠主动脉信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)以及血管平滑肌22α蛋白(SM22α)表达的影响。方法:40只6周龄雄性普通级大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组、雷帕霉素组、人参皂甙组。正常对照组,正常饮食喂养13周;其余3组高脂饮食喂养13周。13周后,处死大鼠后留取血标本,检测血脂及IL-6,留取主动脉标本,放入液氮罐中保存,提取总蛋白,做Western Blot检测,观察主动脉组织STAT3、PCNA及SM22α表达强度变化。结果:和正常对照组相比,阳性对照组血脂明显增高,血IL-6水平升高,主动脉STAT3、PCNA蛋白表达增加,SM22α蛋白表达减少;和阳性对照组相比,雷帕霉素组、GSRh2组血脂无显著性差异,血IL-6水平下降,主动脉STAT3、PCNA蛋白表达减少,SM22α蛋白表达增加。结论:人参皂甙Rh2可以抑制大鼠主动脉STAT3的表达,可以抑制主动脉平滑肌细胞增殖,并抑制主动脉平滑肌细胞由分化型向合成型转化,GS-Rh2可能通过抑制STAT3的表达而起到抑制平滑肌细胞增殖和表型转化的作用。

人参-三七-川芎提取物延缓高糖诱导的小鼠血管钙化的机制

目的:从小鼠颈总动脉、胸主动脉中骨桥蛋白(OPN)和平滑肌22α蛋白(SM22α)表达及血管钙盐沉积程度,探讨人参-三七-川芎提取物对高糖诱导的小鼠血管钙化的保护作用。方法:130只雄性C57BL/6小鼠先随机分为正常组和高糖组。高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)后,高脂饮食连续喂养7个月,之后再次随机分为模型组、人参-三七-川芎提取物低、高剂量组(0.819,1.638 g·kg^-1)及二甲双胍组(150 mg·kg^-1)。每组灌胃给药,每天1次,连续9周,并监测血糖变化。给药结束前7 d,购进一批4周龄雄性C57BL/6小鼠,正常喂养1周,作为青年组。全部给药结束后,收集小鼠颈总动脉和胸主动脉组织。分别采用冯库萨(Von Kossa)染色判断小鼠颈总动脉、胸主动脉钙盐沉积程度,免疫组化检测小鼠颈总动脉、胸主动脉中OPN与SM22α蛋白表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠颈总动脉中OPN与SM22α蛋白表达情况。结果:与青年组比较,正常组小鼠血糖升高无统计学差异,颈总动脉、胸主动脉结构染色均匀,未见黑色颗粒状沉淀;与正常组比较,模型组血糖显著升高(P<0.01),血管中内膜弹性纤维内有大量棕黑色颗粒沉积,钙盐沉积程度明显;与模型组比较,各给药组血糖明显下降(P<0.05,P<0.01),血管钙盐沉积程度明显减轻。与青年组比较,正常组小鼠颈总动脉、胸主动脉中OPN蛋白和SM22α蛋白表达无显著改变;与正常组比较,模型组颈总动脉、胸主动脉中内膜OPN蛋白表达呈阳性,SM22α蛋白表达呈弱阳性,颈总动脉中OPN蛋白表达灰度值显著升高(P<0.01),SM22α蛋白表达灰度值显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组颈总动脉、胸主动脉中内膜OPN蛋白和SM22α蛋白表达显著改善,颈总动脉中OPN蛋白表达灰度值明显降低(P<0.05,P<0.01),SM22α蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:高糖能够诱导小鼠颈总动脉、胸主动脉钙化,加速血管老化,这一形成过程可能与OPN与SM22α表达有关。人参-三七-川芎提取物可通过调节OPN与SM22α表达,减轻血管钙化,延缓血管老化。