广地龙纯化蛋白促进创伤修复作用机制研究

目的:研究广地龙纯化蛋白促进创伤修复的作用机制。方法:采用细胞计数试剂(CCK-8)法,检测给药后对人永生化角质形成细胞(HaCaT)和小鼠成纤维细胞(NIH3T3)增殖的影响;通过划痕实验,检测HaCaT细胞和NIH3T3细胞迁移的影响;利用羟脯氨酸检测试剂盒和酶联免疫吸附试验法,检测NIH3T3细胞培养上清中羟脯氨酸、胶原蛋白-Ⅰ和基质金属蛋白酶-1水平。结果:在一定范围内,地龙蛋白能促进HaCaT细胞和NIH3T3细胞增殖和迁移,分别在0.313 mg/mL和1.250 mg/mL时,细胞增殖活性最强,划痕愈合率最高;给药后NIH3T3细胞培养上清中羟脯氨酸、胶原蛋白-Ⅰ水平明显升高,基质金属蛋白酶-1水平显著降低,在1.250 mg/mL时,与对照组比较最显著。结论:广地龙纯化蛋白组分通过促进HaCaT细胞和NIH3T3细胞增殖和迁移,促进NIH3T3细胞胶原蛋白合成与分泌,抑制胶原蛋白降解,从而促进创伤修复。

酒炙广地龙的炮制工艺优选及HPLC特征图谱分析

目的:探讨酒炙广地龙的最佳炮制工艺,建立其HPLC特征图谱。方法:采用正交试验,以次黄嘌呤、肌苷、蛋白质及水溶性浸出物含量为评价指标,优选酒炙广地龙的炮制工艺;再按最优炮制工艺制备酒炙广地龙样品,建立其特征图谱。结果:酒炙广地龙饮片炮制过程中,4个因素影响程度依次为:炒制温度>闷润时间>炒制时间>加酒量,最佳炮制工艺为加酒量每100 kg广地龙,黄酒量为15 kg,闷润时间30 min,炒制温度80℃及炒制时间10 min。建立以SETSAIL II AQ-C_(18)柱,流动相甲醇(A)-5 mmol/L磷酸二氢钾溶液(B)梯度洗脱的指纹图谱检测方法,15批酒炙广地龙确定了17个共有峰,指认了次黄嘌呤、尿苷、肌苷、尿嘧啶4个共有峰,相似度为0.974~0.999。结论:次黄嘌呤、肌苷、蛋白质及水溶性浸出物含量4个指标可作为广地龙饮片酒炙炮制过程中的质量评价指标,中试验证评判所得最优炮制工艺合理可行;建立的HPLC特征图谱方法准确可靠,为酒炙广地龙的质量控制和现代研究提供了科学依据。

广西广地龙人工养殖产业发展情况调研报告

近年广地龙作为传统中药材在药材市场颇受青睐,干货价格连年上涨,这导致其野生资源急剧下降,使得人工养殖成为趋势,并具有良好前景。本调研报告基于对广西龙跃农业科技有限公司实地调查走访,总结该公司广地龙人工养殖技术体系,以期为地龙人工养殖提供一定技术参考。

不同炮制的广地龙平喘化痰止咳药效比较

目的对广地龙的不同炮制品,蛤粉制广地龙、黄酒制广地龙、白酒制广地龙、醋制广地龙、净制广地龙进行止咳、化痰、平喘药效学比较,以供临床应用参考。方法采用枸橼酸雾法,比较各种炮制广地龙的止咳作用;采用酚红祛痰法,比较各种炮制广地龙的祛痰作用;采用药物引喘法,比较各种炮制广地龙平喘作用。结果蛤粉制广地龙化痰、止咳、平喘作用效果最好,其次是黄酒制广地龙。结论蛤粉和黄酒炮制广地龙止咳、化痰、平喘药效好,保留黄嘌呤、次黄嘌呤等成分最多。

HPLC测定不同产地广地龙中次黄嘌呤的含量

目的:测定不同产地广地龙中次黄嘌呤的含量。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱:Inertsil ODS- EP柱,流动相:水-甲醇-四氢呋喃(93:7:0．05),流速:1．0 mL／min,检测波长254 nm。结果:次黄嘌呤的平均回收率为98．6％,方法精密度(RSD)为0．50％(n=6)。结论:该法可用于不同产地广地龙中次黄嘌呤的含量测定。

HPLC法测定各沪产地龙和广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶和尿苷的含量

目的测定各种沪产地龙与广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量,建立地龙药材质量评价的方法。方法用0.9%生理盐水超声提取地龙,SORBAX SB-Aq色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm,Aglient Co.,Ltd）,流动相：5mmol/L磷酸二氢钾（pH 2.9）,流速1mL/min,检测波长254nm,柱温30℃,进样量10μL,采用HPLC法,同时测定次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷4种核苷类成分的含量。结果次黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率99.37%,RSD=1.36%（n=6）;黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.993 1）,平均回收率91.57%,RSD=1.40%（n=6）;尿嘧啶的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率95.31%,RSD=1.64%（n=6）;尿苷的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率100.21%,RSD=1.98%（n=6）。结论该方法重复性、回收率好,可用于测定地龙与广地龙中次黄嘌呤等4种核苷类成分的含量。

炮制对广地龙次黄嘌呤和肌苷含量的影响

目的:研究广地龙不同炮制方法对次黄嘌呤和肌苷含量变化的影响。方法:分别以黄酒、白酒、醋、蛤粉为辅料炮制广地龙,各条件下制得的样品采用HPLC法测定次黄嘌呤和肌苷的含量。色谱条件:DIKMA C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);甲醇-水(95∶5)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长256 nm,柱温30℃。结果:广地龙不同炮制品中次黄嘌呤和肌苷含量与生品比较有较大差异,次黄嘌呤含量高低顺序为蛤粉制广地龙>黄酒制广地龙>白酒制广地龙>醋制广地龙>净制品,肌苷含量高低顺序为净制品>醋制广地龙>白酒制广地龙>黄酒制广地龙>蛤粉制广地龙。结论:不同炮制方法使广地龙炮制前后次黄嘌呤和肌苷的含量发生改变,为进一步研究广地龙提供了依据。

广地龙对重金属富集特性的初步研究

目的:探讨三种重金属镉(Cd)、汞(Hg)、铅(Pb)在广地龙体内的富集特性。方法:应用半静态条件下的双箱动力学模型,将不同浓度重金属饲养过的广地龙经浓硝酸-过氧化氢低温消解处理后测定重金属含量。结果:地龙在Pb高、中、低浓度的富集速率分别为k1=1.232,K2=1.325,K3=1.058;对Cd的高、中、低浓度富集速率分别为k1=0.1792,K2=0.1753,K3=0.1382;对Hg的富集呈现出波动性。结论:广地龙从土壤中富集Pb的能力明显高于Cd,且随着时间的推移而增大;对Hg的富集作用是先快速吸收,积累到一定浓度时,再快速排出,而后再度吸收。

广地龙药材氨基酸类成分指纹图谱研究

目的:建立广地龙药材游离氨基酸类成分的HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生化法,色谱柱为Kromasil C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)与N,N-二甲基甲酰胺-0.025 mol/L醋酸钠(1∶100,乙酸调pH6.0)(B)为流动相,梯度洗脱,在360 nm波长下检测,柱温为40℃,流速为1.0 mL/min。结果:对15个批次的广地龙药材进行了分析,确定了18个共有峰,不同批次药材相似度均大于0.87,建立了广地龙药材氨基酸类成分的HPLC指纹图谱。结论:建立了广地龙指纹图谱检测标准,为广地龙药材的鉴别和质量控制提供了依据。

广地龙的X射线衍射Fourier谱鉴定

目的 :建立中药材广地龙的鉴定新分析方法。方法 :采用粉末X射线衍射Fourier谱鉴定法。结果 :通过对 1个广地龙药材对照品、4个广地龙中药材进行实验、分析 ,获得了广地龙的标准X射线衍射Fourier图谱及特征标记峰值。结论 :表明X射线衍射Fourier谱鉴定法可用于中药材广地龙的鉴定。

广地龙中琥珀酸的毛细管电泳电导法测定

目的 建立毛细管电泳电导法测定广地龙中琥珀酸含量的方法。方法 以1．0mmoL／L Tris-10mmoL／L H3BP3-0．5％四乙烯五胺-0．025mmol／L十六烷基三甲基溴化铵为分离介质，使用未涂层融硅毛细管柱（50cm×75μm），分离电压-10kV，电导检测器检测。结果 琥珀酸的线性范围5．00～80．0μg/mL（r=0．9998），平均加样回收率98．4％，RSD=2．2％。结论 该法操作简便，快速。

广地龙凝胶剂治疗烫伤的药效学研究

目的探讨广地龙凝胶剂治疗小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤的效果。方法以卡泊姆-940为基质制备广地龙凝胶剂,采用小鼠深Ⅱ度烫伤模型,以创面愈合率、含水量、羟脯氨酸含量作为指标,评价广地龙无糖凝胶、广地龙含糖凝胶的疗效。结果广地龙含糖凝胶能够促进烫伤小鼠皮肤愈合,减轻小鼠烫伤组织水肿程度。结论广地龙凝胶剂具有促进小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的作用。

高效毛细管电泳法测定广地龙饮片中琥珀酸的含量

目的测定广地龙饮片中琥珀酸的含量。方法采用高效毛细管电泳法，以未涂层融硅毛细管（50cm×75μm）为分离柱，1mmol／L三（羟甲基）氨基甲烷·10mmol／LH38O3-0．5％四乙烯五胺-0．025mmol／L溴化十六烷基三甲胺（pH=11．45）体系为电泳介质，采用重力进样，进样时间15s，进样高度20cm，分离电压10kV。结果该方法的线性范围为5．00～80．00μg／mL，平均回收率为98．41％，RSD=2．21％（n=9），广地龙饮片（产地：广西）中的琥珀酸含量为0．8mg／g。结论方法可行，重现性好，能有效地控制广地龙饮片的质量。

广地龙饮片炮制工艺研究

目的:优选广地龙饮片最佳炮制工艺。方法:采用正交试验法,以次黄嘌呤的含量为考察指标,对加水量,淘洗时间,干燥方式3个因素进行研究。结果:广地龙饮片的最佳炮制工艺为加5倍量的水,淘洗3 min,40℃烘干。淘洗时间对次黄嘌呤的含量有显著性差异,加水量和干燥方式对次黄嘌呤的含量影响不显著。结论:本研究对规范广地龙饮片炮制工艺具有一定意义。

甘草水制广地龙饮片质量标准研究

目的建立甘草水制广地龙饮片的质量标准。方法按2005年版《中国药典》附录ⅨH水分测定法中的第一法、附录ⅨK灰分测定法和附录ⅩA浸出物测定法测定;采用HPLC法测定饮片中的次黄嘌呤和肌苷的含量。结果甘草水制广地龙饮片质量标准为:水分含量≤5.0%,总灰分含量≤10.0%,酸不溶性灰分含量≤5.0%,水溶性浸出物浓度≥20.0%,乙醇浸提物浓度≥8.0%;次黄嘌呤含量≥0.006%,肌苷含量≥0.40%。结论建立了较完善的甘草水制广地龙饮片的质量标准,改变了过去仅依靠经验和感官判断的鉴定方法。

正交试验法优选广地龙提取工艺

目的 :研究广地龙水提醇沉法的最佳提取工艺。方法 :通过L9( 34)正交试验法 ,以加水量、提取次数、煎煮时间、醇沉浓度为影响因素 ,用离体兔耳血管灌流法 ,以兔耳血管流量增加百分率为指标 ,优选提取工艺。结果 :加 14倍水 ,煎煮 2次 ,每次 1 5h ,以 70 %醇沉的工艺最优。与水提工艺相比 ,药理实验结果无显著差异 (P >0 0 5 ) ,但重金属和砷的含量大大降低。结论

广地龙缘何价格一直飚升

广地龙又名地龙干,为巨蚓科动物参环毛蚓除去内脏的干燥体,常用中药材,主产于广西、广东.两年来,广西市场广地龙的销势日趋看好,价格一直飚升.以大开广地龙这一等级来说,2003年1～9月每公斤销价(下同)22.5～25元,2005年3月已升至55～60元,升幅高达140%～144.4%,创下了广地龙销价的历史新高.其原因如下.

广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

目的通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750 bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574 bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。

广地龙古今入药品种对比研究

目的:对中药广地龙进行品种考证,并对市售广地龙商品进行品种鉴别,借此判断广地龙古今入药品种的异同。方法:通过查阅本草文献,并整理历版中国药典及地方中药材标准,分析广地龙药材品种的收载情况。采用性状鉴别结合分子鉴定的方法对市售广地龙进行品种鉴别。结果:本草中所记载的"白颈蚯蚓"与现今国家与地方标准收载的钜蚓科环毛蚓属参环毛蚓等多种蚯蚓特征基本一致。目前市售广地龙药材伪品较多,大腔蚓和暗孔远盲蚓为最常见的2种伪品。结论:该研究可为广地龙药材的开发与临床用药提供参考。

广地龙蚓种质量分级标准研究

目的:制定广地龙蚓种质量分级标准,为广地龙的规范化养殖奠定基础。方法:从广西陆川县广地龙养殖场采集50条成熟广地龙作为研究材料,通过测定广地龙的体重、生殖环带直径、体长和活力值4个质量指标,并观察是否存在生殖环带。将广地龙置于体积分数为50%的乙醇溶液中,待其不再挣扎后,测定生殖环带至尾部的长度为体长,记录挣扎时间为活力值。运用SPSS 21.0统计分析软件进行分析,确定广地龙蚓种质量的分级指标,通过K均值聚类法划分蚓种类别,并制定广地龙蚓种质量分级标准。结果:结合生产实践,广地龙蚓种划分为3个等级:一级蚓种体重≥28.0 g,生殖环带直径≥11.0 mm,体长≥25.0 cm,活力值≥80.0 s;二级蚓种体重≥24.0 g,生殖环带直径≥10.0 mm,体长≥23.0 cm,活力值≥60.0 s;三级蚓种体重≥20.0 g,生殖环带直径≥9.0 mm,体长≥20.0 cm,活力值≥40.0 s;并可观察到明显的生殖环带。低于三级为不合格蚓种。结论:建议采用三级以上的广地龙蚓种作为人工养殖的种苗繁育。