鹦鹉幼雏病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析

为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段经胶回收后进行克隆测序。结果显示,BFPyV FJ-2016株VP1基因全长为1 032bp,编码343个氨基酸。所编码VP1蛋白的理论等电点为5.77,不稳定指数为40.91,是不稳定蛋白;脂肪系数为74.72;总平均疏水性指数为-0.366。将获得的VP1基因序列提交至GenBank,登录号为:MG148345。核苷酸同源性分析表明,不同时间、地区和品种BFPyV的VP1基因十分保守,相互之间的核苷酸同源性均在99.1%以上。遗传进化分析发现,不同时间和地域BFPyV相互之间亲缘关系较近,但可细分为两个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2)。从宿主品种来看,虎皮鹦鹉源BFPyV各分离株的遗传进化与分离时间及地域无明显关系,虎皮鹦鹉源BFPyV分离株在Clade 1和Clade 2分支均有分布。本研究首次证实福建地区虎皮鹦鹉中存在BFPyV感染,相关研究结果为丰富不同地区BFPyV分子流行病学数据提供参考。

我国一株鹦鹉幼雏病病毒全序列测定与初步分析

采用鸡胚成纤维细胞(CEF)培养增殖首次从湖北省云梦县分离的鹦鹉幼雏病病毒(Budgerigar fledgling disease virus,BFDV)分离株(BFDV-HBYM02),经PCR分段扩增法获得全基因组并完成序列测定.HBYM02株全序列测定结果与GenBank中仅有的六株BFDV全序列进行同源性与进化分析.经BLAST分析,HBYM02株与其他六株BFDV同源性为98%～99%,为同一个基因型.运用Phylip3.5软件构建进化树,分析显示,来源于不同宿主的BFDV与宿主关系紧密,与地理分布没有明显的相关性.

山东一株鹦鹉幼雏病病毒全序列测定与分析

目的:对青岛即墨地区发病的濒死鹦鹉进行诊断,并对BFDV进行全基因测序,分析其遗传进化规律。方法:利用PCR对发病鹦鹉进行BFDV的检测,并设计引物进行BFDV全基因组的测序。结果:BFDV核酸扩增为阳性,经PCR分段扩增法获得全基因组并完成了序列测定。QDJM01株全序列测定结果与GenBank中仅有的七株BFDV全序列进行同源性比较与进化树分析。经BLAST和DNAStar软件分析,QDJM01与其他七株BFDV同源性为99.0%～99.6%,为同一个基因型。结论:此病例为鹦鹉幼雏病病毒感染,来源于不同宿主的BFDV与宿主关系紧密,与地理分布没有明显的相关性。

鹦鹉幼雏病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达

采用湖北省云梦县患鹦鹉幼雏病死亡的虎皮鹦鹉体内分离得到的鹦鹉幼雏病毒 (budgerigarfledglingdiseasevirus,BFDV) ,应用PCR方法获得BFDV主要结构蛋白基因 (VP1) ,克隆到 pMD18 T载体 ,构建重组质粒 pMD18T VP1并进行测序 ,结果显示 ,结构蛋白基因 (VP1)与BFDV欧美分离株的同源性为 96 %～ 99% ,表明VP1是BFDV保守基因 ;将VP1亚克隆到原核表达载体pET32 (+)b ,构建重组质粒 pET32 (+)b VP1,转化菌株BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,经SDS PAGE和Western blot分析 ,克隆在his tag下游的结构蛋白基因获得了高效融合表达 ,表达的融合蛋白分子量约为 5 5kD。为建立快速、灵敏的鹦鹉幼雏病毒血清学检测方法以及研制基因工程疫苗提供了科学依据。

我国一株鹦鹉新病毒的理化性质及鉴定

从湖北省云梦县患病鹦鹉体内分离得到一株新病毒 ,病毒经细胞培养后采用 Sepharose-2 B柱层析纯化 ,在电子显微镜下 ,该病毒粒子无囊膜 ,直径为 4 5～ 50 nm,呈二十面体对称球形颗粒 .回归试验证明此病毒是引发澳州长尾小鹦鹉幼雏病的病原 .此病毒对热、冻融和有机溶剂均具有稳定性 .与澳州长尾小鹦鹉幼雏病病毒的 M7株阳性血清反应 .证明它与 M7株具有抗原相关性 .

我国一株鹦鹉病毒的鉴定及其生化特性

１９９５ 年作者从湖北濒死鹦鹉体内分离到一株新病毒，经鹦鹉胚成纤维细胞盲传四代过渡到鸡胚成纤维细胞，再传至第五代出现细胞病变。适应细胞的病毒纯化后，经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 分析，发现病毒粒子结构蛋白由８ 条多肽组成，分子量范围在１４ ．５ ～６０ ｋ Ｄ 之间。病毒的酸碱氨基酸之比为２ ．５１ ，富含 Ａｓｐ 、 Ｃｌｕ 和 Ｌｅｕ ，而 Ａｒｇ 和 Ｍｅｔ 含量较少。病毒核酸为双链 Ｄ Ｎ Ａ，存在超螺旋型、环型和线型三种形态， Ｇ＋ Ｃ 的含量为４５ ％ 。经限制性内切酶分析，核酸的分子量为３ ．３ ×１０６ Ｄ。根据病毒分类的标准确认为澳州长尾小鹦鹉幼雏病病毒，应归属于乳多空病毒科多瘤病毒属。