无类囊体蓝藻Gloeobacter violaceus基于广宿主质粒的遗传转移系统

无类囊体蓝藻Gloeobacter violaceus的细胞有厚胶质鞘包裹并形成群体,难以进行遗传操作.用注射器反复吸打的方法将胶质鞘剥落,得到大量单个细胞,通过接合转移将外源广宿主质粒pKT210转入G.violaceus.用斑点杂交方法以及对质粒进行酶切图谱分析,均证实外源质粒pKT210确已导入G.violaceus并稳定复制,未发生结构上的变化.从G.violaceus提取的pKT210可转化mcr和mrr基因缺陷的大肠杆菌DH10B却不能转化mcr+mrr+菌株DH5α,表明G.vio-laceus中可能存在甲基化酶系统.

沈抚灌区广宿主石油烃代谢质粒的分离及鉴定

本研究采用"三亲配对外源分离法",从沈抚灌区土壤、底泥和水样中共计分离得到8个广宿主(BHR)石油烃代谢质粒,并通过对其进行抗生素抗性检测和抗性遗传标记,将其转移至大肠杆菌(Escherichia coli)EC100宿主中进行操作.不相容性群分析结果表明:pS3-2C、pS4-6G为Inc P质粒;pS3-2G、pW22-3G、pA15-7G为Inc N质粒;pS7-2G为Inc W质粒;pA23-1G和pA10-1C为Inc Q质粒.采用PCR扩增已报道的石油烃污染物降解基因的方法初步分析其石油烃代谢功能,质粒pS3-2G、pS7-2G、pA23-1G、pW22-3G和pA10-1C上含有编码芳香环羟化双加氧酶基因(phdA)和甲苯单加氧酶基因(touA)的片段;pA15-7G含有编码甲苯双加氧酶和甲苯单加氧酶基因片段;pS3-2C含有编码芳香环羟化双加氧酶、苯双加氧酶和甲苯双加氧酶基因片段;pS4-6G仅含有编码芳香环羟化双加氧酶基因片段.通过宿主范围检测,除质粒pS3-2C外,其余7个质粒均可在变形菌纲(Proteobacteria)α-、β-、γ-亚纲的代表性菌株根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)C58、钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)JMP228、大肠杆菌EC100间进行转移并稳定传代.