麦根腐平脐蠕孢引起新疆小麦根腐病的病原鉴定及其生物学特性分析

【目的】研究新疆小麦根腐病病原菌种类和生物学特性,为制定该病有效防控措施提供科学依据。【方法】采用组织分离法对麦根腐病株病原菌进行分离培养,选择新疆试验区的代表性菌株检测致病力,结合形态学及分子生物学方法鉴定病原菌种类,采用生长速率法测定主要生物学特性。【结果】试验区代表菌株(KS1-3、YL26、TC30及ML26)均具有致病性;经鉴定该病病原菌为小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana。PDA培养基最为适合菌菌株的生长,温度5~35℃、pH值4~10条件下均可生长,最适温度30℃,最适pH值7,对光照不敏感,最佳碳源为可溶性淀粉、蔗糖,最佳氮源为牛肉膏、蛋白胨。【结论】新疆小麦根腐病病原为麦根腐平脐蠕孢B.sorokiniana,其主要生物学物性与多数菌物相类似,较喜温喜光。

麦根腐平脐蠕孢cDNA文库的构建及BsTup1互作蛋白筛选

【目的】深入探究麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)生长发育及致病力的分子作用机制,并鉴定BsTup1的互作蛋白。【方法】利用麦根腐平脐蠕孢(B.sorokiniana)孢子和不同时期的菌丝体为材料,构建酵母双杂交cDNA文库,以BsTup1基因为诱饵来筛选酵母双杂交文库,确定与BsTup1相互作用的蛋白。【结果】1)利用SMART(switching mechanism at 5′end of the RNA transcript)技术首次成功构建了麦根腐平脐蠕孢(B.sorokini-ana)分生孢子和菌丝体的混合cDNA文库。文库鉴定结果表明,构建的cDNA文库库容为4.8×10^(7) cfu·mL^(-1),文库插入片段重组率达100%且平均大小为1000 bp。2)构建了pGBKT7-BsTup1诱饵载体,无自激活活性。3)使用诱饵蛋白载体pGBKT7-BsTup1对麦根腐平脐蠕孢(B.sorokiniana)酵母双杂交cDNA文库进行筛选,经测序、序列比对和酵母回转验证,获得38个与BsTup1相互作用的候选蛋白。【结论】成功构建了麦根腐平脐蠕孢(B.sorokiniana)的cDNA文库,并鉴定出38个与BsTup1相互作用的候选蛋白。

橡胶狗尾草平脐蠕孢叶斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

为明确采自西双版纳景洪地区疑似橡胶麻点病的病原菌,采用组织分离法进行病原菌分离,活体接种法进行致病性测定,通过形态学观察结合rDNA-ITS和GAPDH两个核苷酸片段序列分析,将病原菌确定为狗尾草平脐蠕孢Bipolaris setariae。通过单因子变量试验,对病原菌进行生物学特性研究,结果表明:菌丝生长最适温度为30℃,最适pH为7~8,最适培养基为PDA,菌丝致死温度为53℃,10 min。该病原菌能有效利用多种碳源和氮源,碳源以可溶性淀粉利用率最高,最适氮源为蛋白胨。24 h黑暗条件下培养更有利于菌丝生长。分生孢子萌发的最适温度为28~35℃,最适pH为7~8,28℃黑暗培养2 h后萌发率达到最大,为95.5%,分生孢子致死温度为60℃,10 min。

中国平脐蠕孢属的分类研究I

本文报道了平脐蠕孢属的一个新种,早熟禾平脐蠕孢Bipolaris poae-pratensis,2个中国新记录种,即野牛草平脐蠕孢Bipolaris buchloes和弯曲平脐蠕孢Bipolaris papendorfii, 对其他4个平脐蠕孢属的种的有关分类问题进行了讨论,澄清了一些种名的混乱。标本保存在山东农业大学植物病理学系标本室(HSAUP)和中国科学院真菌标本室(HMAS)。

玉米根腐病菌麦根腐平脐蠕孢的LAMP检测方法

麦根腐平脐蠕孢是玉米根腐病的重要病原菌之一,旨为建立一种基于环介导等温扩增技术(LAMP)的麦根腐平脐蠕孢快速检测方法。首先,根据麦根腐平脐蠕孢参与黑色素生物合成途径的Brn1基因部分序列设计了一套LAMP检测引物;然后,针对该引物组筛选了其最佳反应温度,检测了LAMP反应的特异性和灵敏度,并以人工接种麦根腐平脐蠕孢的玉米根腐病病株为样本评价了LAMP检测方法的效果。结果表明,本研究设计的引物组在61~68℃条件下均能实现对靶标基因的扩增,其中以66℃为最佳反应温度;在特异性检测中,引物组能从10种分离自玉米根腐病样本的主要病原真菌DNA中特异性地检测出麦根腐平脐蠕孢;在灵敏度检测中,对携带靶基因Brn1的质粒DNA最低检测限是10 copies/μL,在此检测限浓度下,25 min左右即可实现扩增;在对玉米根腐病样本检测中,在1 pg/μL的玉米根组织DNA中即可检测出麦根腐平脐蠕孢。建立的麦根腐平脐蠕孢LAMP检测方法具有较强的特异性和较高的灵敏度。

麦根腐平脐蠕孢和薏苡平脐蠕孢防治稻田稗草的生物活性和安全性

对分离自云南昆明感病稗草[Echinochloa crus-galli(L.)Beauv.]上的病原真菌麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris so-rokiniana)和薏苡平脐蠕孢(Bipolaris coicis)开展了防治稗草潜力的评价。结果显示,B.sorokiniana和B.coicis两菌株培养5d的发酵原液对稗草根长和芽长均有很高的抑制作用,根长最高抑制率分别为99.59%和95.78%,芽长最高抑制率分别为91.14%和82.13%。两菌株对稗草离体叶片致病性的室内试验表明,菌丝体悬浮液处理5d后稗草叶片病情指数最高可达100%。两菌株对稗草植株防效的温室试验表明,菌丝体悬浮液处理稗草7 d后植株下部叶片出现萎蔫症状、脱落及死亡,处理21d后稗草最高死亡率达到82.67%和80.00%。菌株对作物的安全性试验表明,麦根腐平脐蠕孢对作物的安全性显著高于薏苡平脐蠕孢。作为生防潜力菌株,麦根腐平脐蠕孢具有更大的应用潜力。

3种牧草根际平脐蠕孢形态和生物学特性

自甘肃环县沟壑草地牧草根部常规组织分离获得特异平脐蠕孢、高粱平脐蠕孢和麦根腐平脐蠕孢,并对其生物学特性进行了研究。结果表明,3种平脐蠕孢在生物学特性上有明显差异,特异平脐蠕孢孢子萌发的温限为5 45℃,最适萌发温度为35℃,在45℃时萌发率仍高达85.1%;高粱平脐蠕孢孢子的萌发温限为540℃,最适萌发温度为15～30℃;麦根腐平脐蠕孢孢子的萌发温限为545℃,最适温度15～25℃,在45℃时萌发率仅为2.3%;不同pH值时特异平脐蠕孢孢子萌发率均较后2种高,且前者孢子萌发的最适pH值为5.59～6.47,后两者pH值均为6.47;土壤液等4种营养液对特异平脐蠕孢孢子萌发率在4h后有促进作用,对高粱平脐蠕孢在最初2h有促进作用,而对麦根腐平脐蠕孢则有抑制作用;3种菌萌发均需要液态水,但对光不敏感。

牧草根际3种平脐蠕孢菌培养性状及对营养的利用能力

首次对我国典型草原牧草根际特异平脐蠕孢菌、高粱平脐蠕孢菌及麦根腐平脐蠕孢菌3种真菌的培养特性进行了研究.结果表明,3种平脐蠕孢菌菌丝生长的温限均为10～35℃,最适温度30℃.在试验的11种碳源中,D-果糖等碳源对3种平脐蠕孢菌菌丝生长有明显的促进作用,菊糖、氯醛糖有较强的抑制作用.在试验的12种氮源中,亮氨酸、L-谷氨酸、硝酸铵有明显的促进作用,而L-精氨酸、尿素、碳酸铵、甘氨酸有较强的抑制作用.高粱平脐蠕孢菌对多种碳、氮源利用能力较强,麦根腐平脐蠕孢菌则较弱.3种平脐蠕孢菌在不同碳、氮源培养基上菌落颜色、大小、边缘整齐度有明显差异.

我国北方玉米上平脐蠕孢属和弯孢属真菌及其所致叶斑病

平脐蠕孢属(Bipolaris)和弯孢属(Curvularia)真菌可引起多种玉米叶斑病。为了解当前玉米生产上此类病害的发生情况,2014年8-9月对我国玉米主产区北京、河北、河南、黑龙江和吉林5省市玉米上疑似由该两属真菌引起的叶部病斑样品进行了采集,随后进行了真菌的分离和鉴定。共采集样品42份,根据其形状特点归为4类:长条形、椭圆形、小点状和梭形病斑。经组织分离获得平脐蠕孢属和弯孢属真菌28株,基于形态学和rDNA-ITS序列的系统发育分析共鉴定出5个种:玉蜀黍平脐蠕孢(B.maydis)、玉米平脐蠕孢(B.zeae)、玉米生平脐蠕孢(B.zeicola)、新月弯孢(C.lunata)和穂状弯孢(C.spicifera)。从长条形病斑和椭圆形病斑上分离到的主要是B.maydis和B.zeicola,从小点状病斑分离到的主要是C.lunata,其次是B.zeae。分离出C.lunata的样品病斑较为稀疏、颜色略浅、呈苍白色,分离出B.zeae的样品病斑更为密集、颜色较深。从梭型病斑分离到的是C.spicifera。有少数样品可分离到上述两种菌。采用孢子悬浮液喷雾法对温室玉米苗接种,上述5种真菌均可致病。以接种B.maydis发病最快,发病最重;接种B.zeicola、C.lunata或C.spicifera发病较慢,症状明显;接种B.zeae发病最慢,仅引起小点状病斑。研究结果可为玉米叶斑病的正确诊断提供资料和依据。

牧草根际狗牙根平脐蠕孢菌的研究

对陇东典型草地牧草根际分离获得的狗牙根平脐蠕孢的形态、培养性状和生物学性状进行了研究。结果表明，狗牙根平脐蠕孢菌分生孢子在10-40℃及pH值4．53～9．18均能萌发，适宜温度为20-30℃，适宜pH值为4．53～6．47，在液态水中萌发良好，且对光不敏感。麦根浸出液、羊粪浸出液可抑制孢子萌发，而土壤液和低浓度蔗糖液能促进孢子萌发；葡萄糖、乳糖、D-树胶醛糖、D-半乳糖、可溶性淀粉、甘露糖、胁木糖等碳源及硝酸钠、L-谷氨酸和亮氨酸等氮源对菌丝生长有促进作用，为该菌的良好碳、氮源；麦芽糖和氯醛糖等碳源及碳酸铵、尿素、精氨酸、氯化铵和甘氨酸等氮源对菌丝生长有抑制作用，为该菌的不良碳、氮源。该菌在各种碳、氮源培养基上菌落形态有差异。

玉米叶斑病菌麦根腐平脐蠕孢的生物学特性及其对杀菌剂的敏感性

麦根腐平脐蠕孢是引起玉米叶斑病的一种病原菌。明确了该病原菌在不同温度、pH及碳/氮源条件下的菌丝生长、产孢量及孢子萌发等生物学特性,并评价该病原菌对8种常用杀菌剂的敏感性。结果表明,温度为28℃时菌丝生长最快,达到73.00 mm,并且孢子萌发率最高,为96.91%;产孢的最佳温度为25℃,孢子量为15.13×10^3/cm^2。在pH值7和8的培养基上菌丝生长最快,分别为65.25,65.13 mm,孢子萌发率分别为88.75%,85.00%;在pH值7的培养基上产孢量最高,为48.44×10^3/cm^2。在以淀粉和蔗糖为碳源的培养基上菌丝生长量分别为53.00,50.17 mm;在以半乳糖为碳源的培养基上产孢量最高,为1.93×10^4/cm^2,其次为淀粉培养基,产孢量为0.42×10^4/cm^2;在以淀粉、半乳糖和蔗糖为碳源的培养基上孢子萌发率分别为76.03%,74.52%,72.26%。在以硝酸钠为氮源的培养基上菌丝生长最快,为36.44 mm;在以脯氨酸为氮源的培养基上产孢量最高,为5.59×10^3/cm^2;在以脯氨酸和硝酸钠为氮源的培养基上孢子萌发率分别为49.38%,45.00%。对供试杀菌剂敏感性测定结果表明,戊唑醇和咯菌腈对菌丝生长抑制活性最高,EC50均为0.07 mg/L,咯菌腈对孢子萌发的抑制活性最高,EC50为2.80 mg/L。结果将为了解玉米麦根腐平脐蠕孢叶斑病的发生流行规律并制定有效防治措施提供理论依据。

狗牙根平脐蠕孢菌生物学特性及药剂筛选

对狗牙根平脐蠕孢菌的生物学特性及5种杀菌剂对该病原菌的抑制作用进行了研究。结果表明:狗牙根平脐蠕孢菌对多种碳、氮源都能利用,以蔗糖和硝酸钾、L-天冬酰胺最好,但以脲为氮源的培养基生长较差。菌丝最佳生长温度是25-30℃之间,在25℃时最利于产孢,菌丝生长和分生孢子的致死温度是56℃;该菌在pH3-11范围内均能生长,产生分生孢子,菌丝生长的最适pH 5-7,产孢量最大的pH是3,9,10;糖浓度在2%-8%菌丝能生长,在糖浓度为2%时菌丝生长最好,产孢量最高;光照对病原菌的菌丝生长和产孢有明显影响,在全光照的条件下有利于菌丝的生长,但不会产孢,黑暗12 h光照12 h既利于菌丝生长又利于产孢,而全黑暗的条件下不利于菌丝生长和产孢。对5种杀菌剂的研究表明:退菌特和百菌清对狗牙根平脐蠕孢菌菌丝生长的抑制效果较好,其它杀菌剂也能有效的抑制菌丝的生长。

椰子平脐蠕孢叶斑病病原鉴定及生物学特性测定

2012年10月，在海南省文昌市的椰子苗圃中，发现了一种新的叶斑病。显微观察表明，病原菌分生孢子稍弯曲，浅褐色，纺锤状或梭状，具有5-9个假隔膜、分生孢子梗多单生，直立或稍弯曲，表明其为平脐蠕孢属（Bipolari．sp）。ITS序列分析表明其和4株狗尾草平脐蠕孢的序列同源性（HE792936．1，JX462256，GU073108．1，FJ606786．1）的同源性为99％。生物学特性研究结果表明：该菌菌丝适宜生长温度为20～30℃，菌丝生长和孢子最适萌发温度分别是25℃和30℃；最适pH值为4～11；玉米粉培养基（CAM）及马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）最适合菌丝生长．最佳碳源为蔗糖。甘油不适合菌丝生长；最佳氮源为蛋白胨，其次是磷酸氢二铵：完全光照有利于菌丝生长。菌丝及分生孢子的致死温度和时间分别是56℃，15min。

冰草根际蟋蟀草平脐蠕孢菌的研究

对冰草根际分离获得的蟋蟀草平脐蠕孢（Bipolaris eleusineaJ.H.Peng et J.Y.Lu）的形态特征、培养性状及生物学特性进行研究,以期了解牧草根部平脐蠕孢菌的生长发育特点,并为该菌引起的牧草根病防治提供依据。结果表明：蟋蟀草平脐蠕孢分生孢子萌发的温度范围为5℃~40℃,适宜温度20℃~30℃;在各酸度下均能萌发,最适为pH 6.47;其分生孢子的萌发需要液态水,在相对湿度100%时分生孢子萌发率仅为3.2%,而相对湿度低于100%时孢子不萌发;低稀释倍数的土壤悬液、麦根浸出液、羊粪浸出液和蔗糖溶液[0]及高稀释倍数的麦根液和羊粪液均抑制孢子萌发,但高稀释倍数的土壤液和蔗糖液能促进孢子萌发;且孢子萌发对光不敏感。蟋蟀草平脐蠕孢菌丝生长的温度范围为10℃-40℃,最适25℃;碳源中D-木糖、氯醛糖对蟋蟀草平脐蠕孢菌生长具有明显抑制作用,而蔗糖、甘露糖和D-果糖对蟋蟀草平脐蠕孢菌丝生长具有明显促进作用;氮源中硝酸钠、亮氨酸对蟋蟀草平脐蠕孢菌丝的生长具有促进作用,而尿素等9种氮源均有抑制作用,并且此菌在含有各种碳、氮源的培养基上的菌落形态有差异。在国内首次报道此菌侵染冰草（Agropyron cristatum）,为一新寄主植物。

玉蜀黍平脐蠕孢拮抗细菌YB01的鉴定及拮抗作用

通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析对玉蜀黍平脐蠕孢(Bipolaris maydis)拮抗细菌YB01进行鉴定,结果表明,该菌为苍白杆菌属的一种(Ochrobactrumsp.),序列号为HQ141339。YB01对玉蜀黍平脐蠕孢的拮抗作用研究表明:YB01培养液可以有效抑制玉蜀黍平脐蠕孢的生长、孢子的形成与萌发。显微镜观察结果表明,用YB01培养液处理的玉蜀黍平脐蠕孢菌丝体膨大变形,细胞质发生浓缩,表明YB01的拮抗作用主要是通过其代谢产物影响玉蜀黍平脐蠕孢细胞壁而实现的。

内脐蠕孢属、平脐蠕孢属和凸脐蠕孢属的分类鉴定

本文是继前一个研究之后对来自东北的24种禾本科植物和海南省的一种双子叶植物(橡胶树)上的14种“长蠕孢菌”的分类鉴定的继续,共鉴定出内脐蠕孢属(Drechslera)1种,平脐蠕孢属(Bipolaris)9种和凸脐蠕孢属(Exserohilum)4种。其中双色平脐蠕孢(B.bicolor)和虉草内脐蠕孢(D.tetrarrhenae) 为国内新记录种;狗牙根平脐蠕孢(B.cynodontis)、长孢平脐蠕孢(B.urochloae) 和环形凸脐蠕孢(E.holmii)3个种首次在东北地区报道;此外,还报道了橡胶树平脐蠕孢(B.heveae) 的一个新寄生植物——燕麦(Avena sativaL.)。

接菌时期与保湿时间对麦根腐平脐蠕孢小麦黑胚病的影响

麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)是小麦黑胚病的重要致病真菌。建立小麦对B.sorokiniana黑胚病的抗性评价方法是培育抗病品种的基础。就不同接菌时期与保湿天数对B.sorokiniana引发的黑胚病严重度进行了研究。结果表明,接菌时间越早、保湿时间越长B.sorokiniana引发的小麦黑胚病越严重。适宜接菌鉴定条件为:花后5~10d接菌,套袋保湿5~7d。

麦根腐平脐蠕孢病菌的菌落变异研究

小麦根腐平脐蠕孢病菌在ＰＳＡ培养基上，极易发生菌落变异，变异后菌落呈半月形、扇形、放射形、不规则形。变异在培养中不稳定，可以恢复原菌落状态。变异后的菌落生长速度下降，菌体干重和产孢量降低。

苏丹草叶斑病平脐蠕孢菌的生物学特性

对从苏丹草叶斑病病斑上分离获得的高粱平脐蠕孢菌[Bipolaris sorghicola（Lefebvre et Sherwin）Alcorn]的形态特征、培养特性及生物学特性进行了研究,以期了解苏丹草叶斑病平脐蠕孢菌的生长发育特点,并为防治该菌引起的病害提供依据。结果表明：高粱平脐蠕孢菌分生孢子在15~40℃温度下均能萌发,最适萌发温度为25℃,最适萌发pH值为6;菌丝在15~40℃,pH值4~10范围内均能生长,最适生长温度为25℃,最适生长pH值为8;在碳源中可溶性淀粉和乳糖,氮源中甘氨酸、脯氨酸和蛋白胨对菌丝生长有促进作用;而脲等氮源对菌丝生长有抑制作用,并且在各碳源、氮源培养基上菌落形态有差异。