新型广谱β-内酰胺酶抑制剂的设计、合成和活性评价

目的设计合成具有β-内酰胺酶抑制活性的化合物。方法以新型β-内酰胺酶抑制剂阿维巴坦为先导化合物,设计出2类四元内酰胺环化合物。以Boc-D-丝氨酸为起始原料,经过缩合、环合、氨基脱保护、缩合、脱苄、磺酸酯化共6步得到第Ⅰ类目标化合物;由第Ⅰ类目标化合物合成路线的前4步得到第Ⅱ类目标化合物。测定了目标化合物对A类TEM-1、C类Amp C和D类OXA-23的β-内酰胺酶的抑制活性。结果合成了22个未见文献报道的目标化合物,结构经1H NMR和MS确证。浓度均为0.5 nmol/L时,有8个化合物对D类OXA-23酶的抑制率高于阿维巴坦(阳性化合物)。结论该研究对进一步结构优化寻找D类β-内酰胺酶抑制剂具有重要意义。

β-内酰胺酶抑制剂联合不同β-内酰胺类抗生素对耐多药结核分枝杆菌临床菌株体外活性研究

目的体外评估5种β-内酰胺类抗生素和不同β-内酰胺酶抑制剂组合对耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)活性的影响,以期发现针对耐多药结核病最有效的β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂组合。方法选取2021年河南省耐药监测项目收集的MDR-TB菌株,使用最小抑菌浓度(MIC)法测定5种β-内酰胺类抗生素或联合β-内酰胺酶抑制剂对临床MDR-TB的MIC值,并采用聚合酶链式反应(PCR)和DNA测序法分析菌株的bla C突变情况。结果共纳入105株MDR-TB,MIC检测结果显示,多尼培南对MDR-TB抗菌活性最高,其MIC 50值为16μg/mL。与β-内酰胺酶抑制剂联合后,大部分β-内酰胺类抗生素的MIC值明显下降。共有13.33%(14株)的菌株存在bla C基因的突变,主要为3种核苷酸替代突变,分别为AGT333AGG、AAC638ACC、ATC786ATT。BlaC蛋白Ser111Arg和Asn213Thr与同义单核苷酸突变相比,增强了克拉维酸/舒巴坦与美罗培南对MDR-TB的协同作用。结论多尼培南和舒巴坦组合对MDR-TB具有最强的抗菌活性。而BlaC蛋白Ser111Arg和Asn213Thr的替代突变使MDR-TB对美罗培南的敏感性在克拉维酸/舒巴坦协同时增强。

β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性

β-内酰胺酶抑制剂与广谱β-内酰胺抗生素的联合使用是一种有效解决细菌耐药的策略之一。目前上市的β-内酰胺酶抑制剂按其化学结构主要包括氧青霉烯类(克拉维酸)、青霉烷砜类(舒巴坦和他唑巴坦)和二氮杂二环辛烷类化合物(阿维巴坦),本文对临床常见的β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性进行综述,并结合当前药典标准中的有关物质检查项,探讨上述β-内酰胺酶抑制剂的杂质谱控制策略。

β-内酰胺酶抑制剂关键中间体的微通道技术合成

为了优化二氮杂双环辛烷(DBO)类新型β-内酰胺酶抑制剂的关键中间体(2S,5R)-6-苄氧基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸(Ⅰ)的合成工艺,采用微通道技术,通过对反应溶剂、温度、停留时间和碱的优化,以加快反应速率,提高反应产率。结果表明:采用连续流微通道技术,以(2S,5R)-6-苄氧基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸苄酯(Ⅱ)为原料,在氢氧化锂的丙酮水溶液中,温度45℃,反应时间20 min,水解制备得到DBO类新型β-内酰胺酶抑制剂的关键中间体(Ⅰ),经氢谱、碳谱、高分辨质谱鉴定,产物与目标化合物一致,目标产物的收率可达95%。该微通道合成方法显著加快反应速率的同时提高了反应收率,对DBO类新型β-内酰胺酶抑制剂的工业化生产具有应用前景。

β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂点评标准的建立及应用分析

目的建立β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的点评标准,结合临床应用情况,分析其应用效果,促进临床合理使用β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂。方法参照相关指南及专家共识,制订β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的药物利用评价(DUE)标准。通过建立的DUE标准,采用回顾性研究方法,评价2019年7—12月南华大学附属第二医院使用头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的894例病例的用药合理性。结果894例病例中,适应证合理率为93.62%,给药剂量合理率为90.49%,用药疗程合理率为89.37%,微生物送检合理率为75.84%。结论建立的头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦DUE标准能够作为临床合理用药的重要参考,该院头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦使用基本合理。

枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产β-内酰胺酶的抑制作用

【目的】探讨枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶的抑制作用机制,为临床研发β-内酰胺酶抑制剂提供基础依据。【方法】通过青霉素抑菌圈边缘试验筛选产β-内酰胺酶阳性菌株,通过药敏纸片法检测阳性菌株在32、64、128μg/mL枸杞槲皮素作用下对青霉素的敏感性变化;借助多功能酶标仪检测在32、64、128、256μg/mL枸杞槲皮素处理下青霉素含量的变化,并以此来评估枸杞槲皮素对β-内酰胺酶合成及在64、128、256μg/mL枸杞槲皮素作用下对β-内酰胺酶活性的影响。通过AutoDockTools 1.5.6软件对枸杞槲皮素与BlaZ蛋白进行分子对接,采用Discovery Studio 2019 Client软件对分子对接结果进行可视化分析。【结果】从36株金黄色葡萄球菌中共筛选出23株产β-内酰胺酶阳性菌株。药敏纸片结果表明,随着枸杞槲皮素浓度的升高,阳性菌株对青霉素的敏感性增加。多功能酶标仪检测结果表明,枸杞槲皮素可以抑制β-内酰胺酶的合成,并显著抑制β-内酰胺酶的活性(P<0.05)。分子对接结果表明,枸杞槲皮素通过与BlaZ蛋白Ω-loop区域内的保守残基Asn161以氢键结合,影响BlaZ蛋白与β-内酰胺类抗生素的结合。【结论】枸杞槲皮素可以减少β-内酰胺酶的合成,还可通过降低β-内酰胺酶的活性增强青霉素的抑菌作用,具有作为β-内酰胺酶抑制剂的潜在活性,为后续开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供了参考依据。

回顾性分析头孢菌素皮试原则用于头孢菌素类+β-内酰胺酶抑制剂的适用性

目的分析头孢菌素皮试原则对头孢菌素类+β-内酰胺酶抑制剂(CBI)的适用性。方法收集广州市番禺区中心医院2019年1月至2021年7月使用CBI患者的病历资料,回顾性分析患者年龄、性别、既往过敏史、CBI皮试情况和结果、过敏情况。根据研究目的对患者进行分组,分别比较3大组别(①皮试阴性组和未皮试组;②既往有过敏史组和既往无过敏史组;③既往青霉素、头孢过敏史组和既往非青霉素、头孢过敏史组)使用CBI后过敏反应发生率的差异。结果纳入病例7771例,共用5种CBI,皮试率81.09%(6302/7771)。皮试阳性率0.11%(7/6302),既往青霉素皮试阳性或过敏患者皮试阳性率85.71%(6/7)。过敏20例(17例为速发型过敏反应,3例为迟发型过敏反应),主要症状均为皮疹和瘙痒,停药及对症处理后好转,后期改用其他种类抗菌药物,均未发生过敏反应;过敏患者中既往有过敏史患者8例(含青霉素、头孢过敏5例);皮试阴性组过敏率0.25%(16/6295),未皮试组过敏率0.27%(4/1469),2组过敏率比较差异无统计学意义(P>0.05)。既往有过敏史组过敏率均比既往无过敏史组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。而既往青霉素、头孢过敏史组和既往非青霉素、头孢过敏史组过敏发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论常规皮试对CBI过敏反应无明显的预测价值,但对既往有过敏史患者有参考价值。既往有过敏史的患者,使用CBI发生过敏的风险比既往无过敏史的患者高,其他过敏原导致过敏的风险并不亚于青霉素类或头孢菌素类。头孢菌素皮试原则总体适用于CBI,但最适皮试液浓度及过敏原风险评估标准仍需进一步研究。

β-内酰胺酶抑制剂复方制剂临床应用分析

目的分析β-内酰胺酶抑制剂复方制剂在兰州大学第二医院的临床应用情况,为合理用药提供参考。方法通过兰州大学第二医院信息管理系统调取2017—2020年β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的使用信息,包括药物名称、规格、销售总量及销售总金额。结果2017—2020年,大部分β-内酰胺酶抑制剂复方制剂用药频度总体呈下降趋势,限定日费用均逐渐下降。医院大部分β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的使用较合理,而注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠(1.125 g/支)及注射用哌拉西林钠舒巴坦钠(1.5 g/支)的销售金额排序与用药频度排序的比值(B/A值)在一定时期内均偏离1。结论医院需进一步加强β-内酰胺酶抑制剂复方制剂合理使用与规范化管理。

超广谱和耐酶抑制剂β-内酰胺酶的研究进展

产超广谱和耐酶抑制剂 β -内酰胺酶是革兰阴性菌对 β -内酰胺类抗生素耐药的重要原因。近几十年 ,这些酶的种类迅速增加 ,掌握它们的分类、构效关系和耐药模式等方面的知识 ,对临床合理使用抗生素和防止耐药菌的产生具有重要意义。对超广谱和耐酶抑制剂 β -内酰胺酶的最新分类 ,它们水解 β -内酰胺类抗生素的主要结构特点 ,及其氨基酸位点突变对构效关系的影响进行了介绍。

克拉维酸和舒巴坦两种酶抑制剂检测超广谱β-内酰胺酶的比较

为了比较克拉维酸和舒巴坦两种酶抑制剂检测超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)的差异。采用纸片扩散法检测了 30 7株 4种革兰阴性杆菌。两种酶抑制剂对大肠埃希菌检测结果一致 ;肺炎克雷伯菌两种酶抑制剂共同检出 8株 ,各单独检出 2株 ;铜绿假单胞菌共同检出 6株 ,克拉维酸单独检出 1株 ,舒巴坦单独检出 7株 ;鲍曼不动杆菌共同检出 7株 ,舒巴坦单独检出 17株 ,克拉维酸单独未检出。底物的轮廓 (substrateprofile)对酶的检测有较大的影响 ,尽管两种酶抑制剂检测大肠埃希菌无差异 ,而肺炎克雷伯菌可能存在Bush模式以外的超广谱 β 内酰胺酶 ,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌耐药机理尚需进一步研究 ,以目前的方法检测ESBL不合适。

螯合剂类金属β-内酰胺酶抑制剂的研究综述

金属β-内酰胺酶为β-内酰胺酶中的B亚群,如果细菌带有此酶,即会对青霉素类、碳青霉烯类以及头孢菌素类抗生素产生耐药性,细菌产生耐药性并发生转移,导致出现自然界中的细菌出现广泛耐药,单一品种的抗生素难以达到原有效果。螯合剂类金属β-内酰胺酶抑制剂,是与金属酶活性中心Zn2+离子结合或者螯合,从而抑制金属β-内酰胺酶活性。本文在针对金属β-内酰胺酶分类及其分子结构实施分析基础上,综述几种螯合剂类金属β-内酰胺酶抑制剂,以为之后螯合剂类金属β-内酰胺酶抑制剂的研究以及开发提供相关依据。

β-内酰胺酶抑制剂复合抗菌药物的使用量与产ESBLs细菌分离率关系研究

目的 探讨临床上产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)细菌分离率的增加 ,是否与含 β 内酰胺酶抑制剂的复合β 内 酰胺类抗菌药物使用量有关 ,为抗菌药物的规范合理使用提供依据。方法 用SPSS10 0统计软件包 ,统计分析 1998～ 2 0 0 2年 ,每年含β 内酰胺酶抑制剂的复合 β 内酰胺类抗菌药物使用量与产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率间的相关性关系。结果 5年来含 β 内酰胺酶抑制剂的复合 β 内酰胺类抗菌药物使用总量从16 5 4kg/年增加到 15 6 86 8kg/年 ,增加了 84 8 4 % ;培养总样本数从 10 897份增加到 185 6 7份 ,增加了 70 4 % ;两者间相关系数r =0 884 ,P <0 0 5 ;抗菌药物使用总量与细菌分离株数间的相关系数r =0 4 4 9,P >0 0 5 ,与产ESBLs细菌总分离率间的相关系数r =0 933,P <0 0 5 ;年平均每份送检样本中此类抗菌药物的使用量与细菌分离株数间的相关系数r =0 389,P >0 0 5 ,与产ESBLs细菌总分离率间的相关系数r =0 889,P <0 0 5。结论 产ESBLs细菌分离率的增加与含 β 内酰胺酶抑制剂的复合 β 内酰胺类抗菌药物使用总量及年平均每份送检样本中此类抗菌药物的使用量呈正相关 ,提示临床使用抗菌药物应更具合理性。

β-内酰胺酶抑制剂研究进展

β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β-内酰胺酶,常与阿莫西林联合应用,可使阿莫西林对某些细菌的MIC值降低。随着抗生素的大量使用以及具有β-内酰胺酶相关的耐药性的细菌的增加,许多β-内酰胺酶抑制剂相继被发现。根据β-内酰胺酶抑制剂的结构,主要将其分为含有β-内酰胺环结构的抑制剂和不含β-内酰胺环结构的抑制剂。本文就目前国内外β-内酰胺酶抑制剂的研究现状进行综述。

β-内酰胺酶抑制剂高通量筛选模型的建立

目的建立β-内酰胺酶抑制剂的高通量筛选模型。方法从产β-内酰胺酶菌株中提取酶液,以硝噻吩为底物,三唑巴坦作为酶抑制剂,通过检测反应体系吸光度的变化,来判断酶促反应的进行情况以及酶抑制剂的效果,建立384微孔板的高通量筛选模型,优化反应条件并对此模型进行评价。用此模型对7360个化合物组成的随机库进行筛选。结果确定反应体系条件为:最佳测定波长为482nm,反应温度为30℃,选取15min时间点检测,底物硝噻吩终浓度为0.1mmol/L,评价指标Z′因子在0.8～0.9范围内,表明此模型可以用于高通量筛选。基于此模型初筛出65个有抑制活性的化合物。结论建立的β-内酰胺酶抑制剂高通量筛选模型具有快速、稳定和微量的特点,是寻找和发现有潜在活性的β-内酰胺酶抑制剂的有效手段。

2001年～2003年重庆市18家医院β-内酰胺酶抑制剂复合制剂利用分析

目的 :评估 β-内酰胺酶抑制剂复合制剂的利用现状及其发展趋势。方法 :调查重庆市18家医院在2001年～2003年应用β-内酰胺酶抑制剂复合制剂的组成、剂型、规格、药品名称、生产厂商、用药金额等 ,分析其临床应用情况。结果 :β-内酰胺酶抑制剂复合制剂在2001、2002、2003年的用药金额分别为2229、2937、4119万元 ,年平均增长率为26.41% ;3年中与舒巴坦、克拉维酸、他唑巴坦的复合制剂金额分别为6280、2276、729万元 ,占该类药物总金额的67.64 %、24.51%、7.85% ,年平均增长率分别为32.20%、35.93%、94.50 %。结论 :β-内酰胺酶抑制剂复合制剂的用药量逐年快速增长 ,预计其市场需求量还会进一步上升。

β-内酰胺酶抑制剂研究进展

细菌耐药问题日益严峻,已经引起了公众的广泛关注。β-内酰胺类抗生素是应用最广的抗生素,但是细菌对此类药物的耐药严重降低了药物的治疗效果,而产生β-内酰胺酶是β-内酰胺类药物耐药的主要机制,研制β-内酰胺酶抑制剂,以此作为增效剂与β-内酰胺类抗生素联用,可有效恢复细菌对β-内酰胺类药物的敏感性。临床上广泛传播的β-内酰胺酶有丝氨酸β-内酰胺酶和金属β-内酰胺酶。目前,在增效剂的研宄中,己经获得了多种有效的丝氨酸β-内酰胺酶抑制剂,许多金属β-内酰胺酶抑制剂仍处于研宄阶段。此外,为了应对由多种β-内酰胺酶引起的多重感染,研发丝氨酸β-内酰胺酶/金属β-内酰胺酶双重抑制剂也是逆转β-内酰胺类抗生素耐药性的新思路。本文综述了β-内酰胺酶抑制剂的研宄进展,为研制新型β-内酰胺酶抑制剂提供借鉴。

β-内酰胺酶抑制剂与β-内酰胺类抗生素联合应用的抗菌作用评价

β－内酰胺类抗生素是临床上应用最广，抗感染效果最好的一类抗菌药物，但目前细菌对这一类药物耐药已成为一个严重的问题。细菌耐药机制中最主要的机制是细菌通过产生β－内酰胺酶破坏β－内酰胺类抗生素。解决细菌产酶耐药问题的方法之一是开发β－内酰胺酶抑制剂，与β－内酰胺类抗生素联合应用，通过酶抑制剂灭活β－内酰胺酶，从而使不耐酶的抗生素发挥它们原有的抗菌作用。现有的酶抑制剂ＢＲＬ４２７１５、克拉维酸、他唑巴坦和舒巴坦均有较好的抑酶作用，并能增强不耐酶抗菌药物对产酶耐药菌的抗菌作用。体外抗菌试验结果证明ＢＲＬ４２７１５与抗菌药物联合，增强原抗菌药物的抗菌作用效果最明显，他唑巴坦和克拉维酸次之、舒巴坦稍弱。它们与抗菌药物联合的临床试验结果也证明了这一点。

β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦与氨苄西林联用的体内外抗菌作用研究

试验观察了β 内酰胺酶抑制剂舒巴坦与氨苄西林联用的体内外协同抗菌作用。结果表明 :氨苄西林与舒巴坦联用对 5个标准菌株的抗菌活性与氨苄西林相似 ,对除绿脓杆菌外的 6株临床分离菌株的体外抗菌活性较显著高于氨苄西林。临床分离菌株均可产生 β 内酰胺酶并可不同程度的水解氨苄西林 ,在不加入舒巴坦时 ,β 内酰胺酶对氨苄西林的水解率为 5 7 6 4%～ 10 0 % ,加入舒巴坦时 ,β 内酰胺酶对氨苄西林的水解率降低。舒巴坦对临床分离菌株产生的 5种 β 内酰胺酶均有抑制作用 ,在 1μg/ml时的抑制率为 9 35 %～ 6 7 2 0 % ,10 μg/ml时为 5 0 %～93 19% ,显示出明显的抑酶保护作用。氨苄西林与舒巴坦联用对氨苄西林耐药菌株引起的鸡白痢有明显的治疗效果 ,按 5mg/kg肌注的治愈率为 91 18% ,显著高于氨苄西林混饮 ,与舒他西林相似。提示二者联用体内体外均有协同抗菌作用 ,值得进一步研究。

借助处方前置审核系统实施含β-内酰胺酶抑制剂复合制剂精细化管理

目的促进含β-内酰胺酶抑制剂复合制剂(简称“含酶抑制剂复合制剂”)的处方前置审核及临床合理使用。方法借助处方前置审核系统(MIND系统)开发自维护规则库,对含酶抑制剂复合制剂的处方权限、病原学送检、用法用量、联合用药、疗程等进行精细化设置;统计管理前后药品的使用率、会诊率、疗程,以及抽样点评中医嘱合格率,评价精细化设置的效果。结果精细化管理后,含酶抑制剂复合制剂使用率由8.25%降至5.82%,会诊率由11.43%提高至77.40%,平均疗程缩短,抽样点评医嘱不合格率由38.33%降至4.76%,适应证、用法用量、联合用药及疗程不适宜等问题均显著改善。结论对含酶抑制剂复合制剂的信息化精细设置可促进前置审方工作的开展,促进药品的合理使用。

临床产酶大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌对β-内酰胺酶抑制剂敏感性降低的特征研究

目的 探讨临床产β-内酰胺酶大肠埃希氏菌及肺炎克雷伯氏菌对氨苄西林 /舒巴坦 (ABPC/SB)、阿莫西林 /舒巴坦 (AMPC/ SB)敏感性降低的特征。方法 琼脂二倍稀释法、酶动力学参数及等电点测定、质粒提取和转化。结果 临床产酶 3株大肠埃希氏菌 Ec1、Ec2、Ec3及 4株肺炎克雷伯氏菌 Kp1、Kp2、Kp3、Kp4对 ABPC/ SB、AMPC/ SB的敏感性明显降低 (MIC≥ 12 8mg/ L ) ,(1) Ec1、Ec2、Ec3及 Kp1对所试头孢菌素类及碳青霉烯类敏感 ;仅见一约 35 kb的质粒 ;含有单一β-内酰胺酶 (p I,5 .4 ) ,与 TEM- 1相比 ,各酶活性降低 ,对β-内酰胺类抗生素的相对水解率下降 ,对 AMPC的 Km值比 TEM- 1高 2～ 4倍 ,三唑巴坦 (TB)、舒巴坦 (SB)、克拉维酸 (CA)对各酶的 IC50 比 TEM- 1高 4～ 32 0倍 ,表明此 4株菌对青霉素类亲和力明显降低 ,对酶抑制剂的敏感性显著下降 ;(2 ) Kp2、Kp3、Kp4与 Kp1不同 ,对 ABPC/ SB、AMPC/ SB和头孢菌素类均耐药 ,含有多个质粒 ,显示多个β-内酰胺酶 ,p I值分别为 5 .4、7.6、8.2等 ;而 4株质粒转化菌株所提取β-内酰胺酶的 p I值均为 5 .4 ,且均仅见一条约 35 kb的质粒 ,对 ABPC/ SB、AMPC/ SB获得了耐药 ,但仍对头孢菌素类、碳青霉烯类敏感。结论 本研究中大肠埃希氏菌。