幽门螺杆菌细胞空泡毒素与胃上皮细胞的表皮生长因子信号转导

细胞空泡毒素是幽门螺杆菌的一种重要的外分泌毒素,但其确定的致病机制尚不清楚。近年来研究发现,细胞空泡毒素不仅直接导致细胞的空泡毒性,还可能通过干扰胃黏膜上皮细胞内及细胞间的信息传递,尤其是与表皮生长因子有关的信号转导过程,影响上皮细胞的生长、增殖及组织的修复,是幽门螺杆菌致病机制的重要环节之一。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因毒性片段的克隆与表达

目的 :通过基因于程技术获得具有良好抗原性的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白。方法 :利用PCR从幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素基因中扩增毒性片段V ,克隆及序列分析后在大肠杆菌中高效表达 ,用免疫印迹法 (Westernblotting)检测其抗原性。结果 :序列分析所得片段完整 ,与标准株AF36 170 0比较有 1.5 %的bp及一个氨基酸发生变异。与文献报道的中国菌株相比有高度的同源性。SDS -PAGE显示表达产物相对分子量为 2 70 0 0 ,表达量为 30 %以上 ,Westernblotting显示该蛋白可被HP全菌抗血清所识别。结论 :基因重组Hp细胞空泡毒素毒性蛋白具有良好的抗原性 ,可用于制备Hp感染的诊断试剂与疫苗。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素s1m2型研究进展

幽门螺杆菌（Hp）感染呈全球性分布,在发达国家人群中感染率为30%~40%,在发展中国家可高达60%-70%。Hp感染者发生非萎缩性胃炎较为普遍,仅有少数感染者会出现严重的临床结局,如消化性溃疡、萎缩性胃炎和胃癌等,这种状况与环境因素、宿主特性及Hp毒力因子密切相关。Hp不同分离株间存在巨大的遗传变异,这些遗传学的差别影响着Hp毒力因子的功能和抗原性,

幽门螺杆菌细胞空泡毒素毒性片段基因的表达及其重组蛋白免疫学鉴定

目的采用基因工程技术获得具有良好免疫反应性的重组细胞空泡毒素的毒性亚单位蛋白。方法利用PCR技术从Hp基因组中扩增VacA基因毒性片段,插入原核表达载体pQE30上,测序后,转化表达宿主菌DH5α,SDSPAGE分析表达情况,Westernblot检测其免疫反应性。NiNTA2+树脂纯化后,用重组蛋白免疫兔,HelicoBlot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。结果测序表明目的序列完整,与Genbank中的多株中国菌株相比有高度的同源性。SDSPAGE显示表达产物相对分子量为27000,表达量为30%以上。该蛋白可被Hp全菌抗血清所识别,纯化后可得到纯度为93%以上蛋白质,并证实有良好的免疫原性。结论HpVacA基因毒性片段表达成功,获得高纯度重组蛋白并具有良好的免疫反应性与免疫原性,为研制疫苗和制备诊断VacA(+)株感染试剂盒提供了可靠材料。

检测血清幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗体的间接ELISA法初步建立

目的:以重组细胞空泡毒素(VacA)蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体间接ELISA法,为制备检测Hp毒株感染的试剂盒奠定基础。方法:Ni-NTA2+树脂纯化重组VacA蛋白,用重组蛋白免疫兔,HelicoBlot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。Westernblot检测其抗原性。并以纯化的重组蛋白为抗原,建立检测血清VacA抗体间接ELISA法,以HelicoBlot试剂盒为标准,确定该方法的特异性与敏感性。结果:以重组蛋白为抗原建立的检测血清VacA抗体的间接ELISA法,敏感性与特异性分别是93.1%和92.5%。结论:以重组蛋白为抗原初步建立检测血清VacA抗体的间接ELISA法,敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的PCR检测

目的：建立幽门螺杆菌（ＨＰ）细胞空泡毒素（ＶＣ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。方法：根据ＨＰＶＣ基因图谱，设计了两对顺序特异性引物，分别扩增包括信号肽顺序（４０６－１５１６）和不含此顺序（８１１－１５１６）的基因片段。对１４株经形态学和生化鉴定证实为ＨＰ的菌株提取其基因组ＤＮＡ，以上述引物进行ＰＣＲ。结果：已知ＶＣ阳性的ＨＰ标准株（ＮＣＴＣ１１６３８）、临床分离株ＮＺ７、ＮＺ８、ＨＰ２３、ＨＰ３５、ＨＰ５７、ＨＰ６５、ＨＰ６６、ＨＰ６７和ＨＰ７０共１０株为ＶＣ阳性。扩增产物中均检出ＶＣ特异的１１００ｂｐ、７０５ｂｐ、５４３ｂｐ片段，敏感性约为０．６ｎｇ基因组ＤＮＡ。结论：所设计的引物和ＰＣＲ检测方法正确，可应用于临床检测。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素细胞毒作用机制研究进展

细胞空泡毒素 (VacA)是幽门螺杆菌 (HP)的重要致病因子。VacA先与细胞表面的受体蛋白酪氨酸磷酸酶 β(RPTPβ)结合 ,经受体内吞作用进入细胞内 ,引起晚期溶酶体与胞内体的融合与积累 ,而形成空泡。其原因是VacA作用于细胞内的酶和引起脂质双分子层离子通道形成。VacA还可导致细胞间的紧密连接松弛 ,增强极化上皮单层细胞的渗透性。同时也通过干扰EGF介导的细胞信号转导通路和破坏上皮细胞的正常细胞骨架来抑制细胞的增殖。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素和细胞毒素相关蛋白研究进展

自Marshall和Warisen于1893年首次从胃组织中分离出幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）以来，IIp的研究就逐渐成为热点。Hp是一类主要定植在人类胃肠道呈螺旋状、微需氧的革兰阴性菌。大量研究证明，Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃腺癌和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤（MALT）的发生、发展密切相关。关于Hp的致病机制目前有许多种说法，

幽门螺杆菌细胞空泡毒素在小鼠感染模型中的作用

幽门螺杆菌(Hp)分泌的细胞空泡毒素(VacA)是Hp的一种重要毒力因子,但VacA参与Hp感染和致病的机制仍然不清楚。尽管可以观察到Hp感染后人胃上皮细胞和鼠胃上皮细胞发生的损害,但vacA基因变异的Hp菌株也可以引起限菌小猪和蒙古鼠发生相同的胃炎病变,似乎提示VacA不是毒力因子,这同流行病学及其他相关资料是矛盾的。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的N端疏水区介导跨膜蛋白二聚化

幽门螺杆菌(Hp)的细胞空泡毒素(VacA)在消化性溃疡和胃腺癌中发挥重要的病理作用,能在细胞的脂质双层形成一个通道,诱导真核细胞多种结构和功能的变化。纯化的VacA活性受pH值激活,是形成膜通道所必需,并与其结构变化相联系。已有研究表明VacA的N端在其发挥毒素活性中起重要作用。由于VacA

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白、空泡毒素基因与儿童胃十二指肠疾病的关系

目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 (cagA)、空泡毒素 (vacA)与儿童胃十二指肠疾病类型及胃黏膜炎症程度的关系。方法 采用免疫印迹法测定 88例Hp相关性慢性胃炎 (CG)、4 6例Hp相关性消化性溃疡 (PU)患儿血清cagA、vacA抗体 ,并观察胃黏膜病理变化。 结果 1.CagA、vacA抗体总检出率分别为 85 .0 7%、91.0 4 % ,cagA抗体在CG与PU中检出率分别为 84 .0 9%与 86 .96 % ,两组相比无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;vacA抗体在CG与PU中检出率分别为 89.77%与 93.4 8% ,两组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 2 .134例Hp感染患儿cagA、vacA抗体均阳性 (Ⅰ型菌 ) 113例 ,cagA、vacA抗体均阴性 (Ⅱ型菌 ) 11例 ,cagA、vacA抗体仅一项阳性 (中间型 ) 10例 ,各型菌株在CG、PU中的检出率无明显差异 (P均 >0 .0 5 )。 3.113例Hp Ⅰ型菌株感染引起胃黏膜中重度炎症占 88.5 0 % ,而Ⅱ型菌株、中间型菌株感染引起胃黏膜中重度炎症分别为 4 5 .4 5 %及 5 0 .0 0 % ,两组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 CagA、vacA与CG、PU发病均有关 ,不能作为区分Hp感染致不同胃十二指肠疾病的特异性指标。本地区儿童感染的Hp主要为cagA和vacA阳性的Ⅰ型菌株 。

幽门螺杆菌空泡细胞毒素与细胞毒素相关蛋白

研究证明幽门螺杆菌(Hp)是人类慢性B型胃炎的主要致病因素,与消化性溃疡密切相关,近年的研究提示Hp与胃癌的发生也有密切关系。关于Hp的致病机理还不是很清楚,现有的资料表明Hp分泌的毒素与其致病性有较密切的关系。本文就这一方面的研究作一简要综述。 1988年。

奥美拉唑对胃癌上皮细胞株、幽门螺杆菌及空泡毒素作用的体外试验

目的 :通过奥美拉唑对胃癌上皮细胞、幽门螺杆菌 (Hp)菌株生长及空泡毒素 (VacA)毒性的影响 ,探讨其临床应用价值。方法 :应用不同浓度奥美拉唑和细胞、细菌及VacA共孵育方法观察细胞、细菌的生长状况及空泡毒性的变化。结果 :(1)当奥美拉唑浓度 >10 0mg·L- 1时 ,细胞 10 0 %死亡 ;低于4 0mg·L- 1时 ,光镜下未见上皮细胞的形态学改变。(2 )当奥美拉唑≥ 10 0mg·L- 1时 ,细菌生长完全被抑制 ;低于 30mg·L- 1,细菌的生长不受影响。 (3)低浓度奥美拉唑 (10～ 4 0mg·L- 1)能部分抑制Va cA毒素对SGC 790 1的空泡作用 ,但不抑制毒素对HeLa细胞的空泡毒性作用。结论 :抑制Hp生长所需的奥美拉唑浓度对胃上皮细胞也有损伤作用 ,对空泡毒素无显著的抑制作用 ,临床上只能应用低剂量奥美拉唑 ,通过抑制胃酸分泌治疗酸相关疾病 。

幽门螺杆菌空泡毒素对人牙周膜成纤维细胞的增殖和凋亡的影响

目的:观察幽门螺杆菌空泡毒素(HP Vac A)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和凋亡的影响。方法:人牙周膜成纤维细胞株(h PDLFs100),分别与不同浓度的HP Vac A(0.1、0.2、0.3 mg/m L)共培养,CCK-8方法检测细胞的增殖情况;倒置显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:随着HP Vac A浓度的增大和培养时间的延长,h PDLFs的增殖明显受到抑制;贴壁的PDLFs数量递减,细胞由长梭形逐渐变为圆形,折光性不断减弱,悬浮细胞和凋亡细胞增多;胞浆内大量空泡形成,细胞染色体聚集于核膜,呈块状、浓集和边缘化,表现出典型的凋亡特征。结论:HP Vac A对PDLFs有明显的细胞毒作用,能抑制细胞增殖,并引起细胞凋亡。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A、空泡毒素基因A抗体与胃十二指肠疾病的关系

目的研究不同幽门螺杆菌(Hp)菌株感染与胃十二指肠疾病发生的关系。方法采用蛋白芯片技术测定血清中Hp细胞毒素相关基因A(CagA)、空泡毒素基因A(VacA)抗体。结果消化性溃疡组和胃癌组CagA和VacA抗体阳性者显著高于慢性胃炎组(P<0.01),而CagA和VacA抗体阴性在慢性胃炎组显著高于溃疡组和胃癌组(P<0.01),溃疡组和胃癌组之间CagA和VacA抗体阳性和阴性率比较,差异无显著性(P>0.05)。结论含CagA基因和VacA基因的I型Hp可能是致病力强的高毒力株。

幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素A亚单位的克隆表达和P37抗体的制备

背景:空泡形成细胞毒素A(VacA)是幽门螺杆菌(H.pylori)的重要致病因子,研究VacA的致病机制有助于进一步明确H.pylori的致病机制。目的:原核表达H.pyloriVacA亚单位P37和P58,制备P37多克隆抗体并分析其活性。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增H.pylorivacA基因的p37和p58片段,克隆入原核表达载体pQE31,构建重组质粒pQE31-p37和pQE31-p58,转化大肠杆菌(E.coli)M15,诱导蛋白表达。以镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化融合蛋白,以纯化P37蛋白免疫家兔,获取抗P37血清,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体效价。以蛋白质印迹法(Westernblot)分析P37抗体与VacA的结合能力,观察P37抗体对VacA致胃癌细胞空泡化的抑制作用。结果:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,E.coliM15经诱导后表达相对分子质量分别为37kDa(1Da=0.9921u)和58kDa的P37和P58融合蛋白,经纯化后为单一蛋白。纯化P37蛋白免疫家兔后获得的抗P37血清抗体效价为1×106。P37抗体能中和VacA阳性H.pylori分泌的VacA,抑制VacA对胃癌细胞的空泡化作用。结论:本实验成功构建了原核表达载体pQE31-p37和pQE31-p58,获得了高纯度单一蛋白和高效价P37抗体,该抗体具有中和VacA毒性的作用。

幽门螺杆菌形成空泡细胞毒素的提纯与特征分析

运用水油提、盐析及凝胶过滤色谱法对幽门螺杆菌ＹＣ－１１株所分泌的形成空泡细胞毒素进行了提取。纯化的形成空泡细胞毒素在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为单一条带，分子量约为８７０００，在ＰＨ２．４～６．４的环境中表现高细胞毒性。

幽门螺旋杆菌空泡毒素对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响

目的采用幽门螺旋杆菌空泡毒素干预结肠癌SW480细胞进行体外实验,观察及研究其对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响。方法采取MTT法测定不同浓度幽门螺旋杆菌空泡毒素在不同作用时间内对结肠癌SW480细胞增殖的影响。荧光显微镜下观察幽门螺旋杆菌空泡毒素诱导结肠癌SW480细胞产生的自噬荧光颗粒。Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达。流式细胞术检测经幽门螺旋杆菌空泡毒素处理过的结肠癌SW480细胞凋亡率的变化。结果幽门螺旋杆菌空泡毒素可促进SW480细胞增殖,且呈现浓度依赖性。经幽门螺旋杆菌空泡毒素处理的SW480细胞增殖,12 h出现细胞内自噬荧光颗粒,且随浓度增加,荧光颗粒数目增加。Western blotting分析显示,与对照组相比,经幽门螺旋杆菌空泡毒素作用后Beclin-1及细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/I比值明显升高,且二者的升高呈浓度依赖性。浓度为20 mg/mL的幽门螺旋杆菌空泡毒素可抑制SW480细胞的凋亡。加入幽门螺旋杆菌空泡毒素组细胞凋亡率为3.63%±0.86%,低于SW480细胞正常生长组的9.72%±0.65%;而3-MA+幽门螺旋杆菌空泡毒素组细胞凋亡率为11.26%±1.32%,明显高于幽门螺旋杆菌空泡毒素组的3.63%±0.86%。结论幽门螺旋杆菌空泡毒素有助于结肠癌SW480细胞的体外生存,促进自噬,抑制细胞凋亡。幽门螺旋杆菌感染很可能是诱发结肠癌的重要因素之一。

具有细胞毒素相关蛋白和细胞空泡毒素的幽门螺杆菌与消化性溃疡的相关性研究

目的探讨能产生细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）与细胞空泡毒素（ＶａｃＡ）的幽门螺杆菌（ＨＰ）与消化性溃疡的关系。方法用免疫印迹法检测分析经尿素酶及组织学Ｇｉｅｍｓａ染色证实ＨＰ阳性的血清标本共１１２份，其中慢性胃炎６５份，消化性溃疡４７份。观察两种疾病中ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ检测结果。结果慢性胃炎组、消化性溃疡组的ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ感染率分别为３３．８５％和５９．５７％，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。