不同品种香蕉内生菌分离及广谱拮抗菌的筛选

旨在探究抗病品种与易感品种香蕉的健康株和病株内生菌与其中广谱拮抗菌的主要分布规律,并对广谱拮抗菌进行拮抗活性的测定。以样品根、球茎、假茎、叶为材料分离培养内生菌,在实验室条件下,筛选对供试的10种香蕉致病菌均有良好拮抗活性的菌株并测定它们的拮抗活性,对活性最强的菌株进行形态学、16S rDNA序列同源性分析。结果显示,分离得到内生菌438株,其中细菌240株,放线菌142株,真菌56株。抗病品种南天黄病株中分离得到的内生菌最多,共计128株。内生菌数量在香蕉植株中的分布呈现规律为:根部>球茎部>假茎部>叶部。内生真菌在各香蕉种病株中的分布最广泛。筛选出具广谱活性的放线菌10株、细菌2株。其中内生放线菌菌株041的广谱拮抗活性最强,最大抑菌带宽为28.13±1.89 mm。对广谱拮抗内生放线菌菌株041、04-1、19-1、03A-1进行的形态学和16S rDNA序列分析表明,它们属于链霉菌属。

广谱拮抗菌B96-Ⅱ的分子鉴定及GFP标记

用PCR方法扩增的广谱拮抗菌B96-Ⅱ的16S rDNA经序列测定和BLAST同源序列比较,结合传统的形态观察、生理生化特征鉴定,确定了B96-Ⅱ分类地位为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。将含有绿色荧光蛋白基因和氯霉素抗性基因标记的大肠杆菌一枯草芽孢杆菌穿梭表达载体(pNW33N-gfp-B96-Ⅱ-N)通过原生质体法转化B96-Ⅱ,获得表达GFP的4株标记菌株,在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光。室内平板抑菌试验结果表明,GFP标记对B96-Ⅱ的广谱抑菌活性没有影响。

两株具有广谱抗菌性的缓征链球菌的安全性评价

目的通过动物实验对分离于健康儿童口咽部的2株缓征链球菌菌株4-2、4-19进行安全性评价,为呼吸道益生菌的制备提供安全依据。方法对SPF级昆明种小鼠灌胃给予含有菌株4-2和4-19的菌液,观察实验动物是否出现死亡、急性毒性体征、体质量变化、采食量变化、血清淀粉样蛋白A变化和细菌移位生长情况,并对结果进行统计学分析。结果给药后,未发现实验小鼠死亡及急性毒性体征,未观察到细菌移位生长情况,给予菌株4-2后雌性和雄性剂量组与对照组间差异没有统计学意义(F=0.697 0,P=0.567 0;F=1.289 0,P=0.312 0)。给予菌株4-2的1 d后,雌性小鼠低、中剂量组较其他组别体质量变化量小(F=4.402 0,P=0.019 0),雄性小鼠高、中、低剂量组体质量变化量小于对照组(t=-0.800 0,P=0.035 0;t=1.000 0,P=0.011 0;t=-0.800 0,P=0.035 0);给予菌株4-19的1 d后,雌性、雄性小鼠体质量变化量与对照组差异无统计学意义(F=2.024 0,P=0.151 0;F=2.507 0,P=0.096 0)。给予菌株4-2的7 d内,雌性小鼠中剂量组和低剂量组采食量大于对照组(t=0.171 4,P<0.001 0;t=1.276 1,P=0.001 0),雄性小鼠剂量组与对照组采食量差异无统计学意义(F=0.327 0,P=0.806 0);给予菌株4-19的7 d内,低剂量组采食量大于对照组(t=2.137 5,P=0.036 0),雄性小鼠剂量组与对照组采食量差异无统计学意义(F=2.631 0,P=0.073 0)。结论菌株4-2、4-19在为期7 d的急性毒性动物实验中,未发现毒性表现,可用于呼吸道益生菌菌株的选择。