平行多波长色谱指纹图谱均值评价法的不确定度和可靠度研究

目的建立平行多波长色谱指纹谱均值法(PMW-FP-AM)的不确定度和可靠度评价理论,并用以评价单批二妙丸(Ermiao Wan,EMW)平行六波长指纹谱均值法(PSW-FP-AM)结果与均值法(AM)对应标准谱的不确定度和可靠度。方法采用RP-HPLC法测定二妙丸平行六波长HPLC指纹图谱(EMW-PSW-HPLC-FP),以均值法和系统指纹定量法综合鉴定11批EMW质量。结果以小檗碱为参照物峰,分别确定53(254nm)、54(265nm)、51(284nm)、57(305nm)、53(326nm)和47(340nm)个共有指纹峰,建立了EMW-PSW-HPLC-FP。用PSW-FP-AM鉴定S2、S6和S10(Ⅰ级)质量最好,S7、S8和S9(Ⅱ级)质量很好,S5和S11(Ⅲ级)质量好,S1、S3和S4(Ⅵ级)质量一般。评价出EMW-PSW-FP-AM对应标准的定性定量及均化性可靠度均>0.97,表明标准谱反映的化学指纹数量和含量分布比例与整体含量信息的可靠度极高。S2、S5、S6、S7、S8、S9和S10的定性定量信息可靠度(0.918～0.984)极高,S11定性定量信息可靠;S1、S3和S4的定性定量信息的可靠度(0.778～0.881)中等。结论所建立方法能准确反映PMW-FP-AM结果所代表质量信息的不确定性,评价PMW-FP-AM标准和单批指纹图谱所表征的中药质量的定性和定量信息的可靠程度。

平行五波长高效液相色谱指纹图谱全息整合法定量鉴定杞菊地黄丸的整体质量

建立了杞菊地黄丸(QijudihuangPill,QJDHP)平行五波长(PFW)高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并依据系统指纹定量法结合全息整合法定量鉴定了杞菊地黄丸的整体质量。采用反相HPLC法,以丹皮酚(POL)为参照物峰,分别于203、228、265、280和326nm下检测,分别确定了51、49、52、49和47个共有指纹峰,建立了QJDHP的PFW-HPLC指纹图谱。分别以权重法、均值法和投影参数法整合5个波长下各样品的定性定量全信息,结果基于5个波长综合信息用系统指纹定量法鉴定11批QJDHP样品,其中有8批质量为好,1批为较好,质量一般为2批。评价时以均值法最为简捷和准确。本实验结果表明,平行多波长指纹图谱整合法是基于从全信息角度整体定性和定量鉴定中药质量的有效可信方法,是对HPLC-二极管阵列检测(DAD)三维指纹图谱的简化定量处理,其整体综合定量鉴定结果具有可靠性。

平行五波长高效液相色谱指纹图谱全息整合法定量鉴定补中益气丸整体质量

目的建立补中益气丸(Buzhong Yiqi Wan,BZYQW)平行五波长HPLC指纹图谱,用全息整合法鉴定补中益气丸整体质量。方法采用RP-HPLC法,以橙皮苷(HI)为参照物峰,在203、228、265、280、326 nm下检测,分别确定了82、87、61、68、48个共有指纹峰,建立BZYQW平行五波长HPLC指纹图谱。分别以权重法、均值法和投影参数法整合五波长下各样品的定性定量全信息,并用系统指纹定量法(SFQM)鉴定了10批BZYQW的质量等级。结果 10批BZYQW,用平均值法评价S3和S5的质量等级是Ⅶ级(次);用权重法评价S3的质量级别是Ⅷ级(劣);用投影参数法评价S3、S5和S6的质量级别是Ⅶ级(次)。其余质量级别均≤Ⅵ(一般)。结论平行多波长指纹图谱全信息整合法是基于从多维全信息角度整体定性和整体定量鉴定中药质量的有效可信方法 ,可作为补中益气丸质量控制的依据。

用双标定量指纹法定桂附地黄丸平行五波长高效液相色谱对照指纹图谱标准

目的用双标定量指纹法研究桂附地黄丸(Guifu Dihuang Wan,GFDHW)对照指纹图谱(RFP)来实现指纹图谱标准的复原。方法采用HPLC等吸收双波长法测定了桂附地黄丸中没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷、马钱苷和丹皮酚含量。在210、230、246、265和280nm 5个特征检测波长处建立GFDHW平行五波长指纹谱;以没食子酸和丹皮酚为双参照物峰,采用双标定量指纹法恢复GFDHW-RFP。结果以GFDHW中5组分含量测定结果和平行五波长指纹谱鉴定结果分别聚类分析比较不同厂家产品质量差异,结果以后者更为准确可靠。建立了GFDHW双标定量指纹法技术标准。结论基于多指标定量分析和平行五波长高效液相指纹谱的双标定量指纹法能够确定RFP的标准制剂和实现实时随行定量检测GFDHW指纹图谱,这是GFDHW现代化的有效新方法。

柴胡安心胶囊平行四波长高效液相色谱指纹图谱研究

目的建立柴胡安心胶囊(CHANCs)的四波长高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法采用HPLC法,分别于254,275,290,330 nm波长下对样品进行检测,建立CHANCs平行四波长高效液相色谱指纹图谱,以均值法整合各样品的色谱信息,结合系统指纹定量法区分8批样品的质量差异。结果以葛根素为参照指纹峰,分别标定了63,65,53,27个共有峰。8批CHANCs中1批(S7)质量好,2批(S1,S3)质量很好,5批(S2,S4,S5,S6,S8)质量极好。结论平行多波长指纹图谱联合系统指纹定量法鉴定CHANCs的质量稳定、可靠。

HPLC多波长切换指纹图谱结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律

目的 建立测定白术、土白术水溶性和脂溶性成分的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换指纹图谱,结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律。方法 建立白术、土白术水溶性及脂溶性成分的HPLC-DAD多波长切换指纹图谱测定方法,测定17批白术和17批土白术的HPLC指纹图谱,采用相似度评价、聚类分析、OPLS-DA分析进行统计分析。结果 白术指纹图谱中共标定9个共有峰,土白术指纹图谱中共标定10个共有峰。指认了新绿原酸、绿原酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及苍术酮6个成分,土炒后1号峰、4号峰(白术内酯Ⅲ)、8号峰(白术内酯Ⅱ)峰面积增加,2号峰(新绿原酸)、3号峰(绿原酸)、5号峰、6号峰、7号峰、9号峰(白术内酯Ⅰ)、10号峰(苍术酮)土炒后峰面积均降低。结论 所建立指纹图谱方法能够系统地分析白术土炒前后化学成分的变化规律,可为进一步规范白术土炒工艺,制定土白术专属性质量标准,研究土白术炮制原理提供实验基础。

离子色谱指纹图谱分析在烟用香精香料品质评价中的应用

为保证烟用香精香料品质的一致性,采用离子色谱法对烟用香精香料样品中的9种有机酸及7种无机阴离子进行分析。1.0 g样品中加入10 mL去离子水,振荡萃取30 min后,水相溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液进一步采用RP前处理柱除去基质,经离子色谱仪分离测定。采用Dionex IonPac AS11-HC阴离子交换柱及淋洗液梯度洗脱,9种有机酸和7种常规无机阴离子标准工作溶液的保留时间和峰面积日内精密度(RSD)分别为0.01%~0.69%和1.34%~2.98%,日间RSD分别为0.03%~0.68%和3.54%~5.16%。同时对烟用香精香料标准样品A~D(各5个批次)中有机酸和无机酸的保留时间和峰面积RSD进行考察,得到的保留时间和峰面积日内RSD分别为0.01%~0.71%和2.39%~3.22%,日间RSD分别0.05%~0.81%和3.61%~6.02%。建立了4种烟用香精香料(各5个批次)的指纹谱图库,并采用系统聚类分析和相似度分析法对其他生产厂家样品进行品质评价。结果表明,聚类分析法能有效地从不同生产厂家的产品中筛选出与标准样品质量最相近的样品;实际样品AY3、BY2、CY2及DY1与香精香料标准品性质最接近,品质较好。相似度分析可以对不同生产厂家的产品质量进行更加具体、量化的评价,实际样品AY3、BY2、CY2及DY1与香精香料标准品的化学成分相似度值均大于97.7%,符合相似度评价要求。相较于超声辅助液液萃取-气相色谱法,对于个别特殊样品,离子色谱法能更有效地区分香精香料样品间的品质差异。

金藤清痹颗粒多波长融合指纹图谱建立及质量评价

目的建立金藤清痹颗粒多波长融合指纹图谱,并对其质量进行评价。方法分析采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相水(含0.5%磷酸)-甲醇,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长262、280、330 nm。以分离度大于1.5以上峰数及共有峰数为指标,对比传统分段融合指纹图谱。采用主成分分析、正交偏最小二乘判别分析考察质量一致性。结果共有峰融合柱指纹图谱优于传统分段融合指纹图谱,19批样品指纹图谱中有22个共有峰,相似度均不低于0.9,指认出7种成分。其中,没食子酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、青藤碱相对峰面积分别为1.088~1.880、0.016~0.027、2.184~3.594、1.133~1.874、0.691~1.137、1.039~1.632。确定4种主成分,VIP大于1的成分有9种。结论该方法稳定可行,区分度良好,可用于金藤清痹颗粒的质量评价,新绿原酸、异绿原酸B、绿原酸可作为该制剂质量评价和工艺优化的重点成分。

通肠清胰合剂HPLC指纹图谱建立及多指标成分的含量测定

目的建立通肠清胰合剂的HPLC指纹图谱,并对5种成分进行含量测定。方法采用Agilent ZORBAX SB?C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈?p H 5.0磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,检测波长为230 nm和250 nm,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃,进样量为10μL。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)建立10个批次的通肠清胰合剂HPLC指纹图谱,同时进行相似度评价。结合软件SPSS 27.0、Origin Pro 2024b进行聚类分析和主成分分析。结果黄芩苷、芍药苷、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚分别在一定浓度范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均回收率和RSD分别在96.39%~97.96%、1.54%~2.37%(n=6)之间。10批通肠清胰合剂指纹图谱显示存在12个共有峰,相似度为0.984~1.000。10批样品可聚为3类,其中S1~S7为第一类,S10为第二类,S8和S9为第三类。指认了5个成分,分别为大黄酸、芍药苷、黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚。结论本研究所建立的通肠清胰合剂HPLC指纹图谱及成分含量测定方法准确可靠、重复性强,为通肠清胰合剂的质量控制提供了科学依据。

基于色谱指纹图谱技术的小粒种咖啡质量控制方法

小粒种咖啡是指咖啡豆粒径较小、产量较低的咖啡品种,主要分布于非洲、亚洲、南美洲等地区。由于生长环境、种植条件、加工工艺等方面的差异,小粒种咖啡的品质也存在着较大的差异,因此,建立一种全面、客观、有效的咖啡品质控制方法,对于保障小粒种咖啡的品质和消费者利益具有重要意义。

白术高效液相色谱指纹图谱及多指标成分含量测定研究

目的 建立白术高效液相色谱(HPLC)指纹图谱和多成分含量的测定方法,为其质量控制提供参考。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换法建立白术指纹图谱,应用相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析法进行化学计量学研究,对其差异性成分白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮进行含量测定。结果 建立了白术HPLC指纹图谱,共标定了9个共有峰,并鉴定出其中4个成分;37批样品与对照图谱相似度为0.539~0.996;不同产地、不同批次样品质量存在较大差异,白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮和未知成分峰9是影响白术质量的重要因素。结论 该研究建立的指纹图谱结合多成分同时测定的方法简便、稳定、准确、可靠,可为白术的整体质量评价和质量标准的提升提供参考,为其药效物质基础研究及其相关复方研究等奠定基础。

青钱柳降糖降尿酸活性部位色谱指纹图谱研究及主成分含量测定

该文开展了青钱柳降糖降尿酸活性部位的含量测定和指纹图谱研究,评价了不同产地青钱柳药材的质量。在活性筛选的指导下优化提取条件,以30%乙醇水溶液为提取溶剂,料液比1∶10,超声提取1 h可有效提取活性部位。采用高效液相色谱法测定绿原酸、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异绿原酸C和阿福豆苷的含量,从各成分含量随着产地的波动情况比较青钱柳药材的质量,其中江西药材S1的成分含量较低,与其它产地药材差异较大。同时建立了青钱柳活性部位的指纹图谱,10批药材的相似度均大于0.9,主成分分析(PCA)表明,江西药材S1、湖南药材S6和S8质量差异较大。10个产地药材的α-糖苷酶和黄嘌呤氧化酶活性抑制实验表明,湖南药材S5的降糖和降尿酸活性最佳,而江西药材S1表现较差,与质量评价结果基本一致。所建方法可为青钱柳的质量控制和质量标准建立提供科学依据。

基于高效液相色谱法的苦参指纹图谱研究

【目的】旨在建立苦参高效液相色谱指纹图谱。【方法】采用Waters Atlantis■T3色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),流动相为0.01 mol/L乙酸铵(0.045%浓氨水)和乙腈,流速1.0 mL/min,梯度洗脱,色谱柱温度30℃,检测波长225 nm。检测12批苦参样品,建立指纹图谱,进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。【结果】建立了苦参的高效液相色谱指纹图谱,苦参样品的相似度在0.940~0.998之间,共标定出23个共有峰,并通过标准品确认了其中5个,分别为氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱。聚类分析将12批苦参样品分为4类,主成分分析后23个共有峰缩减为4个主成分。【结论】该方法快速可靠,稳定性和重复性好,可用于苦参的质量控制。

小柴胡胶囊中间体和制剂的色谱检测方法研究(1)——制剂的定量指纹图谱方法

以小柴胡胶囊为研究对象,建立了甘草苷、党参炔苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草皂苷G_(2)、甘草酸、汉黄芩素、柴胡皂苷B_(2)、柴胡皂苷B_(1)共10种成分的定量分析及指纹图谱方法。采用超高效液相色谱(UHPLC)进行分析,采用Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)以0.05%磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,利用光电二极管阵列检测器(DAD)在215、254 nm波长下进行检测,指纹图谱中含22个共有峰。利用超高效液相色谱-三重四极杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF MS)推断了色谱共有峰中化合物的结构,指纹图谱方法学(精密度、重复性、稳定性)结果的相对标准偏差(RSD)均小于6.0%。10种成分在一定质量浓度范围内线性关系较好,r^(2)>0.999,进样精密度和方法重复性结果的RSD不超过6.0%,供试品溶液在24 h内稳定性良好,各成分的平均加标回收率为91.9%~104%。利用所建方法对12批小柴胡胶囊进行检测,结果表明不同批次之间小柴胡胶囊的一致性良好。该方法稳定、准确、可靠,能够检测小柴胡胶囊中不同饮片中的指标成分,更加全面地反映小柴胡胶囊的质量。

高效液相色谱指纹图谱结合化学模式识别评价白鹤灵芝萘醌类物质及质量分析

目的:建立不同产地来源的白鹤灵芝高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,结合多模式化学计量评价其质量。方法:建立10批白鹤灵芝HPLC指纹图谱,结合相似度评价、聚类分析(CA)、正交偏最小二乘法-判别式分析(OPLS-DA)对不同产地来源的白鹤灵芝进行质量评价。结果:指纹图谱标定了10个共有峰,通过分离纯化鉴定,分别为12-hydroxylapachenole、白鹤灵芝素-A、白鹤灵芝素-E、Heliobuphthalmin、2,2-Dipheny-2H-benzo chromene、白鹤灵芝素-D、白鹤灵芝素-Q、白鹤灵芝素-B、白鹤灵芝素-C、白鹤灵芝素-N;相似度评价结果显示10批样品除广西南宁、邕宁、浦北、凭祥4个产地外相似度均大于0.900 0;结合多模式化学计量学分析可以将10批样品分为2类,并筛选出白鹤灵芝素-C和白鹤灵芝素-A可能是导致不同区域白鹤灵芝质量差异的特征标志物。结论:本研究建立的指纹图谱方法简单、重复性好,结合多模式化学计量学分析可用于评价不同产地来源的白鹤灵芝药材质量。

高效液相色谱-线性指纹定量法评价人参归脾丸的三波长指纹图谱

以样品指纹向量与对照指纹向量的多元化学组分间存在线性函数关系为基础,引入相关系数r、斜率a、截距b及线性定性相似度SL、线性定量相似度ML等概念,建立线性指纹定量法(linearly quantified fingerprint method,LQFM)模型以定性、定量控制中药质量。用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时测定了10批人参归脾丸(Renshen Guipi Wan,RSGPW)分别在203、228和326 nm下的高效液相色谱指纹图谱,运用LQFM理论模型,鉴定RSGPW质量。LQFM能显著区别不同来源的产品,同一厂家产品质量控制一致。鉴定结果与已知的系统指纹定量法评价结果对比,LQFM对中药多元化学成分的复杂系统能实现客观的定性、定量评价。多波长指纹图谱能最大限度地兼顾中药各成分的紫外吸收特征,对中药质量控制具有更全面和可靠的特点。

一种评价多波长中药色谱指纹图谱新方法-均谱法

目的建立一种评价多波长中药色谱指纹图谱的新方法-均谱法（MFM）,以桂附地黄丸（Guifu Dihuang Wan,GFDHW）平行五波长（PFW）高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的均谱为基础,依据系统指纹定量法（SQFM）鉴定桂附地黄丸整体质量。方法采用反相RP-HPLC法,以丹皮酚（POL）为参照物峰,于210、230、246、265、280 nm紫外波长下检测,分别确定了54、58、47、47和44个共有指纹峰,用S1~S3和S5~S9等8批样品的HPLC指纹图谱生成对照指纹图谱,建立GFDHW的PFW-HPLC指纹图谱,并评价12批样品的质量。将同一样品的5个波长下HPLC指纹图谱的信号加和后求平均值作为该样品的均谱,用S1~S3和S5~S9等8批样品HPLC均谱按平均值法生成对照指纹均谱来综合评价12批样品均谱。结果 12批样品用MFM鉴定的结果与用PFW结合SQFM所鉴定的结果一致。结论 MFM能最大限度保留指纹峰,实现化学指纹信息最大化,同时能有效改善指纹信号质量,是HPLC-DAD三维指纹图谱的简化代表,因此可作为综合定量鉴定中药质量的有效、可靠和简便方法。

三波长高效液相色谱指纹图谱、紫外指纹图谱及燃烧热联合鉴定银翘解毒丸质量

目的建立银翘解毒丸(Yinqiao Jiedu Wan,YQJDW)三波长HPLC指纹图谱(HPLC-FP)联合紫外指纹图谱(UVFP)及燃烧热值谱(CH),从整体角度监控其全部化学物质组成的含量分布情况。方法采用DAD检测器记录YQJDW在203、246和300nm的HPLC指纹图谱,用六级系统指纹定量法(level-6systematic qualified fingerprint method,L6-SQFM)综合评价药品质量等级;测定YQJDW(190～400nm)紫外吸收光谱建立UVFPs突出反映中药中具有不饱和化学键及共轭体系物质的整体信息;用ZDHW6000型微机全自动量热仪测定YQJDW热含量相似度,从整体上表征该制剂中全部化学成分整体质量。最后对三者进行平均整合。结果综合评价结果表明S2～S9质量(1或2级)极好或好;WS1质量(4级)较好;S1和DS1质量(5级)中等;其余质量(6级)一般。结论把HPLC-FP、UVFP和燃烧热3种技术综合联用可覆盖中药化学物质总体信息全貌,具有准确、便捷、快速、重现、有效和可控的特点,是中药质量控制和评价的一种创新模式。从能量角度提供评价中药质量参数是中药质量控制研究和代谢研究的一种新思路和新方法。

五波长高效液相色谱指纹图谱和红外指纹图谱联合鉴定复方丹参片质量

目的建立复方丹参片(compound Danshen tablet,CDST)五波长HPLC指纹图谱(HPLC-FP),测定其红外定量指纹图谱(IR-FP)和一阶导数定量指纹图谱(D-IR-FP),先把五波长HPLC-FP整合后再与IR-FP进行等权整合用以综合评价其质量。方法采用RP-HPLC法,记录254、265、280、290和326 nm 5个波长下色谱图,以丹酚酸B为参照物峰,确立40个共有指纹峰。以系统指纹定量法全面鉴定其质量,将五波长测得100个指纹图谱按均值法生成对照指纹图谱评价样品质量,分别在每个波长下进行评价,再按方均开方值法整合5个波长下的Sm和Pm及α,并重新评价20批CDST质量。用IR-FP和一阶导数定量指纹图谱基于系统指纹定量法进行质量评级。最后把HPLC-FP和IR-FP等权整合。结果 HPLC-FP和IR-FP等权整合后鉴定20批CDSTs的S9质量(1级)极好;S8,S13和S18质量(2级)很好;S4、S6和S16质量(4级)较好;其余13批质量(3级)均好。结论多波长HPLC-FP结合IR-FP联合鉴定中药质量即能突出紫外吸收化学成分也能表达饱和化学键成分对质量评价的贡献作用。

可变波长建立泸州纳溪GAP基地栀子药材高效液相色谱指纹图谱

目的建立泸州纳溪GAP基地栀子药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法以栀子苷为参照物,采用DikmaDiamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱,变波长检测。结果建立了纳溪栀子的HPLC指纹图谱,并确定了19个共有峰,共有峰的参数符合"中药注射剂指纹图谱技术要求"的有关规定。结论方法准确,重复性好,建立的指纹图谱检测标准,可作为纳溪栀子质量评价与品种鉴别的重要依据之一。