SKM-1细胞地西他滨耐药机制中hENT1功能的研究

目的 观察干扰1型平衡核苷转运体（human equilibrative nucleoside transporters 1,hENT1）表达后,地西他滨（DAC）对人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞系SKM-1细胞的增殖、凋亡和去甲基化的影响.方法 采用慢病毒干扰技术沉默SKM-1细胞中hENT1,采用RT-PCR方法检测靶细胞内hENT1 mRNA表达水平,采用CCK-8法检测不同浓度DAC（0.5、1、5 μmol/L）作用24、48及72 h对hENT1沉默SKM-1细胞的增殖抑制情况,应用流式细胞术及Western blot法观察DAC诱导的凋亡情况,采用甲基化特异性PCR检测p15^INK4B去甲基化水平,分析hENT1沉默后DAC的去甲基化作用.结果 hENT1干扰组hENT1 mRNA表达水平（0.253±0.030）相对于对照组（1.000±0.091）显著降低（P＜0.01）;经0.5、1、5μmol/L DAC作用24、48及72 h后,相对于同时期对照组,hENT1干扰组的增殖抑制率均明显下降（P＜0.05）,其中5 μmol/L DAC作用72 h最为明显,hENT1干扰组和对照组分别为（49.41±4.02）％和（33.03±2.47）％（P=0.007）;hENT1干扰组Caspase-3的剪切体水平及Annexin Ⅴ＋细胞比例减少,并且p15^INK4B去甲基化水平也显著降低.结论 hENT1沉默后SKM-1细胞对DAC诱导的凋亡及去甲基化作用敏感性下降.