拟南芥和烟草幼嫩种子RNA不同提取方法的比较

拟南芥和烟草在植物分子生物学研究中都占有非常重要的地位，为了后续试验的顺利进行，欲探索适合提取拟南芥及烟草幼嫩种子总RNA的经济快捷的方法。采用4种方法分别对拟南芥和烟草幼嫩种子的总RNA进行了提取和分析，3种方法所提取的总RNA均能满足一般的下游操作。Trizol法提取的RNA质量低。CTAB-异丙醇法提取的总RNA产量最高，并具有提取步骤少，操作时间短，价格便宜等优点，可用于大量样品提取；百泰克试剂盒提取时间短，可在常温下操作；CTAB—LiCl法提取的总RNA基本无基因组DNA的污染，但是不利于小分子RNA的沉淀。经紫外分光光度计检测，3种方法提取的总RNAOD260/OD230。均在1．80～1．97，表明蛋白质及其他有机溶剂的污染很少，OD260/OD230在2．03～2．37，表明盐类小分子的污染也较少；电泳检测28SrRNA和18SrRNA条带清晰，28SrRNA的亮度基本为18SrRNA的2倍。所提取的总RNA质量较高。将CTAB．异丙醇法提取的拟南芥总RNA用于反转录，可获得高质量的cDNA，dscDNA清晰的分布在100~3000bp之间。

影响苹果赤霉素合成的关键酶基因在新梢和幼嫩种子上的表达分析

【目的】柯巴焦磷酸合成酶(CPS)、贝壳杉烯合成酶(KS)、贝壳杉烯氧化酶(KO)和贝壳杉烯酸氧化酶(KAO)是赤霉素生物合成途径上游的4种关键酶,探讨苹果新梢和幼嫩的种子中编码这4种酶的基因(MdCPS、MdKS、MdKO和MdKAO)在转录水平的表达规律。【方法】以苹果品种‘富士’的新梢和幼嫩的种子为试材,利用实时荧光定量PCR技术,对这4个基因在发育过程中不同时间的转录水平变化进行分析。【结果】这些基因在新梢和幼嫩的种子中均有表达。在新梢中,MdCPS和MdKS、MdKO和MdKAO分别有相似的表达趋势,且在快速生长阶段,MdKO和MdKAO的表达高峰滞后于MdCPS和MdKS。伴随着幼果的迅速膨大,这几个关键酶基因的表达量在幼嫩的种子中急剧增长,且远高于同期的新梢。【结论】这4种关键酶基因的转录水平均与器官的生长速度有关。在生长旺盛的时期,转录水平相对较高。