首次从我国蚊虫中分离到类似广平病毒

为掌握云南省西双版纳州勐海县蚊媒病毒分布状况,用诱蚊灯采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,对阳性分离物进行分子生物学鉴定。2012年7月,在勐海县打洛镇采集蚊虫32批共1 468只,其中三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)28批1 383只,致倦库蚊(Culex quinquefascitatus)2批66只,按蚊(Anopheles)2批19只。用金黄地鼠肾细胞(Golden hamster kidney cell,简称BHK-21)和白纹伊蚊细胞(Aedes albopictus cell,简称C6/36)进行病毒分离,结果有2批三带喙库蚊标本(BNDL1205和BNDL1227)能引起C6/36细胞产生聚合病变,而不能引起BHK-21细胞病变。用黄病毒属特异性引物对这2株阳性分离物进行RT-PCR,扩增得到800bp左右的条带并进行核苷酸序列测定。对核苷酸序列的系统进化分析表明,这2株病毒与分离自越南的广平病毒(Quang Binh virus,QBV)VN180株亲缘性最近,处在同一进化分支;与VN180株的核苷酸同源性分别为83.4%和82.9%,而与既往国内外分离的18株蚊虫黄病毒的核苷酸差异较大。结果表明BNDL1205和BNDL1227病毒为类似QBV,此为国内首次报道。

我国西北地区蚊虫标本中广平病毒的检测

目的对我国西北地区蚊虫携带病毒开展调查,并快速发现重要的蚊媒病毒。方法通过形态学方法对采集蚊虫进行分类鉴定,深度测序和宏基因组分析方法分析蚊虫携带的病毒,结合Sanger测序法补全病毒基因组全序,应用系统进化分析方法分析病毒分子遗传特征。结果2019年7月采集自陕西省的中华按蚊标本和宁夏回族自治区的三带喙库蚊标本均检测到黄病毒属广平病毒。进化分析结果显示,这两株广平病毒序列与在中国辽宁省发现的广平病毒JM17156株具有较近亲缘关系,核酸序列同源性为99.8%。结论本研究首次在我国西北地区中华按蚊、三带喙库蚊标本中检测到广平病毒。

广东省三株蚊媒黄病毒的鉴定和系统进化分析

为了解广东省蚊媒病毒的种类和分子特征,本研究对从蚊子中分离的三株黄病毒提取病毒核酸并进行二代测序,经序列拼接和比对,基因组序列中缺失的gap通过RT-PCR进行扩增填补。用MEGA软件登录GenBank下载黄病毒代表株序列并绘制进化树,同时用ClustalW2软件与新毒株进行氨基酸同源性比对和编码框序列的分析。结果显示利用二代测序技术获得了三株病毒基因组序列的96.35%～98.26%,并用RT-PCR成功补齐所有gap,序列比对显示其中一株与黄斑库蚊病毒核苷酸和氨基酸同源性98.51%,两株病毒与广平病毒的核苷酸同源性分别为97.30%和89.78%。三株病毒都属于黄病毒家族中的未分类黄病毒或昆虫特异性黄病毒,编码区序列中C蛋白的同源性最低,NS5的同源性最高。本研究发现的三株蚊媒黄病毒中,库蚊黄斑病毒在国内为首次鉴定;两株广平病毒核苷酸同源性存在较大差异,可能存在不同基因亚型。