抗幽门螺杆菌HP1188蛋黄抗体的研究

目的制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY),即HP1188-IgY,了解其理化特性和生物学活性,为研制H.pylori HP1188-IgY型抗体口服制剂提供实验依据。方法用纯化的重组HP1188蛋白免疫产蛋鸡,以水稀释法结合氯仿有机沉淀法提取蛋黄抗体(HP1188-IgY),采用SDS-PAGE电泳检测其纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot分析抗原特异性。间接ELISA评价HP1188-IgY对热、酸及胃蛋白酶消化作用的耐受情况。分别检测不同浓度HP1188-IgY及不同pH相同浓度HP1188-IgY对H.pylori的生长抑制试验。用MTT法检测不同浓度HP1188-IgY对H.pylori细胞毒活性的中和作用。结果 HP1188-IgY纯度约为68%,蛋白浓度为7.79mg/mL,Western blot结果显示在相对分子质量30000附近出现反应条带。HP1188-IgY具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶消化的能力。HP1188-IgY在体外可抑制H.pylori生长,并具有浓度依赖性和pH依赖性。HP1188-IgY能阻断H.pylori菌体蛋白对Hela细胞的毒性作用,且该作用具有浓度依赖性。结论成功制备了HP1188-IgY,其具有良好的理化性质和生物学特性,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的口服制剂奠定了基础。

消化性溃疡幽门螺杆菌(Hp)清除前后血Hp抗体、PG、GAS变化的研究

目的观察消化性溃疡的治疗效果,探讨幽门螺杆菌(Hp)清除前后患者血清抗Hp-IgG,抗Hp-IgM,胃蛋白酶原(PG),胃泌素(GAS),情况。方法治疗前后查Hp,测血清Hp抗体PG和GAS。治疗组38例,用奥美拉唑,罗红霉素,硫糖铝混悬液2周,奥美拉唑2周;对照组20例,用奥美拉唑4周。患者经治疗,在停药4周后复查,观察溃疡及Hp情况。结果治疗组:胃溃疡(GU)13例,愈合10例(76.92%),未愈合3例(23.08%);十二指肠球部溃疡(DU)25例,愈合18例(72%),未愈合7例(28%),与对照组相比差异有统计学意义。抗Hp-IgG阳性:治疗前34例(89.47%),治疗后15例(39.47%)。PG,GAS水平Hp阳性组治疗前明显增高,治疗后均有下降,DU下降较GU快,P<0.05,P<0.01差异有统计学意义。结论用奥美拉唑、罗红霉素、硫糖铝混悬液治疗Hp阳性消化性溃疡有效。Hp感染引致的高胃泌素对于DU、GU的发生有着重要的作用,Hp与血清(PG)及GAS水平升高有关。

幽门螺杆菌HP0762蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备

目的:表达和纯化幽门螺杆菌HP0762蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体。方法:从幽门螺杆菌SS1中经PCR扩增得到了hp0762基因,将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-28a(+)中,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrap Chelating HP亲和柱纯化重组蛋白,Western印迹进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA和Western印迹检测抗血清。结果:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对HP0762重组蛋白的抗血清,抗体ELISA效价为1:256000,Western印迹分析表明该抗体能特异性识别内源性HP0762。结论:完成了HP0762蛋白的原核高效表达与纯化,并制备了其高效价的多克隆抗体,为进一步对其进行疫苗研制与基因功能研究奠定了基础。

血清Hp抗体ELISA检测法对幽门螺杆菌的诊断评价

目的探讨血清Hp抗体ELISA检测法对幽门螺杆菌的诊断效能。方法选取100例疑似幽门螺杆菌感染患者作为研究对象,在患者行胃镜检查时取胃窦部黏膜活检标本行嗜银染色法检测,同时进行血清Hp抗体ELISA法检测。结果 100例疑似幽门螺杆菌感染的患者中经嗜银染色法检测Hp呈阳性者有81例,在这81例患者中,血清Hp抗体ELISA检测为阳性的有75例,其余6例检测为阴性;19例嗜银染色法检测为阴性的患者中,有4例经血清Hp抗体ELISA检测为阳性。血清Hp抗体ELISA检测法的灵敏度为92.59%,特异度为78.95%。结论血清Hp抗体ELISA检验法对幽门螺杆菌有较高的检测效能,且操作简单、易学易用,值得在临床上推广使用。

14C尿素呼气试验与幽门螺杆菌抗体检测试验用于Hp感染检测的对照研究

目的:回顾性分析14C尿素呼气试验与幽门螺杆菌抗体检测试验检验结果,评价两种技术Hp感染检测的价值,为检测管理提供依据。方法:回顾性分析,2017年1月~2018年12月,宿迁市中医院200例消化性溃疡、胃炎的对象,都进行14C尿素呼气试验与血清幽门螺杆菌抗体检测试验。以联合检查、复查确认的结果作为终诊结果,评价初次检查的结果。结果:最终诊断阳性104例、阴性96例。14C检测的灵敏度低于抗体检测、联合检测,14C检测与联合检测特异度、阳性预测值高于抗体检测,联合检测符合率高于14C检测,幽门螺杆菌阳性预测值符合率低于联合检测、阴性预测值高于联合检测,差异有统计学意义(P<0.05)。检测结果一致性kappa检测结果0.71,属于中度一致。结论:14C尿素呼气试验、幽门螺杆菌抗体检测各有优劣,前者特异度高、后者灵敏度高,联合使用可以提高诊断效率;14C尿素呼气试验操作简单,适合无症状、门诊对象,若为阳性采用血清幽门螺杆菌抗体检测可以排除假阳性,血清幽门螺杆菌抗体检测适合因症就诊的对象。

幽门螺杆菌尿素酶金标抗体检查法与^(14)C-尿素呼气试验检测幽门螺杆菌感染的对照研究

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,简称Hp)感染是慢性胃病发病和迁延不愈的重要因素,确定有无Hp感染是对慢性胃炎和消化性溃疡进行有效治疗的前提条件之一.多数Hp早期感染者患者多无明显的临床症状,内镜下的表现也较轻.我们通过对自然(家庭)人群的Hp-IgG免疫印迹法流行病学调查研究初步发现,无症状者Hp-IgG抗体滴度通常较高,提供Hp感染后是否发病与机体的反应性或感染时间的长短有密切的关系.为此,我们受深圳市康美实业发展有限公司委托对其幽门螺杆菌尿素酶抗体快速诊断试剂盒进行临床验证的同时,对集体人群(学员)和消化门诊患者共1008例进行了幽门螺杆菌尿素酶金标抗体检查法与14C-尿素呼气试验对幽门螺杆菌感染进行了对照研究,现报告如下.

886例体检者幽门螺杆菌抗体分型检测结果分析

目的探讨幽门螺杆菌(HP)感染在健康体检者中的分布及流行状况。方法采用免疫印迹法同时检测血清HP四种抗体(CacA抗体、VacA抗体、UreA抗体、UreB抗体)水平,计算其阳性率,用统计学方法比较各组差异。结果886例健康体检者HP总感染率为63.9%(566/886),其中,I型322例,占总感染率的56.9%(322/566),Ⅱ型244例,占总感染率的43.1%(244/566).按照性别分组,男性共470例,HP阳性291例,感染率61.9%;女性共416例,HP阳性275例,感染率66.1%。不同性别组间感染率和分型进行x2检验,HP感染率、I型感染率和II型感染率差异均无统计学意义(P>0.05),按照年龄分布分为三组,<40岁组共144例,HP阳性76例,感染率52.8%;40-59岁组共525例,HP阳性361例,感染率68.8%;≥60岁组共217例,HP阳性129例,感染率59.4%。结果表明,随着年龄的增大,HP感染率先增后减,其中各个年龄段的I型感染率均比Ⅱ型感染率高。对不同年龄组进行x2检验,<40岁组与360岁组的HP阳性率及I型感染率与40-59岁组间差异均有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ型感染率差异无统计学意义(P>0.05).结论体检人群HP的I型感染率在40~59岁组达最高,且免疫分型在体检人群中存在特殊的分布特征。

健康体检人群血清幽门螺杆菌抗体(IgG)阳性结果调查分析

目的:通过对健康体检人群血清幽门螺杆菌(HP)Ig G抗体的检测,了解健康人群中HP-Ig G阳性携带状况。方法:回顾性分析2015年1~12月我院检验科采用金标法对1338名健康体检人群进行血清HP-Ig G抗体检测的结果。结果:1338名体检者中,HP-Ig G抗体阳性176人,阳性率为13.61%(176/1338),其中男性感染阳性率16.50%;女性感染阳性率10.43%;年龄分布40~50岁和50~60岁HP感染率较高,分别是16.18%和17.11%。结论:应该高度重视HP抗体的阳性率,以预防、控制和治疗HP感染。

HP1188-IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究

目的研究抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188蛋黄抗体(HP1188-IgY)在小鼠体内抗感染作用。方法用Western blot法分析HP1188-IgY抗原特异性。建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量(1、3、5mg/mL)的HP1188-IgY,同时设PBS对照组、阴性对照组、阳性对照组。通过小鼠胃组织H.pylori培养、快速尿素酶实验和组织学检查观察H.pylori定植情况。结果 Western blot结果显示在相对分子质量30 000附近出现反应条带。阳性对照组8周后H.pylori的感染率为100%。HP1188-IgY剂量为3mg/mL和5mg/mL时,小鼠胃黏膜的H.pylori定植量减少,炎性反应减轻(P<0.05)。随HP1188-IgY剂量的增加,感染率降低。结论该实验成功制备了HP1188-IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,为进一步制备预防H.pylori感染的口服制剂奠定了基础。

HP1188-IgY对感染幽门螺杆菌BALB／c小鼠的治疗作用

目的:评价抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)HP1188蛋黄抗体(HP1188-immunoglobulin yolk,HP1188-Ig Y)对BALB/c小鼠胃内H.pylori感染的治疗效果。方法:建立H.pylori感染BALB/c小鼠的动物模型,将建模成功的80只小鼠随机分为8组,每组10只。第1组(抗生素治疗组)、第2组(1 mg HP1188-Ig Y)、第3组(1 mg HP1188-Ig Y+30%硫糖铝)、第4组(5 mg HP1188-Ig Y)、第5组(5 mg HP1188-Ig Y+30%硫糖铝)、第6组(PBS对照组)和第7组(30%硫糖铝对照组)分别连续治疗10 d,每天1次;第8组间隔48 h皮下注射2.5 mg HP1188-Ig Y,共2次;另10只正常小鼠为第9组(健康对照组)。处理完成2周后取各组小鼠胃组织作H.pylori培养、快速尿素酶试验、PCR检测H.pylori特异性vac A和cag A及病理组织学检查,观察H.pylori清除情况并进行评分。结果:在小鼠体内,灌胃(1 mg HP1188-Ig Y+30%硫糖铝)即可有效治疗H.pylori感染引起的胃黏膜损害,其治疗效果与抗生素相似。结论:成功构建了H.pylori感染的BALB/c小鼠模型,选择30%硫糖铝为抗体保护剂,经口服HP1188-Ig Y可抑制小鼠胃内H.pylori感染。

幽门螺杆菌根除后血清抗体的变化及意义

目的：旨在研究幽门螺杆菌（Ｈｐ）清除后血清抗体水平下降规律。寻求抗体下降至何种程度可作为反映Ｈｐ根除的可靠指标，以替代侵入性检查。方法：Ｈｐ感染及根除的判断依据组织学、快速尿素酶反应及ＰＣＲ检查结果。ＥＬＩＳＡ法检测血清Ｈｐ抗体。３４例病人采用三联２周抗Ｈｐ疗法，并于治疗结束后１、３、６个月复查。结果：所有Ｈｐ根除的病例ＩｇＧ均下降，１、３、６个月时下降幅度分别为３９．１８％、５２１９％、６２１７％。以３个月时下降４０％为反映Ｈｐ根除的指标，敏感性是７４％，特异性是１００％，准确度７９４％。结论：观测抗Ｈｐ治疗后的血清抗体的变化能简便。

唾液IgG抗体测定在幽门螺杆菌感染诊断中的价值

目的 :探讨唾液抗幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)IgG测定对Hp感染的诊断价值。方法 :用ELISA法测定67例Hp阳性及20例Hp阴性患者的唾液内抗HpIgG ,并与血清抗体测定结果比较。结果 :唾液抗HpIgG对Hp感染的敏感性为91 1% ,特异性为85 0% ,准确性为89 7 % ,与血清测定结果接近(分别为92 6 % ,90 0%和91 9 %)。结论 :唾液抗Hp抗体测定对Hp感染的诊断有较好的应用价值。

应用纯化抗原检测唾液抗幽门螺杆菌抗体的研究

[目的 ]探讨唾液相关抗体检测的临床意义。 [方法 ]以多株Hp超声上清、重组Hp热休克蛋白A亚单位(rHspA)纯品和重组Hp热休克蛋白尿素酶B亚单位 (rUreB)纯品混合物为抗原 ,采用ELISA方法对 98例患者的唾液和血清同时进行检测。 [结果 ]使用rHspA和rUreB混合纯品进行检测 ,特异性和敏感性明显优于Hp超声上清。诊断Hp感染的优劣顺序为血清IgG、唾液IgG、血清IgA、唾液IgA。[结论 ]唾液的抗体检测可用于Hp感染诊断 ,尤其是唾液IgG抗体。

消化性溃疡、慢性胃炎幽门螺杆菌产毒株抗体的检测分析

目的研究消化性溃疡、慢性胃炎与幽门螺杆菌(Hp)产毒株之间的关系。方法用定性酶联免疫检测法测定患者血清幽门螺杆菌总抗体和产毒株抗体,并做统计学分析。结果胃溃疡(DU)、十二指肠溃疡(GU)、胃炎组检测Hp-Ab阳性结果存在显著性差异(P<005),DU感染Hp率较高;已被Hp感染的DU、GU、胃炎组细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体阳性结果无显著性差异(P>005)。结论幽门螺杆菌与消化性溃疡、慢性胃炎等疾病的发生密切相关。CagA阳性Hp菌株感染是引起上述疾病的一个非常重要的因素。测定产毒株Hp抗体,在Hp感染相关特定性疾病发展中起着重要的作用。

支气管哮喘并发幽门螺杆菌感染患儿粪便抗原与血清抗体特征分析

目的了解支气管哮喘(哮喘)并发幽门螺杆菌感染患儿幽门螺杆茵(HP)感染情况、免疫表型及其血清型的分布特征。方法收集2016年12月～2017年12月支气管哮喘患儿与同龄健康体检儿童的14 C-BUT检测结果,并收集两组人群的粪便与血清样本,分别采用粪便HP抗原和血清HP抗体检测,比较其与14 C-BUT对于儿童HP感染检测结果之间的差异;采用三种HP诊断方法(14 C-BUT,粪便HP抗原,血清HP抗体检测)筛查两组HP感染,比较各组间HP感染的阳性率是否存在差异;另外,对血清HP抗体阳性的哮喘和健康体检儿童,进一步采用HP血清抗体谱进行分析,以了解哮喘并发HP感染儿童HP血清抗体谱的分布,并比较分析两组间抗体谱及血清型分布差异。结果通过在哮喘和健康体检儿童中三种HP诊断方法比较,三者间的差异无统计学意义(χ~2=1.06,0.77,0.72,均P>0.05),在支气管哮喘与健康体检儿童中HP感染率分别为:30.4%～32.6%和35.4%～37.4%,两组间差异无统计学意义(P>0.05),HP抗体阳性哮喘患儿和健康体检儿童中各抗体谱阳性率为:抗VacA-95KD(31.8%,50.9%),VacA-91KD (31.8%,50.9%),UreA-66KD(65.9%,54.5%),UreB-30KD(63.6%,52.7%),其抗体的阳性率在两组之间差异无统计学意义(χ~2=3.64,3.64,1.31,1.19,均P>0.05);仅CagA-116KD抗体阳性率(36.4%,56.4%)在两组间差异具有统计学意义(χ~2=3.92,P<0.05)。另外I型和Ⅱ型HP感染率在两组中的百分比分别为:哮喘组Ⅰ型36.4%(16/44)和Ⅱ型63.6%(28/44),健康体检组Ⅰ型56.4%(31/55)和Ⅱ型43.6%(31/55),两组间差异存在统计学意义(χ~2=3.92,P<0.05)。结论哮喘的发病率与HP的感染率无直接联系,但其与抗-CagA抗体的阳性率存在明显的负相关,且具有特定的血清型和抗体谱分布特征,这为我们进一步研究哮喘与HP感染的内在联系奠定了理论基础。

109例幽门螺杆菌抗体检测分析

胃幽门螺杆菌（helicobacter pylor,Hp）不仅是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,也是引起胃癌的危险因子.Hp在全世界人群中的慢性感染率达50%以上,我国人群感染率达58.07%.临床上诊断Hp感染的方法很多,包括病理学染色检查、^14C-呼气试验（^14C-UBT）、快速尿素酶试验等方法,近年来,应用免疫学方法诊断渐成为研究热点.我们通过对本院就诊的109例感染Hp患者检测血清CagA、VacA、Hsp60、Ure四种抗体,了解其在患者中抗体阳性率及其与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌的关系.