JAK2、ERK1干扰对幽门螺杆菌毒素相关蛋白CagA调控胃泌素基因表达的影响

目的:探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK两条信号转导通路在分析和推断CagA调控胃泌素基因表达机制中的作用.方法:将含cagA基因的表达质粒和幽门螺杆菌(CagA阳性)株分别转染和感染胃癌细胞AGS和SGC-7901,同时用siRNA阻断jak2及erk1基因的表达,48h后通过RT-PCR、Western blot检测细胞中有无CagA蛋白表达,实时荧光定量PCR检测胃泌素的变化.结果:转染组和感染组中均检测到CagA蛋白的表达,与对照相比胃泌素mRNA在转染组分别增加了26.58倍(AGS细胞)和5.59倍(SGC-7901),在感染组分别增加1.88倍(AGS细胞)和8.59倍(SGC-7901),表达量显著增高;siRNA干扰JAK2和ERK1后胃泌素mRNA表达量降低,在转染组JAK2干扰抑制率分别为81.50%(AGS)和99.00%(SGC-7901),ERK1干扰抑制率分别75.55%(AGS)和97.00%(SCG-7901).在感染组JAK2干扰抑制率分别为55.30%(AGS)和90.00%(SGC-7901),ERK1干扰抑制率分别38.30%(AGS)和92.00%(SGC-7901).结果显示ERK/MAPK和JAK/STAT通路阻断,抑制了CagA调控的胃泌素mRNA表达.结论:CagA上调胃泌素基因的表达,siRNA干扰阻断JAK/STAT和ERK/MAPK这两个信号通路,可以抑制CagA对胃泌素mRNA表达的调控.

幽门螺杆菌毒素及相关疾病的研究进展

幽门螺杆菌是引起胃炎、消化性溃疡等多种胃肠疾病的重要病原体。目前认为该菌的主要致病因子是细胞空泡毒素和细胞毒相关蛋白。本文综述这两种毒素的基因特征、基因分型方法、致病机制和临床相关疾病的国内外最新研究成果。

幽门螺杆菌毒素相关基因的克隆、测序及表达

目的 分段扩增、克隆幽门螺杆菌毒素相关基因cag A中间区 cag1,cag2 ,并利用大肠杆菌系统表达 .方法 PCR法扩增 cag A基因 ,双脱氧中止法测序正确后 ,克隆入大肠杆菌表达载体 p BV2 2 0 ,受控于 PRPL 启动子 ,转化大肠杆菌 DH5α,4 2℃进行温度诱导 .结果 PCR分段扩增出 cag A中间区基因 cag1,cag2 ,分别为 975 ,75 5 bp,克隆入 p UC19质粒 ,测序正确 ;在 p BV中构建 cag1,cag2的重组表达载体p BVcag A1,p BVcag A2 ,工程菌诱导后 SDS- PAGE显示新生表达蛋白带 ,Mr:Cag136× 10 3,Cag2 2 7.9× 10 3,均与预期的 cag A蛋白 Mr一致 ,约占菌体总蛋白的 36 %和 2 4 % .结论 成功克隆分段扩增的 cag A中间区基因 ,并可在大肠杆菌DH5α中高效表达 .

幽门螺杆菌毒素因子与儿童胃十二指肠疾病的相关性研究

目的 研究贵阳地区儿童幽门螺杆菌感染的CagA蛋白及VacA蛋白的感染状况 ,以及不同Hp菌株类型与胃肠黏膜病理组织学改变的关系。方法 采用免疫印迹法 (WesternBlot)对 6 7例Hp阳性及 32例Hp阴性患儿血清进行Hp毒素因子的测定及血清学菌株分型 ,参照悉尼胃炎分类标准 ,对不同Hp菌株类型进行病理组织学对比研究。结果 本地区Ⅰ型高毒力Hp菌株检出率 6 8.6 % ,中间型Hp菌株为 2 6 8% ,Ⅱ型Hp低毒力菌株为 4 4 %。Ⅰ型Hp菌株 1 0 0 %存在胃肠黏膜组织学改变 ,胃窦黏膜以中度炎症为主 ,占 73 9% ,重度炎症占 1 1 % ,活动性占 73 9%。十二指肠球部黏膜以中 重度炎症为主 ,占77 3% ,活动性占 6 6 4 %。中间型Hp菌株 72 %存在黏膜组织学改变 ,胃窦黏膜以轻度炎症为主 ,占 5 5 6 % ,活动性占 5 5 % ,十二指肠球部黏膜以轻 中度炎症为主 ,占 5 5 1 % ,活动性占 1 1 1 %。Ⅰ型Hp菌株与中间型Hp菌株在致黏膜炎症改变程度及活动性方面有差异性 (P <0 0 5 )。在淋巴滤泡形成方面 ,Ⅰ型Hp菌株较中间型Hp菌株有显著性差异 (P <0 0 1 )。结论 本地区Hp感染菌株类型以Ⅰ型为主 ,占 6 8 6 % ,同时存在 2 6 8%的中间型菌株及 4 4 %的Ⅱ型菌株的感染。

妊娠期糖尿病孕妇幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达及与糖脂代谢和妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A-IgG抗体(Hp-CagA-IgG)、脂肪因子网膜素-1(Omentin-1)、可溶性血管内皮细胞黏附分子-1(sVCAM-1)表达及与糖脂代谢和妊娠结局的关系。方法选取2021年6月至12月在甘肃武威凉州医院就诊的GDM孕妇118例和健康孕妇118例作为研究对象,分别记为GDM组和对照组。比较两组孕妇Hp感染率,检测血清Hp-CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1水平,糖脂代谢相关指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]水平,Pearson相关性分析CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达与糖脂代谢的关系。记录两组产妇妊娠结局,Logistic回归分析GDM孕妇CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达与妊娠结局的关系。结果GDM组孕妇Hp感染阳性率明显高于对照组(χ^(2)=11.232,P=0.001)。GDM组血清Hp-CagA-IgG抗体、sVCAM-1表达高于对照组,血清Omentin-1表达低于对照组(均P<0.001)。GDM组FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C高于对照组,HDL-C低于对照组(均P<0.05)。血清Hp CagA-IgG抗体、sVCAM-1与FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关(均P<0.001);血清Omentin-1与FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈负相关,与HDL-C呈正相关(均P<0.001)。GDM组不良妊娠结局发生率明显高于对照组(χ^(2)=34.236,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示血清Hp-CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达与不良妊娠结局具有显著相关性(P<0.05)。结论GDM孕妇血清Hp-CagA-IgG抗体、omentin-1、sVCAM-1表达与糖脂代谢显著相关,高水平Hp-CagA-IgG抗体和sVCAM-1表达、低水平omentin-1表达是GDM孕妇不良妊娠结局的独立危险因素。

幽门螺杆菌毒素分型对其根除率的影响

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等消化系统疾病密切相关，一些胃肠外疾病也与其有关，均需根除Hp治疗。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与胃癌关系的病例对照研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)阳性Hp感染与胃癌发病的关系。 方法:采用病例对照研究的方法,选择可能与胃癌发生有关的危险因素制定统一的调查表,胃癌组与对照组进行配比,配比比例为1:2。患者末梢血中HP-CagA抗体的检测采用斑点金免疫渗滤法。胃癌的危险因素分析采用单因素及多因素Logistic回归分析、双因素分层分析。 结果:(1)不同年龄段的胃癌患者CagA阳性Hp感染率差异较大,年龄越小感染率越高,小于50岁胃癌患者100％感染CagA阳性Hp,随着年龄增长,感染率下降,呈显著的负相关(P<0.01)。(2)CagA阳性Hp感染率在高、中、低分化腺癌中分别为8。5％,28.5％,63.0％,彼此间相比,差异有显著性(P<0.05),CagA阳性Hp感染与低分化腺癌关系最密切。(3)胃癌组与对照1组及对照2组的1:1配比的单因素Logistic回归分析中,食酸辣食物、吸烟、进食不规律、精神因素、身体状况较差、饮酒、Ⅰ级亲属共患病及CagA阳性Hp感染等因素与胃癌的发生呈正相关,其中以CagA阳性Hp感染的OR最大,关系最为密切。进食新鲜蔬菜、水果与胃癌发病呈负相关,为胃癌的保护性因素。(4)多因素Logistic回归分析中,CagA阳性Hp感染、吸烟、饮酒、进食不规律、精神因素等因素与胃癌的发生呈明显的正相关。

幽门螺杆菌细胞毒素促进胃黏膜分泌白介素8作用

目的:探讨细胞因子在幽门螺杆菌(H.pylori)免疫病理机制中的作用.方法:48例患者(慢性浅表性胃炎37例,十二指肠溃疡(DU)11例,其中男性31例,年龄21-63岁)胃镜诊断明确后取胃窦及胃体活检,用于H.pylori诊断及体外组织培养.H.pylori诊断采用快速尿素酶试验、H.pylori培养及Warthin-Starry银染色,3项检查中任2项结果阳性诊断为H.pylori阳性.3块胃窦活检组织各加1mLRPMI1640,50mL·L-1CO2和37℃培养24h,ELISA法测上清中白介素(IL)-6,IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α;Lowry改良法测活检组织蛋白含量.另8例RPMI1640中加入H.pylori细胞空泡毒素(VacA).结果以每克蛋白中ng(ng·g-1)或mg(μg·g-1)表示.结果:H.pylori阳性率69%.H.pylori阳性者胃黏膜培养上清中IL-6,IL-8和TNF-α含量均显著高于H.pylori阴性者,其中9例DU患者的IL-8含量为53(18-96)μg·g-1,显著高于慢性胃炎者的36(7-84)μg·g-1(P<0.01).培养液加入VacA后,IL-8的分泌量明显增高(50±38μg·g-1vs68±30μg·g-1,P<0.01).TNF-α的含量虽升高,但无显著差别,对IL-6的含量无影响.IL-8的含量与炎症程度及活动性显著相关(r=0.98,P<0.0025),IL-6和TNF-α的含量与炎症程度无明显关系(r=-0.26和-0.28,P>0.25),但活动性炎时高于非活动性炎者.结论:结果提示IL-8与炎细胞浸润密切相关,H.pylori细胞毒素对黏膜细胞因子的分泌有促进作用.

颈动脉粥样硬化斑块内幽门螺杆菌-细胞毒素相关蛋白A-IgG抗体的表达与颈动脉粥样硬化性脑梗死的关系

目的探讨人颈动脉粥样硬化斑块内幽门螺杆菌-细胞毒素相关蛋白A(Hp-CagA)-IgG抗体的表达水平与颈动脉粥样硬化性脑梗死之间的关系。方法选择24例因颈动脉粥样硬化狭窄行颈动脉内膜切除术且合并Hp-CagA阳性菌株感染的患者,分为有缺血性脑卒中事件组(16例)和无缺血性脑卒中事件组(8例),采用酶联免疫吸附试验检测颈动脉粥样硬化斑块内Hp-CagA-IgG抗体浓度。结果有缺血性脑卒中事件组的颈动脉粥样硬化斑块内Hp-CagA-IgG抗体浓度显著高于无缺血性脑卒中事件组(P<0.05)。结论颈动脉粥样硬化斑块内Hp-CagA-IgG抗体表达的增高可能通过影响斑块的稳定性,导致颈动脉粥样硬化性脑梗死的发生。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与脑梗死发生的关系

目的 :探讨幽门螺杆菌 (HP)及幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 A(Cag A)与脑梗死发生的关系。方法 :用酶联免疫法 (EL ISA)和斑点金渗滤试验 (DIGFA)对 83例连续住院的脑梗死患者血清中幽门螺杆菌 Ig G抗体 (HP- Ig G)和幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 AIg G抗体 (HP- Cag- Ig G)进行测定并设对照组比较。结果 :脑梗死组幽门螺杆菌感染率为 78.3% ,幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 A阳性 HP感染率为 45 .8% ,而对照组分别为 5 6 .3%和 19.7% ,两组比较有显著差别。结论 :慢性 HP感染尤其是 Cag A阳性 HP菌株感染与脑梗死的发生有关 ,而且可能是脑梗死的独立危险因素。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A在脑梗死中的作用

目的探讨幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A(Cag-A)与脑梗死发生的关系。方法使用酶联免疫法测定100名患者和50名健康对照者Cag-A抗体,并对脑梗死患者检测CagA-HP-IgG阳性及阴性情况下颈动脉斑块和脑梗死相关因素水平。结果脑梗死组血清CagA-HP-IgG阳性率为62%,而对照组为38%,两组相比有显著性差异(P<0.05)。脑梗死组CagA-HP-IgG阳性100%存在颈动脉斑块;而CagA-HP-IgG阴性者仅55%存在颈动脉斑块,两者之间存在显著性差异(P<0.05)。CagA-HP-IgG阳性的脑梗死患者CRP水平及血纤维蛋白原水平均显著高于CagA-HP-IgG阴性者(P<0.05)。结论Cag-A阳性菌株感染与脑梗死的发生有关,是其发病的危险因素。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与动脉粥样硬化性脑梗死的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)与动脉粥样硬化性脑梗死的关系。方法测定100例动脉粥样硬化性脑梗死患者(脑梗死组)的CagAHpIgG抗体、中性粒细胞、C反应蛋白(CRP)、血糖、血脂、血纤维蛋白原,应用颈部彩色多普勒超声仪进行颈部血管检测,并与50名健康对照者进行比较。对Hp抗体阳性脑梗死患者给予抗Hp治疗。结果脑梗死组CagAHp抗体阳性率为62%,健康对照组为38%,两组相比差异有显著性(P<0.05)。Hp抗体阳性者颈动脉斑块和狭窄的发生率分别为100%和61%,健康对照组分别为55%和18%,差异有显著性(P<0.05)。Hp抗体阳性组较阴性组血CRP及纤维蛋白原明显升高(均P<0.05)。抗Hp治疗可促进脑梗死的恢复。结论CagA阳性Hp菌株感染与动脉粥样硬化性脑梗死有关,且可能是脑梗死的独立危险因素。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展

1983年．澳大利亚学者Marshall和Warren从慢性胃炎患者的胃黏膜活检标本中分离出幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，以下简称耶），成为胃细菌学研究领域的重要突破。25年来，人们对坳从基础到临床进行了深入细致的研究，逐步认识到咖与慢性胃炎、消化性溃疡、胃MALT淋巴瘤、胃癌以及某些胃肠道外疾病有密切关系。1994年，世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）正式将耶列为Ⅰ类（即肯定的）致癌原。据2000年资料统计．全球每年约有65万人因胃癌死亡．

幽门螺杆菌空胞毒素与血小板的结合反应

目的探讨幽门螺杆菌空胞毒素(VacA)与血小板的相互作用。方法采用流式细胞仪检测VacA与血小板的结合;蔗糖梯度离心法分离血小板细胞膜脂质筏(GEMs),用Western blot检测VacA在血小板表面的结合部位;生物素标记血小板后,用免疫沉降法检测与VacA结合的血小板表面蛋白。结果VacA结合于血小板表面,并存在于GEMs上,结合蛋白的分子量为140kd和40kd。结论VacA可能通过与血小板表面的特异蛋白结合于GEMs上而参与血小板的活化过程。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白对儿童胃粘膜炎症的影响

目的 探讨幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 (CagA)与儿童胃粘膜炎症程度之间关系。方法 采用免疫印迹法检测88例幽门螺杆菌相关性慢性胃炎患儿血清CagA抗体 ,并观察胃粘膜病理变化。 结果 88例幽门螺杆菌相关性慢性胃炎患儿血清CagA抗体阳性74例 ,阳性率84.09 % ,其中胃粘膜轻度炎症12例 (16.22% )、中重度炎症62例 (83.7 % ) ;而14例CagA抗体阴性患儿胃粘膜轻度炎症7例(50.00 % )、中重度炎症7例 (50.00% ) ,两组相比 ,差异有显著性 ( χ2=6.07 ,P<0.05)。 结论 产CagA的幽门螺杆菌能引起胃粘膜较重的炎症。

幽门螺杆菌细胞毒素相关抗原A的表达纯化及其临床研究

目的:cagA^+Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原A(CagA)建立检测血清中抗CagA抗体的方法,以探讨本地区cagA^+ Hp的感染与胃癌的相关性。 方法:构建表达幽门螺杆菌CagA抗原的表达载体,工程菌经IPTG诱导,表达的CagA包含体经Ni柱纯化,变性、复性、透析并经活性鉴定后,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被ELISA板,建立检测正常人及胃癌患者血清抗CagA抗体的DIGFA(斑点金免疫渗滤试验,简称滴金法)和ELISA法。 结果:重组克隆pRSETcagA的工程菌可表达M_r36000的目的蛋白,表达形式为包含体;CagA包含体经纯化后SDS-PAGE显示纯度达98％以上,活性经ELISA证实;正常人64例及胃癌患者血清50例中,cagA^+ Hp的感染率分别为29.7％和62％,胃癌患者cagA^+ Hp的感染率明显高于正常人(P<0.01)。 结论:我们建立的检测血清抗CagA抗体的DIGFA和ELISA均具有良好的可重复性;胃癌患者cagA^+ Hp的感染比例明显高于正常人,CagA阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关,CagA可作为制备防治cagA^+ Hp感染的疫苗的后备抗原。CagA可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原,检测患者血清幽门螺杆菌CagA抗体,有可能为胃癌的发生提供预警作用。