蜜蜂幼虫芽孢杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立蜜蜂幼虫芽孢杆菌(P.larvae)荧光定量PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中幼虫芽孢杆菌16S r RNA基因保守序列设计特异性引物和探针,经反应体系及条件优化,建立了检测P.larvae Taq Man荧光定量PCR方法。结果表明:该方法与其它病原无交叉反应;最低可检出1.3×10拷贝/μL的阳性质粒,比普通PCR灵敏度高100倍;重复试验显示该方法的批内和批间变异系数均小于3%。应用该方法对50份实验室模拟样品和100份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于美洲幼虫腐臭病(AFB)的早期快速检测及P.larvae定量分析。

幼虫芽孢杆菌和蜂房蜜蜂球菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对P.larvae和M.pluton的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中P.larvae和M.pluton的定量分析。

进口蜂蜜中幼虫芽孢杆菌的分离鉴定及调查

为调查分析进口蜂蜜中携带幼虫芽孢杆菌的情况和菌株特性,本研究对2017年度来自10个国家和地区的71份蜂蜜样品进行幼虫芽孢杆菌分离并纯化培养,将分离的菌株进行生化、16S r RNA基因鉴定和序列分析。结果显示:分离的31株均为幼虫芽孢杆菌,阳性率为43.6%(31/71);16S r RNA基因序列分析结果显示其与幼虫芽孢杆菌(ATCC9545)等同源性在97%以上。31株分离株16S r RNA基因保守性强,同源性达99.8%以上,遗传变异性较弱。本研究在国内首次为进口蜂蜜传播美洲幼虫腐臭病风险分析提供基础数据,为制定进口蜂蜜风险控制措施提供依据。

改进蜂蜜幼虫芽孢杆菌的测定方法

大多数养蜂者对美洲幼虫腐臭病极为担忧,因为有很多州规定病群要烧毁。这种病能够通过饲喂受幼虫芽孢杆菌(Bacillus larvea)孢子污染的蜂蜜传播。我们利用这个改进的方法检验蜂蜜样品,从不同来源的58个样品中,发现33个有幼虫芽孢杆菌。幼虫芽孢杆菌对人是否有害,现在还不清楚。以往蜂蜜带孢子的最低测定水平大概是每毫升6000个孢子。采取我们的方法,现在有可能(?)每毫升蜂蜜中含80个孢子进行测定。

进口蜂蜜中幼虫芽孢杆菌分子分型方法的比较研究

为研究来自不同地域幼虫芽孢杆菌的进化关系,建立其分子分型方法,对来自11个国家和地区的50株幼虫芽孢杆菌分离株进行MLST分型分析,并与ERIC分型比较。结果显示,ERIC法将50株分离株分为ERICⅠ、ERICⅡ与ERICⅣ型,但不能区分不同区域菌株;MLST法将菌株分为ST1至ST8共8种序列型,其中ST1为优势型,占比高且分布广泛;其次为ST5(主要为加拿大分离株),ST3(澳大利亚分离株),ST4(法国与匈牙利分离株),ST6(新西兰分离株),ST2(西班牙分离株),ST7(匈牙利分离株)和ST8(澳大利亚分离株)。与ERIC相比,MLST可以对不同地域的幼虫芽孢杆菌进行有效分型,具有更高的分辨率,可作为后续进口蜂蜜中幼虫芽孢杆菌流行病学调查的工具。

蜜蜂幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR检测方法的建立

为建立新型高灵敏度的幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,针对幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因设计特异性引物和探针。通过对反应体系优化,建立幼虫芽孢杆菌ddPCR检测方法,并对方法的灵敏度、线性关系、特异性及重复性进行评估。结果:建立的方法与其他6株非幼虫芽孢杆菌无交叉反应,具有良好的特异性;线性关系良好(R^2=0. 991 4);灵敏度为2. 9 copies/μL; ddPCR检测的相对标准偏差(RSD)在0. 93%～5. 27%,重复性好。试验表明本研究建立的ddPCR方法可以对幼虫芽孢杆菌进行绝对定量检测。

蜜蜂(Apis mellifera)美洲幼虫腐臭病研究进展

美洲幼虫腐臭病是目前危害蜜蜂幼虫生长的主要细菌病,不合理地使用抗生素防治该病是导致蜂产品抗生素残留的重要因素。本文介绍了它的病原(Paenibacilluslarvaesubspecieslarvae)和流行病学特征,并就目前检测美洲幼虫腐臭病病原和防治该病的研究进展做一综述。

蜜蜂(Apis mellifera)美洲幼虫腐臭病最新研究进展

美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)是目前危害蜜蜂幼虫生长的主要细菌病之一,其致病菌为拟幼虫芽孢杆菌原(Paenibacillus Larvae)。本文介绍了它的流行病学特征,并对目前检测美洲幼虫腐臭病病原和防治该病的最新研究进展作一综述。

蜂蜜中蜜蜂美洲幼虫腐臭病的检测方法研究

美洲幼虫腐臭病是世界上最严重的蜜蜂病害之一,病原体是幼虫芽孢杆菌。在蜂蜜中检测幼虫芽孢杆菌的有效方法很少。本研究将微生物培养法和PCR法结合,改进了对病原菌的培养和分离,再用PCR法进行定性鉴别,从而降低了检出限,提高了检测的准确性。

植物精油在养蜂业中的应用前景

近年来,蜜蜂种群受到多种病敌害的威胁,世界蜂群数量急剧减少,严重影响养蜂业的健康持续发展。植物精油是植物体内的一类次生代谢物质,具有杀虫、抗菌等多种生物活性。相比于其他化学药物,精油具有安全、无污染、不易产生抗药性等优点,在蜜蜂疾病防治方面有着广阔的应用前景。本文介绍了植物精油在5种重要蜜蜂病害(蜂螨、美洲幼虫腐臭病、白垩病、曲霉病和蜜蜂微孢子虫病)防治方面的研究进展。