miR-34a通过靶向CD47激活PI3K/Akt途径抑制异丙酚诱导的幼鼠海马神经元细胞凋亡

目的研究miR-34a对异丙酚诱导的神经元细胞凋亡的影响,miR-34a、CD 47的靶向关系及在此过程中PI3K/Akt途径的作用。方法提取分离幼鼠海马神经元细胞,在不同浓度异丙酚(1、10、20、40、60、80μg·mL^(-1))处理12h,采用MTT法检测神经元细胞活力,流式细胞术法检测神经元细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测神经元细胞中miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平;将Control组(未转染病毒)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-34a组(转染miR-34a mimics)、pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)、miR-34a+CD 47组(miR-34a mimics和pcDNA 3.1-CD 47共转染)以慢病毒法转染至幼鼠海马神经元细胞中,并用一定浓度异丙酚处理。采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,RT-qPCR检测各组miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平,Western blot检测各组CD47、PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平,双荧光素酶活性实验验证miR-34a对CD 47的靶向作用。结果幼鼠海马神经元细胞活力及凋亡率与异丙酚浓度均成剂量依赖性,且浓度≥20μg·mL^(-1)的异丙酚作用下,随浓度的升高,细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),在异丙酚作用后miR-34a表达量显著降低,CD 47 mRNA表达量显著升高;转染后各组细胞与Control组相比,miR-34a组细胞活性显著升高(P<0.01),CD 47蛋白表达量显著降低(P<0.01),PI3K、p-Akt、Bcl-2表达均显著升高(P<0.01),Bax、Cleaved caspase-3表达均显著降低(P<0.01);CD 47为miR-34a靶基因。过表达CD 47会减弱miR-34a抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡作用。结论miR-34a可通过靶向负调控CD 47并有效抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡,其可能的作用机制为激活PI3K/Akt通路。