广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆表达及免疫保护作用研究

目的对广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因进行克隆、原核表达,并对表达产物的免疫保护作用作出初步鉴定。方法将广州管圆线虫cystatin基因克隆入载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。用纯化融合蛋白隔周免疫小鼠1次,共3次,设GST免疫及未免疫对照组,末次免疫后1w用广州管圆线虫Ⅲ期幼虫攻击感染,3w后剖杀小鼠,计算减虫率及保护率,并测定小鼠特异性IgG抗体水平变化。结果成功构建了pGEX-4T-1/cystatin重组表达质粒,并在大肠杆菌中得以高效可溶性表达,融合蛋白免疫小鼠后诱导产生了58.1%的减虫率及20%的保护率,与对照组相比减虫效果显著(P<0.01)。结论广州管圆线虫cystatin基因能在大肠杆菌中高效表达并可诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫力。

寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿主免疫应答,适应寄生生活中起着重要作用。本文综述了半胱氨酸蛋白酶抑制剂的基本类型、结构特征和作用机制,以及寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展。

表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的Hela细胞的无血清培养

目的:使用无血清培养基培养可稳定表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(Brugia malayi cystatin,Bm-CPI)的人宫颈癌细胞(Hela)。方法:将已获得的Bm-CPI稳定转染的Hela细胞株,进行无血清培养并观察Hela细胞的维持时间和培养过程中Hela细胞的形态变化。结果:无血清培养基培养Hela细胞可维持细胞的正常生长。结论:无血清培养基可以逐步代替含血清的培养基,为后续Hela细胞扩大培养和Bm-CPI基因重组蛋白纯化提供依据。

芳酰基硫脲类克鲁斯氏锥体虫半胱氨酸蛋白酶小分子抑制剂的合成及活性研究(英文)

目的通过设计、合成芳酰基硫脲类化合物发现新的克鲁斯氏锥体虫半胱氨酸蛋白酶小分子抑制剂。方法通过芳酰基硫代异氰酸酯和取代苯胺的反应合成芳酰基硫脲类化合物 ,化合物的结构经HRMS(EI)和1 H NMR光谱确证。结果共合成了 2 0个芳酰基硫脲类化合物 ,化合物的体外抑制克鲁斯氏锥体虫半胱氨酸蛋白酶的活性测定结果表明 :所合成的化合物均有一定的抑制克鲁斯氏锥体虫半胱氨酸蛋白酶的活性 ,其中化合物Id和In的活性高于对照药tf 175的活性。

两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠腹腔渗出细胞一氧化氮产生及细胞因子分泌的影响

目的观察两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)体外对小鼠腹腔渗出细胞(PEC)一氧化氮(NO)的产生及细胞因子分泌的影响。方法无痛处死BALB/c小鼠10只,收集腹腔内液体,制备渗出细胞(PEC),主要为巨噬细胞。将源自旋毛虫(Trichinella spiralis)及广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)的cystatin(Tscystatin,Accystatin)与脂多糖(LPS)刺激的小鼠PEC共孵育,实验分为RPMI组、LPS组、Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组,除RPMI组外,其余3组均提前2 h用LPS(2μg/ml)刺激贴壁细胞制备炎症模型,Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组分别用2μg/ml Accystatin或Tscystatin与LPS刺激后的细胞共孵育,每组6孔,培养24 h后,收集上清,用ELISA和硝酸还原酶法检测上清中α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10等细胞因子和NO的水平。采用SPSS11.5统计学软件处理实验数据。结果ELISA检测结果显示:Accystatin+LPS组细胞上清中促炎因子TNF-α和IL-6分别为(507.50±66.32)和(1 440.49±77.25)pg/ml,较LPS组的(454.15±53.11)和(1 016.2±115.10)pg/ml明显升高(P<0.05)。Tscystatin+LPS组分别为(296.35±55.30)和(793.54±86.61)pg/ml,较LPS组和Accystatin+LPS组明显降低(P<0.05)。RPMI组和LPS组的IL-10分别为(38.80±6.71)和(53.66±7.72)pg/ml,差异无统计学意义(P>0.05),Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组的IL-10分别为(149.74±26.01)和(158.76±19.67)pg/ml,较LPS组均明显升高(P<0.05)。Accystatin+LPS组和Tscystatin+LPS组NO水平分别为(12.54±2.12)和(7.95±1.40)μmol/L,较LPS组的(20.18±3.99)μmol/L均明显降低(P<0.05),且Tscystatin+LPS组NO水平低于Accystatin+LPS组(P<0.05)。结论旋毛虫和广州管圆线虫的cystatin均可抑制小鼠腹腔渗出细胞NO释放、上调IL-10的水平,Accystatin明显促进TNF-α及IL-6的分泌,Tscystatin则明显抑制两种细胞因子的水平。

周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂和3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基因真核表达载体的构建及免疫研究

目的构建周期型马来丝虫（Bm）半胱氨酸蛋白酶抑制剂（CPI）和3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）重组复合基因真核表达质粒，观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应。方法将重组质粒pGEM—T／BmCPI和pGEM—T／BmGAPDH以及真核重组表达载体分别进行双酶切，构建真核重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH。将纯化的pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH和含非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤的寡聚脱氧核苷酸（CpGODN）免疫BALB／c小鼠，并设PBS对照组及空质粒对照组，共免疫3次，每次间隔2周。采用RT-PCR方法检测肌肉组织内的目的基因，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和ELISA法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中IFN-γ、IL-4水平。统计学分析采用t检验。结果pcDNA3．1（＋）-BmcPI／BmGAPDH复合基因真核表达载体免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织内扩增出目的基因。免疫6周后，pcDNA3．1（＋）-BmCPI／CpG组和pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH／CpG组T淋巴细胞刺激增殖指数分别为1．466±0．635和1．610±0．112，显著高于PBS组的1．004±0．019和pcDNA3．1（＋）-CpG组的1．078±0．129（t=64．438、45．318、42．749、34．314，均P〈0．05）。免疫4周后，pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH／CpG组IFN-γ、IL-4水平均高于pcDNA3．1（＋）-CpG组（t=288．053、76．453，均P〈0．05），其中IFN-γ水平与pcDNA3．1（＋）-BmCPI／CpG组相比也有明显提高（t=129．642，P〈0．05）。结论pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH重组复合基因真核表达载体能在小鼠体内表达，并可有效诱导特异性细胞免疫应答。

周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂复合基因真核重组质粒的构建与表达

目的 构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氰酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂（GAPDH/CPI）复合基因真核重组表达质粒,为研制复合多价疫苗奠定基础.方法 依据GenBank中BmGAPDH及BmCPI基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR扩增目的 编码基因.PCR产物经TA克降后,克隆至载体pGEM-T Easy中.取阳性重组质粒pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI以及真核重组表达载体分别双酶切,将酶切后的载体和目的 片段进行连接,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI.将复合基因重组质粒瞬时转染人HeLa细胞后,进行RT-PCR验证,将表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析和鉴定.结果 分别克隆了pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI重组质粒,经酶切鉴定分别得到877、621 bp特异性片段,与预期值吻合.成功构建了复合基因重组真核表达载体pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI,酶切鉴定所产生的片段大小与预期吻合.复合基因真核重组表达质粒转染HeLa细胞后得到高水平表达,SDS-PAGE分析显示重组蛋白相对分子质量（Mr）约为54×103.结论 成功构建了周期型马来丝虫GAPDH/CPI复合基因重组表达质粒,并在哺乳动物细胞内得到正确表达.

广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆、表达广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶1 (AcCBL1)和AcCBL2基因,分析重组半胱氨酸蛋白酶rAcCBL1和rAcCBL2的免疫反应性。方法基于广州管圆线虫Ⅳ期幼虫的cDNA文库筛选获得AcCBL1和AcCBL2基因,构建pET-28a-AcCBL1和pET-28a-AcCBL2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、镍柱纯化后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析重组蛋白表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白对6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清的免疫反应性。结果AcCBL1和AcCBL2基因PCR扩增产物分别约为1 000、1 100 bp。SDS-PAGE结果显示, rAcCBL1为可溶表达蛋白,相对分子质量(M_r)约为37 800; rAcCBL2主要以包涵体形式存在,约为M_r 40 800。Western blotting结果显示, rAcCBL1和rAcCBL2能与6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清特异性结合。结论成功克隆和表达AcCBL1和AcCBL2基因,二者表达产物均具有良好的免疫反应性。

RNA干扰AC-cathB-1基因对广州管圆线虫Ⅰ期幼虫发育的影响

明确广州管圆线虫组织蛋白酶B样基因1(AC-cathB-1)功能,为揭示广州管圆线虫致病机制及生物防治提供理论依据。利用RNA干扰技术抑制广州管圆线虫Ⅰ期幼虫AC-cathB-1基因的表达,测定该基因被干扰后对福寿螺的感染率、死亡率、虫体活力、发育成Ⅲ期幼虫的数量及虫体长度的影响。real-time PCR检测结果显示,AC-cathB-1干扰组基因相对表达量明显下调,AC-cathB-1干扰组与生理盐水对照组的差异显著(P<0.05);与Rubisco干扰组、生理盐水对照组相比,AC-cathB-1干扰组福寿螺的感染率分别降低了10%和16.67%,死亡率分别降低了16.67%和13.34%,虫体活力减弱;AC-cathB-1干扰组的Ⅲ期幼虫的数量分别减少了11.4条和15.1条,发育率降低了34.97%和41.60%。与生理盐水对照组均差异显著(P<0.05)。AC-cathB-1干扰组的Ⅲ期幼虫体长有所减短,但与生理盐水对照组差异不显著(P>0.05)。结果表明,RNA干扰广州管圆线虫Ⅰ期幼虫AC-cathB-1基因可一定程度上抑制Ⅰ期幼虫在中间宿主福寿螺体内发育成Ⅲ期幼虫。证明了AC-cathB-1基因在寄生虫入侵宿主和宿主的相互作用等方面发挥着重要的作用。

AcCystatin减轻卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎病变和促炎细胞因子分泌

目的观察广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)对卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠的影响。方法将24只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、OVA变应性鼻炎致敏组和AcCystatin治疗组。OVA组以OVA为变应原,氢氧化铝为佐剂进行腹腔注射,第15天后OVA滴鼻建立小鼠AR模型;AcCystatin组在致敏时腹腔注射30μg AcCystatin,并在第15天后将含有OVA的混悬液中溶入AcCystatin滴鼻治疗;对照组均以PBS替代OVA。末次滴鼻激发后,按照生物学评分标准对3组小鼠的症状进行评分,HE染色观察小鼠鼻黏膜的病变情况,ELISA检测小鼠血清OVA-IgE、白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL-10和γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平。结果与对照组相比,OVA组小鼠生物学评分明显增加,AcCystatin组小鼠生物学评分较OVA组明显降低。镜下观察OVA组小鼠鼻黏膜纤毛明显脱落,杯状细胞增生,基底膜增厚、组织水肿且黏膜下小血管扩张,而AcCystatin组小鼠鼻黏膜病变明显减轻。同时OVA组血清中OVA-IgE、IL-4、IL-5、IL-6水平较对照组明显升高,IL-10水平降低;与OVA组相比,AcCystatin组OVA-IgE、IL-4、IL-5、IL-6和IL-10水平显著降低。结论AcCystatin减轻OVA诱导的小鼠变应性鼻炎病变和炎性细胞因子分泌。

周期型马来丝虫CPI基因真核表达载体的构建和免疫学研究

目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)基因真核表达载体pcDNA3.1-BmCPI,并观察其在小鼠体内的免疫应答反应。方法以周期型马来丝虫总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段。与pGEM-T Easy克隆载体连接,筛选出阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建pcDNA3.1-BmCPI表达载体。将48只小鼠随机分为4组,每组12只,分别为健康对照组、空质粒组、pcDNA3.1-BmCPI组和pcDNA3.1-BmCPI/CpG组,分别注射PBS 100μl、空质粒pcDNA3.1 100μg、重组质粒pcDNA3.1-BmCPI100μg和重组质粒pcDNA3.1-BmCPI 100μg+佐剂CpG 30μg,采用左后腿胫前肌注射免疫。每2周1次,共3次,于末次免疫后第4周,用RT-PCR方法检测小鼠注射部位肌肉组织内目的基因转录情况。于末次免疫后第4和第6周,用噻唑蓝(MTT)法检测小鼠T淋巴细胞刺激增殖水平。于末次免疫后第2、4和6周,用ELISA法检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)水平。结果成功构建了pcDNA3.1-BmCPI真核表达载体,基因片段大小为621 bp。该真核表达载体免疫小鼠后,从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。末次免疫后第4和第6周,2个免疫组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数均显著高于健康对照组和空质粒组(53.789±1.937、59.735±4.139和61.975±1.029)(均P<0.05),2个免疫组间差异无统计学意义(P>0.05)。于末次免疫后第2、4和6周,pcDNA3.1-BmCPI组和pcDNA3.1-BmCPI/CpG组小鼠血清IFN-γ水平随时间延长逐渐升高,分别为69.544±3.145和106.069±7.518、120.019±5.968和136.229±7.198、149.109±2.700和178.429±1.126,均显著高于健康对照组和空质粒组(28.264±1.129、35.179±1.029和40.110±1.176)(均P<0.05),其中末次免疫后第2和第6周,pcDNA3.1-BmCPI/CpG组IFN-γ水平显著高于pcDNA3.1-BmCPI组(均P<0.05)。于末次免疫后第4和第6周,2个免疫组的IL-4水平均显著高于健康对照组和空质粒组(均P<0.05),2个免疫组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 pcDNA3.1-BmCPI真核表达载体能在小鼠体内转录,并可诱导免疫应答。

水稻抗干尖线虫基因OC-XⅡ的克隆及表达研究

抗性验证试验表明籼稻大白谷抗水稻干尖线虫侵染。为进一步探究此抗性与病程相关蛋白——半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)的相关性,基于水稻基因组数据克隆籼稻大白谷Cystatin家族的OC-XII基因,分别进行OC-XII、JaponicaOC-XII和Indica-OC-XII蛋白质三维结构构建,并与水稻干尖线虫组织蛋白酶B(Cathepsin B)进行分子对接以验证OC-XII基因编码蛋白对Cathepsin B的抑制功能。通过荧光定量qPCR验证OC-XII基因在线虫侵染前后的表达特性,OC-XII蛋白可以与水稻干尖线虫Cathepsin B蛋白质特异结合,线虫侵染后OC-XII基因在浸染12h^2d期间表达量持续上调,侵染3d后下调。表明OC-XII基因在大白谷抗水稻干尖线虫侵染过程中发挥功能,具有对植物寄生线虫进行生物防治的潜力,有必要对其进行深入研究。

周期型马来丝虫复合基因重组质粒和相应表达蛋白的免疫学研究

目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂／3-磷酸甘油醛脱氢酶（BmcPI／，BmGAPDH）复合基因重组质粒，并转染人宫颈癌细胞（Hela）进行重组蛋白表达。将重组质粒和相应表达蛋白进行免疫学研究比较。为研制新型的抗丝虫基因工程疫苗提供理论及实验依据。方法扩增周期型马来丝虫目的编码基因。将目的基因片段和载体分别双酶切后进行连接，构建复合基因重组质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI/BmGAPDH，鉴定后转染Hela细胞，以G418筛选转染细胞，进而通过RT-PCR和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过免疫蛋白印迹法（Westernblot）对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定。60只BALB／c小鼠分5组，每组12只，第2、4、6周分别免疫1次。磷酸盐缓冲液（PBS）对照组为注射PBS100μl；空质粒／CpG对照组为注射pcDNA3．1100μg和CpG30μg；复合重组质粒／CpG组为注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH100μg和CpG30μ；复合重组蛋白／CpG组为注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH复合重组蛋白50P-g和CpG30μg；复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组前2次注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH100μg和CpG30μg；后1次注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH复合重组蛋白50μ和CpG30μg。用RT—PCR方法检测肌肉组织内目的基因；用酶联免疫吸附试验（ELISA）、特异性增殖试验（MTT法）分别检测免疫小鼠血清抗体效价、T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子干扰素（INF）-γ、白细胞介素（IL）-4水平。结果复合重组质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组小鼠免疫4、6周后血清抗体效价（1695．12±1．43、3199．63±1．34）均高于复合重组质粒／CpG组（712．69±1．08、1510．08±1．43，P均〈0．05）和复合重组蛋白／CpG组（800．02±1．34、1510．08±1．43，P均〈0．05）；第6周的复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数（1．629±0．235）高于复合重组蛋白组（1．248±0．110，P〈0．05）；免疫4、6周后，复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组和复合重组质粒／CpG组小鼠血清IFN-γ水平[（101．660±5．101）、（178．265±7．139）mg／L，（102．067±3．722）、（115．148±6．031）mg／L]均高于复合重组蛋白组[（75．438±2．102）、（82．004±3．777）mg／L，P均〈0．05]；免疫后6周，复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组和复合重组蛋白／CpG组的小鼠血清IL-4水平[（75．385±3．318）、（46．363±3．672）mg／L]均明显高于复合重组质粒／CpG组[（36．691±3．443）mg／L，P均〈0．05）。结论pcDNA3．1-BmCPL／BmGAPDH核酸疫苗和相应蛋白疫苗均可诱导BALB／c小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答反应。核酸疫苗-蛋白疫苗联合免疫效果有明显的优势。

Phytocystatin在植物抗病虫中的作用及表达调控

植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂(phytocystatin)在抗线虫、草食动物及真菌等生物胁迫中发挥重要作用。在植物受到线虫或草食动物危害时,phytocystatin能直接抑制其体内一种重要的消化酶——半胱氨酸蛋白酶的活性,从而影响这些害虫的生长和繁殖。然而,phytocystatin抑制植物病原真菌的生长却不依赖于其蛋白酶抑制活性,其抑菌潜在机制目前并不清楚。在植物受到生物胁迫时,phytocystain的表达受多种因子调控,与茉莉酸信号密切相关,但其表达调控的详细网络特征需要更多的研究来阐明。本文总结了phytocystatin在植物抗线虫、草食动物及真菌中的研究及应用,分析了其表达调控机制,并对其未来研究趋势及应用前景进行了展望。

周期型马来丝虫复合表位基因的构建及在真核细胞中的表达

目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶复合表位基因(CPI502/GAPDH720)真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720,并观察其在人宫颈癌细胞(Hela细胞)中的蛋白表达。方法根据T细胞表位预测的基因序列设计引物,以质粒pGEM-T-CPI621为模版,利用反转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,将该片段克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)-BmCPI502。根据软件设计合适引物,RT-PCR分别扩增BmCPI502基因和BmGAPDH720基因,pcDNA3.1(+)、BmCPI502、BmGAPDH720分别进行双酶切后进行连接,构建复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720。将复合表位基因重组质粒转染至Hela细胞后,进行RT-PCR验证,获得与预期相符目的条带;将表达产物利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测。结果获得了原核表达重组质粒pET28a(+)-BmCPI502,经酶切鉴定得到502 bp特异性片段,与预期值符合;成功构建了复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720,酶切鉴定所产生的片段大小与预期符合;复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720转染Hela细胞后得到稳定表达,SDS-PAGE鉴定分析显示重组蛋白相对分子质量(Mr×10^(3))约为50。结论成功构建了周期型马来丝虫复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720,并在真核细胞中获得相应的重组蛋白,为进一步研究重组蛋白纯化和测定其生物学活性奠定了基础。

线虫cystatin对宿主免疫反应的调控

寄生性线虫一般于宿主的消化道或组织内寄生,经常暴露于复杂的宿主免疫系统中而受到持续的免疫攻击但依然可存活数年。分泌免疫调节因子,进而阻断宿主免疫反应、细胞因子网络及信号通路是线虫抵御宿主免疫反应的有效手段之一。半胱氨酸蛋白酶抑制剂（cystatin）就是线虫分泌的重要免疫调控因子之一。本文就近年来线虫cystatin调节宿主免疫反应的研究进行综述。