超高效液相色谱-高分辨质谱法定量测定肉类特征肽的质谱采集模式对比

采用超高效液相色谱-高分辨质谱法测定肉类特征肽,探讨液相色谱洗脱参数、质谱采集模式和参数等对肉类特征肽定量测定的影响,以建立肉类特征肽鉴别和定量测定的方法。样品中蛋白质经超声辅助法提取,胰蛋白酶酶解后经固相柱净化去除基质中的盐类等干扰物,以体积分数0.1%的甲酸水溶液和乙腈为流动相,通过超高效液相色谱梯度洗脱分离,采用四极杆静电场轨道阱高分辨质谱的平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)模式和靶标单一离子监测/数据依赖扫描(targeted single ion monitoring/data-dependent MS/MS scans,tSIM/ddMS 2)模式采集,外标法定量测定。结果表明,色谱梯度洗脱条件、碰撞能量、采集模式等对特征肽的测定影响较大,梯度洗脱流速增加至0.3 mL/min可有效减少峰展宽与拖尾,PRM采集模式不需优化碰撞能可直接采用归一化碰撞能为28的值,tSIM/ddMS 2采集模式可采用Skyline软件优化出的最优碰撞能值,从而简化优化碰撞能的过程。不同采集模式下各特征肽标准溶液质量浓度的线性关系良好(相关系数≥0.99),检出限分别为0.04~0.19μg/L、0.01~0.16μg/L,在牛肉丸提取液中的基质效应为81.3%~114.7%,3个添加浓度下的加标回收率为89%~117%,且相对标准偏差≤10%(n=5)。2种采集模式均可利用二级碎片离子鉴别目标物以提高检测的准确性,12批次牛肉丸样品检测中共检出含有猪肉源或鸡肉源特征肽的比例为58.3%,其中有明确标识的为42.8%。

基于HPLC-Q-Exactive的PRM技术检测核桃露中核桃、杏仁、花生、大豆源性成分

应用高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的PRM技术,检测核桃露中核桃、杏仁和主要掺杂物种大豆、花生4种源性成分。从植物组织(核桃、杏仁、大豆和花生)提取的蛋白质,经还原、烷基化、胰蛋白酶酶解后,采用HPLC-Q-Exactive的Full MS-ddMS2(TopN)模式检测,数据经Proteome Discoverer软件与Uniprot蛋白数据库对比分析,筛选出各物种的特征肽段,然后根据这些肽标志物的质荷比和出峰时间建立HPLC-Q-Exactive-PRM检测方法,并使用Skyline软件对特征肽进行定量分析。结果表明:核桃露中核桃蛋白、杏仁蛋白、大豆蛋白和花生蛋白的最低检出限分别为10、30、20 mg/L和10 mg/L。经验证,该检测技术具有良好的专属性,比MRM技术更为准确、可靠,且有效消除了其他离子的干扰,为植物蛋白饮料物种来源鉴定提供了一种稳定、灵敏、可靠的检测技术。